◆作者：郝燕娟 劉麗英 黃佳吟 洪英達

◆單位：廣州匯標檢測技術中心，廣東廣州510670

乳酸（學名：2-羥基丙酸），分子式是C3H6O3。它是一個含有羥基的羧酸，分子結構式為CH3CH（OH）COOH，有自聚合性。乳酸作為一種重要的有機酸，廣泛應用于食品、農業(yè)、環(huán)保、醫(yī)藥、飼料、日用品、化工等領域。

在常溫狀態(tài)下，兩個乳酸分子中的羥基和羧基會發(fā)生聚合，形成乳酸酐，如果不水解用液相的方法檢測乳酸的結果會有差異，原因就是乳酸自聚合形成酸酐。在酸度調節(jié)劑檢測乳酸含量的液相方法檢測中，需要水解把聚合的乳酸酐打開形成游離的乳酸之后進行檢測，如果沒有進行水解直接檢測，只檢測的是游離乳酸，不代表實際產品中真實的乳酸含量，檢測的結果不準確。本文將乳酸原料以及乳酸產品（酸度調節(jié)劑）進行水解處理，優(yōu)化實驗方法，建立酸度調節(jié)劑中乳酸檢測方法，為企業(yè)檢測提供參考。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器

高效液相色譜儀（配紫外檢測器或二極管陣列檢測器），萬分之一分析天平，超聲波清洗儀。

1.1.2 試劑與藥品

純水（符合GB/T 6682一級水的要求）、乙腈（色譜純）、磷酸（優(yōu)級純）、乳酸對照品（Dr.Ehrenstorfer，CAS 號 50-21-5），純度≥89.9%。乳酸的化學結構式如圖1所示。

圖1 乳酸的化學結構式

1.1.3 試驗材料

試驗使用的樣品為市面均可購得的酸度調節(jié)劑以及80%的乳酸原料。按GB/T 14699.1的規(guī)定抽取有代表性的飼料樣品，用四分法縮減取樣。然后按照GB/T 20195的規(guī)定制備樣品，混勻，裝入磨口瓶中，備用。

1.2 標準溶液及試劑配置

1.2.1 標準儲備液的配置

準確稱取乳酸標準品20mg（精確至0.1mg），加水溶解并定容至10mL棕色容量瓶，此為標準儲備液，4℃保存，保存期為一個月。

1.2.2 混合標準中間工作液的配置

取乳酸標準儲備液用水逐級稀釋成約為 100、250、500、1000、2000μg/mL系列標準工作液。

1.3 樣品前處理

1.3.1 水解處理

準確稱量試樣1 g（精確至0.0001 g）于100 mL小燒杯中，加入10mL水和20mL1mol/L NaOH溶液于沸水浴中水浴5min（或煮沸5min），冷卻至室溫，用（1+3）鹽酸調節(jié) pH約為2.1～2.3，轉移到100mL容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻，過濾。取濾液稀釋，使最后稀釋液乳酸的濃度落在工作曲線之內。取部分稀釋液過0.45μm濾膜，供高效液相色譜儀測定。

1.3.2 不水解處理

準確稱量試樣1 g（精確至0.0001 g）于100 mL容量瓶中，加入60mL水，在50℃水浴中超聲提取20min，冷卻至室溫，用水定容至刻度，搖勻，過濾。取濾液稀釋，使最后稀釋液乳酸的濃度落在工作曲線之內。取部分稀釋液過0.45μm濾膜，供高效液相色譜儀測定。

1.4 色譜條件

1.4.1 色譜柱

Hypersil GOLD aQ(4.6×250mm，5μm)或相當者。

1.4.2 色譜條件

流動相：0.1%磷酸：乙腈=97.5：2.5

流速：1.0mL/min

柱溫：30℃

進樣量：20μL

2 結果

2.1 系統(tǒng)適應性試驗

分別取對照品溶液和供試品溶液注入液相色譜儀，在210nm處的色譜圖見圖2與圖3，按1.4色譜條件下，乳酸的理論塔板數分別為21526、23186，供試品溶液中的分離度大于1.5，乳酸得到很好的分離。

2.2 線性關系

配制濃度為97.763、244.4075、488.815、977.63、1955.26μg/mL的標準工作液，經0.45μm微孔濾膜過濾后供液相色譜儀測定。以乳酸色譜峰面積為縱坐標，標準工作液濃度為橫坐標，繪制標準曲線，所得線性方程為Y=0.0076x-0.0063。結果顯示，乳酸在 97.763～1955.26μg/mL 范 圍內的線性良好，相關系數（R2）為1.0000。

圖2 對照品溶液1000μg/mL

圖3 供試品溶液

2.3 精密度試驗

本文以濃度為 500μg/mL的標準工作溶液對儀器進行精密度的測試，按1.4色譜條件連續(xù)進樣6次，乳酸的保留時間和峰面積基本穩(wěn)定，保留時間的相對標準偏差（RSD）為0.54%，峰面積的相對標準偏差為1.35%，結果表明儀器精密度良好。

表1 80%乳酸原料試驗結果

表2 酸度調節(jié)劑試驗結果

2.4 比較試驗

2.4.1 取市售80%乳酸原料6份，按1.3.1項下的方法制備供試品溶液，按1.4分別進樣測定含量。另取市售80%乳酸原料6份，按1.3.2項下的方法制備供試品溶液，按1.4分別進樣測定含量。結果詳見表1。

2.4.2 取酸度調節(jié)劑6份，按1.3.1項下的方法制備供試品溶液，按1.4分別進樣測定含量。另取酸度調節(jié)劑6份，按1.3.2項下的方法制備供試品溶液，按1.4分別進樣測定含量。結果詳見表2。

3 討論與小結

結果表明乳酸由于其特殊性，如果不進行水解處理，其檢測結果與實際配方值差異較大，而且不進行水解的結果回收率不穩(wěn)定，可能會因不同的產品的加工工藝而受影響。而進行水解處理的產品，無論是原料還是加工后的產品，結果都比較接近標準值，結果也相對穩(wěn)定，回收率均能達90%以上，能滿足檢測的需求。如果沒有進行水解直接檢測，只檢測的是游離乳酸，不代表實際產品中真實的乳酸含量，檢測的結果不準確，由此可能會引起含量不達標的一系列糾紛。因此在該液相色譜條件下，乳酸原料或是添加了乳酸的酸度調節(jié)劑的產品，應該選用水解的前處理進行檢測，才能保證數據準確。本文方法操作簡便、快速、可作為制定酸度調節(jié)劑中乳酸檢測標準的參考依據。