劉洪亮 杜金鳳 郭航紅 宋鑒達(dá)

摘要：通過運用高效液相色譜法來測定美白祛斑類化妝品申的8種激素。這八種激素分別為曲安西龍、氫化可的松、地塞米松、醋酸潑尼松龍、醋酸氫化可的松、醋酸潑尼松、醋酸可的松和醋酸地塞米松。在檢測過程中，分別以甲醇溶液為基礎(chǔ)來提取不同形態(tài)的化妝品。再結(jié)合HIB固相萃取柱富集凈化之后，再采用專業(yè)的色譜柱儀器進(jìn)行分離。其中，可以將乙腈和水作為流動相進(jìn)行梯度洗脫。在短短6mm之內(nèi)就可以對8種激素進(jìn)行分離和檢測。結(jié)果：各個激素成分在0.03579-0.8639ug的范圍內(nèi)都可以在一定面積內(nèi)呈現(xiàn)線性的關(guān)系。且相關(guān)系數(shù)都大于0.999。結(jié)論：本操作方法相對比較簡單，且分析的時間也較短。不僅有著很好的操作性，而且可以大范圍地被用于測定美白祛斑類化妝品中。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法;美白祛斑化妝品;多種激素

中圖分類號：TQ072文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1671-0460（2019）06-0139-04

隨著時代的不斷發(fā)展，女性朋友對美白祛斑的需求正變得越來越強(qiáng)烈。所以越來越多的女性也開始關(guān)注美白祛斑化妝品的安全性。雖然國家一再對美白祛斑類化妝品進(jìn)行檢測。但是有些化妝品生產(chǎn)商為了能夠生產(chǎn)出見效快的美白祛斑產(chǎn)品，都會在那些產(chǎn)品中加入一些激素。雖然這些激素能夠在短時間內(nèi)美白產(chǎn)品，甚至大家在使用過后會使得皮膚變得更加白嫩。但是，如果長時間使用這些產(chǎn)品，則會使得面部皮膚遭受損害。甚至?xí)谥笫沟没颊叩男玛惔x出現(xiàn)紊亂。一些美白化妝品中添加的性激素則會在短時間內(nèi)促進(jìn)毛發(fā)的生長，甚至有效地防止皮膚老化。但是，如果長時間使用就會使得皮膚萎縮變薄，甚至誘發(fā)癌癥。所以，在實際生產(chǎn)的過程中，需要對美白化妝品中的激素進(jìn)行嚴(yán)格地檢測，才能夠在之后有效地控制化妝品的質(zhì)量，確?；瘖y品在使用的過程中變得更加安全。這對保障大家的身體健康也有很重要的意義。本文主要采用高效液相色譜法對美白祛斑化妝品中的8種激素成分進(jìn)行檢測。

1 儀器與試劑

1.1一般儀器

本次試驗所使用的儀器為Agilent1100型的高效液相色譜儀。此儀器內(nèi)部主要是由G1322A、在線脫氣、G1316A柱溫箱和其他配套的儀器一起組成。并需要配合電子分析天平進(jìn)行檢測。

1.2使用試劑

在本次實驗中所使用的試劑主要包括醋酸可的松、地塞米松、醋酸潑尼松龍、醋酸潑尼松、曲安西龍、氫化可的松和其他試劑都來自于中國藥品生物制品檢驗所。在確定其純度之后被應(yīng)用于試驗中。

2 試驗方法

2.1色譜分析條件

整個色譜的柱長度為EcosilC18，其長度保持在250mmX1.6mm。其中檢測的波長被控制在242nm。流動相內(nèi)部乙腈和水的比例被控制在40：60左右。整體柱子的溫度控制在40℃。圖1為各個成分對照品高效液相分析結(jié)果。

2.2標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置

可以分別先稱取8種激素樣品，并融入甲醇溶液進(jìn)行配置。在經(jīng)過加工之后就可以配置成一定濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液。并將已經(jīng)配置好的混合溶液稀釋成為8種標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量濃度為2.0、3.0、4.0、8.0、20.0和40.0mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液，以便在后續(xù)試驗中應(yīng)用。

2.3樣品溶液的配置

稱取每一樣化妝品0.5g，并將其放置在25ml的容量瓶內(nèi)部，并在之后加入一定量的甲醇。等到在超聲加工提取20min之后再放置冷卻，并有效地將甲醇補(bǔ)充道一定的刻度。完成上述操作之后，可以選取適量的溶液放置在離心管內(nèi)部，并在10000r/min轉(zhuǎn)速的條件下離心加工10min。在加工之后再取出上部的清液。等到經(jīng)過過濾之后再供測定使用。

2.4線性關(guān)系和檢測限

將事先調(diào)制好的混合對照液稀釋成8種標(biāo)準(zhǔn)的溶液。其溶液的濃度分別為2.75ug/ml、5.50ug/ml、11.00ug/ml、22.00ug/ml和44.00ug/ml，之后就會形成新的混合對照溶液。配置好之后再按照一定的色譜條件進(jìn)行全面測定，再記錄之后的色譜圖。在得到相關(guān)數(shù)據(jù)之后，可以以對照品的濃度為橫坐標(biāo)，并以對照峰的面積為縱坐標(biāo)。再在調(diào)整之后繪制合理的工作曲線。表1有效地顯示了各個激素成分的線性回歸方程。并分析其他相關(guān)的系數(shù)。

2.5穩(wěn)定性試驗

可以先取同一濃度的對照品，并將其沉淀0h、2h、4h、6h和8h。并按照一定的色譜條件進(jìn)行分析。在分析結(jié)束之后就可以有效地計算各個激素內(nèi)部的峰面積。在試驗之后就能夠有效地確保對照樣品溶液在8h小時內(nèi)都變得更加穩(wěn)定。

2.6加樣回收試驗

可以先選取特定的試品溶液，之后再有效地進(jìn)行測定，結(jié)果得出：內(nèi)部確實存在不含有激素的樣品，數(shù)量為6份。將每份溶液平均劃為0.5g，之后再有效地分析各個成分內(nèi)部的回收率。在經(jīng)過一段時間的計算之后，可以得到如下的結(jié)論：曲安西龍為98.43%，RSD=0.66%;氫化可的松為98.43%，RSD=0.66%;地塞米松為98.47%，RSD=0.75%;醋酸氫化可的松為98.32%，RSD=0.65%。醋酸潑尼送為98.45%，RSD=0.69%。醋酸可的松為98.45%，RSD=0.66%。醋酸地塞米松為98.46%，RSD=0.65%

2.7樣品分析

根據(jù)上面的試驗方法對各類美白祛斑類化妝品進(jìn)行檢測，并檢測內(nèi)部的8種激素。之后再用特定的時間檢測出的光譜圖進(jìn)行定性分析。但是都沒有檢測出額外的激素。其樣品分離的色譜圖如圖2所示。從圖中可以看出，樣品在經(jīng)過處理以后，內(nèi)部的基質(zhì)對激素檢測并不會存在較多的干擾。并可以采用光譜圖鑒來排除存在于樣品中的防腐劑成分。在通過對不同的樣品進(jìn)行測定之后，就可以測定出陽性樣品。

3結(jié)果討論

3.1優(yōu)化樣品提取方法

只有采用超聲的方式有效地提取樣品，才能夠更好地提高提取的效率。在考察包括甲醇、無水乙醇、水和流動相體內(nèi)部的不同提取時間之后在分析提取效果。多數(shù)結(jié)果表明，如果能夠以甲醇為提取溶液，并將提取的時間控制在20min左右，其本身的提取效率更高。所有的成分也能夠被更好地提取出來。

3.2選擇合適的固相萃取柱

根據(jù)有關(guān)文獻(xiàn)的報道內(nèi)容，其激素化合物在C18在SPE柱子上將會表現(xiàn)出良好的色譜保留行為，并在之后表現(xiàn)出良好的萃取效果。常規(guī)而言，OasisHLB-SPE是一種新型的反相色譜保留固相萃取柱。與傳統(tǒng)的C18SPE柱子相比，其本身的吸附容量更寬，也能夠更好地對激素物質(zhì)進(jìn)行凈化。

3.3選擇合適的柱溫

通過上述研究的數(shù)據(jù)可以得知，這8種激素之間的分力度正有著顯著的影響。只有在先后25～50℃等一系列的柱溫條件下進(jìn)行試驗，才能夠考察出不同激素之間的分離效果。最后得出，在28℃柱溫度下降會表現(xiàn)出最佳的分離效果。

3.4選擇合適的流動相

在此次試驗的過程中，可以得出如下的結(jié)論：如果采用乙腈一水系來有效地進(jìn)行洗脫，就可以得到最佳的梯度洗脫比例，最終也能夠獲得最佳的流動色譜條件。應(yīng)該說，各個色譜峰內(nèi)部的數(shù)值可以被有效地分離。

3.5選擇檢測波長

在通過采用DAD紫外全波長進(jìn)行掃描之后，可以比較與單個激素成分相關(guān)的光譜圖?？梢园l(fā)現(xiàn)本次醋酸可的松、地塞米松、醋酸潑尼松龍、醋酸潑尼松、曲安西龍、氫化可的松和其他試劑等對照品的最大吸收波長可以被控制在196～240nm之間。所以，在實際選擇的過程中，可以選擇196-240nm之間的數(shù)值作為波長。這樣不僅能夠有效地提高檢測的靈敏度，還能夠避免波長太過單一而使得內(nèi)部的靈敏度有所降低。

以上從“樣品提取方法”、“合適的固相萃取物”、“合適的流動相”和“選擇合適的檢測波長“等幾個方面進(jìn)行分析。可以看出，本次對八種激素進(jìn)行檢測的方法選用得當(dāng)，確實能夠取得好的檢測效果。這種檢測方法也值得被推廣。

4 結(jié)語

綜上所述，本文先選擇合適的儀器和試驗試劑，之后再將“色譜分析條件”、“標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置”、“樣品溶液的配置”、“線性關(guān)系和檢測限”、“穩(wěn)定性試驗”、“加樣回收試驗”和“樣品分析”的過程有效地結(jié)合在一起。在做好實驗之后，再有效地就包括“優(yōu)化樣品提取方法”、“選擇合適的固相萃取柱”、“選擇合適的柱溫”、“選擇合適的流動相”和“選擇檢測波長”的方式分析結(jié)果?？梢钥闯觯疚乃⒌姆椒ǚ浅：啽銣?zhǔn)確。不僅有著很好的重現(xiàn)性，而且可以有效地被運用于化妝品8種激素的檢測過程中，樣品的檢出率也很高。相關(guān)部門也確實可以通過運用這種方法來檢測美白化妝品。也只有全面對美白祛斑類產(chǎn)品中的激素進(jìn)行測定，才能夠更好地保證美白類化妝品本身的質(zhì)量。