詹欽文,李 述,王 科,李 波*

(1重慶醫(yī)科大學(xué)附屬永川醫(yī)院骨科,重慶 402160;2重慶醫(yī)科大學(xué)附屬永川醫(yī)院檢驗(yàn)科;*通訊作者,E-mail:cqeylibo@163.com)

乳腺癌是世界上女性癌癥相關(guān)死亡的第二大常見原因[1,2]。2012年全世界婦女中發(fā)生了大約170萬(wàn)新發(fā)乳腺癌[2]。在2016年,美國(guó)大約有246 660例新發(fā)侵襲性乳腺癌病例,包括61 000例原位癌,其中有40 450例患者死亡[3]。乳腺癌也是中國(guó)大陸女性最常見的癌癥,發(fā)病率為268.6/100 000人,每年增加3.9%左右[4]。

SASH1作為SH3/SAM連接分子家族成員,已被鑒定是信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程中的一個(gè)新的腫瘤抑制因子和關(guān)鍵蛋白[5]。Ren等[6]報(bào)道,SASH1表達(dá)下調(diào)會(huì)抑制卵巢癌的生長(zhǎng)、增殖和遷移,增強(qiáng)細(xì)胞凋亡。最近,Burgess等[7]報(bào)道SASH1對(duì)乳腺癌的進(jìn)展具有亞型依賴性影響,并且與其預(yù)后相關(guān)。通過(guò)氯吡嗪處理恢復(fù)乳腺癌細(xì)胞SASH1蛋白的表達(dá)似乎會(huì)增加乳腺癌細(xì)胞的凋亡,這提示其可以作為乳腺癌治療的潛在生物靶點(diǎn)。此外,與正常乳腺上皮組織相比,74%的乳腺腫瘤組織中SASH1的表達(dá)明顯下降[8]。

微陣列技術(shù)的發(fā)展徹底改變了RNA和DNA的研究模式,并且已成為生物學(xué)和生物醫(yī)學(xué)研究的重要組成部分[9]。通過(guò)檢索Pubmed等數(shù)據(jù)庫(kù)發(fā)現(xiàn),目前關(guān)于SASH1的研究很少,特別是SASH1與乳腺癌預(yù)后關(guān)系的研究更少。因此,本研究通過(guò)生物信息學(xué)分析和免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn),對(duì)乳腺癌患者中SASH1的表達(dá)和突變進(jìn)行了深入的探討,以確定其在乳腺癌患者中的表達(dá)模式、潛在功能和預(yù)后價(jià)值。

1 材料和方法

1.1 Oncomine分析

Oncomine基因表達(dá)數(shù)據(jù)庫(kù)(www.oncomine.org)是一個(gè)在線癌癥微陣列數(shù)據(jù)庫(kù),主要用于分析不同腫瘤中SASH1的轉(zhuǎn)錄水平。將臨床腫瘤標(biāo)本中SASH1 mRNA表達(dá)水平與正常對(duì)照組中的mRNA表達(dá)水平進(jìn)行比較,使用Students’t檢驗(yàn)生成P值。P值和fold change值的界限值分別定義為P<0.05和fold change>2。

1.2 Breast cancer gene-expression miner v4.0 分析

Breast cancer gene-expression miner v4.0(bcGenExMiner v4.0)由36個(gè)帶注釋的基因組數(shù)據(jù)集和3個(gè)統(tǒng)計(jì)挖掘函數(shù)組成。表達(dá)模塊于2016年3月29日添加,這個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)主要通過(guò)臨床病理參數(shù)來(lái)比較靶基因的表達(dá)水平,如激素受體、淋巴結(jié)狀態(tài)等。預(yù)后模塊評(píng)估了候選基因?qū)θ橄侔┗颊咧蓄A(yù)后的影響,并為乳腺癌的治療提供了潛在的預(yù)后標(biāo)志物。

1.3 免疫組織化學(xué)法分析乳腺癌組織中SASH1表達(dá)水平及其與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

選取2016-05～2018-06重慶醫(yī)科大學(xué)附屬永川醫(yī)院收治的80例乳腺癌患者手術(shù)切除組織標(biāo)本和29例癌旁正常組織,均通過(guò)病理檢測(cè)確診。

將乳腺癌患者腫瘤組織和癌旁正常組織固定于10%甲醛溶液中(4 ℃,24 h)。石蠟包埋后切成5 μm厚的切片。然后于56 ℃烘箱過(guò)夜、二甲苯和梯度乙醇溶液脫蠟水化?？乖迯?fù)后滴加3% H2O2去離子水覆蓋組織15 min,試劑A(封閉用正常山羊血清工作液)室溫封閉30 min,然后滴加兔抗人SASH1多克隆抗體(稀釋比例為1 ∶50,購(gòu)自美國(guó)Novus公司)37 ℃反應(yīng)1 h,4 ℃過(guò)夜。滴加試劑B(生物素標(biāo)記的即用型山羊抗兔IgG)37 ℃反應(yīng)30 min。滴加試劑C(辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈酶卵白素工作液)37 ℃反應(yīng)15 min,DAB顯色(免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)試劑盒購(gòu)自無(wú)錫傲銳東源生物科技有限公司)。在顯微鏡下觀察染色結(jié)果,并用PBS終止反應(yīng)。蘇木精對(duì)比染色,45 ℃ ddH2O浸泡返藍(lán)。最后用中性樹脂封固,在顯微鏡下觀察陽(yáng)性結(jié)果并拍照。根據(jù)腫瘤細(xì)胞染色強(qiáng)度評(píng)分,共4級(jí):0分(-),1分(+),2分(++),3分(+++)。

1.4 The Kaplan-Meier Plotter分析

使用在線數(shù)據(jù)庫(kù)Kaplan-Meier Plotter(www.kmplot.com)評(píng)估SASH1 mRNA表達(dá)水平對(duì)乳腺癌患者預(yù)后的價(jià)值,其中包含3 951名臨床乳腺癌患者的基因表達(dá)數(shù)據(jù)和生存相關(guān)的信息。為了分析乳腺癌患者的無(wú)復(fù)發(fā)生存時(shí)間(recurrence-free survival,RFS)和總體生存時(shí)間(overall survival,OS),通過(guò)中位表達(dá)水平(高表達(dá)與低表達(dá))將患者樣本分成兩組,并通過(guò)Kaplan-Meier生存圖評(píng)估風(fēng)險(xiǎn)比(HR)、95%置信區(qū)間(95%CI)和log-rankP值。

1.5 TCGA data and cBioPortal分析

癌基因組圖譜(The Cancer Genome Atlas,TCGA)包括30種不同腫瘤的測(cè)序和病理學(xué)數(shù)據(jù)結(jié)果。選取1 105例有病理報(bào)告的The breast invasive carcinoma(TCGA,Provisional)數(shù)據(jù)集,進(jìn)一步通過(guò)cBioPortal分析SASH1突變情況?；蚪M譜包括來(lái)自GISTIC的突變和拷貝數(shù)變異(copy-number variance,CNV),mRNA表達(dá)z-分?jǐn)?shù)(RNA Seq V2 RSEM)和蛋白質(zhì)表達(dá)z分?jǐn)?shù)(CPTAC)。同時(shí)根據(jù)cBioPortal的Kaplan-Meier生存曲線計(jì)算SASH1突變的總體生存時(shí)間和無(wú)病生存時(shí)間(disease-free survival,DFS)。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)各實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。分析乳腺癌組織的免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果以及SASH1表達(dá)與乳腺癌臨床指標(biāo)的關(guān)系時(shí)用χ2檢驗(yàn);以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 SASH1在乳腺癌病人中轉(zhuǎn)錄水平

使用Oncomine數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)腫瘤中SASH1的轉(zhuǎn)錄水平與正常樣本中的轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行比較,發(fā)現(xiàn)其中18個(gè)數(shù)據(jù)集的乳腺癌患者的SASH1 mRNA表達(dá)明顯下降,僅在1個(gè)數(shù)據(jù)集中SASH1 mRNA表達(dá)上調(diào)(Finak Breast數(shù)據(jù)集的浸潤(rùn)性乳腺癌)(見圖1)。在Curtis Breast數(shù)據(jù)集,與正常樣本相比,在所有類型的乳腺癌中均發(fā)現(xiàn)SASH1的低表達(dá),且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。浸潤(rùn)性導(dǎo)管乳腺癌的差異倍數(shù)為-2.980,浸潤(rùn)性小葉乳腺癌的差異倍數(shù)為-2.480,浸潤(rùn)性導(dǎo)管和浸潤(rùn)性小葉乳腺癌的差異倍數(shù)為-2.709,管狀乳腺癌的差異倍數(shù)為-2.537,粘液性乳腺癌的差異倍數(shù)為-2.948,髓樣乳腺癌的差異倍數(shù)為-3.255和乳腺導(dǎo)管原位癌的差異倍數(shù)為-2.149(見表1)。

2.2 乳腺癌患者SASH1 mRNA水平和臨床病理參數(shù)的關(guān)系

在bc-GenExMiner v4.0在線數(shù)據(jù)庫(kù)中,根據(jù)不同的臨床病理學(xué)參數(shù),比較乳腺癌患者中SASH1 mRNA的表達(dá)差異。以51歲為界限,將病人分成兩組,結(jié)果發(fā)現(xiàn)大于51歲的患者的SASH1 mRNA表達(dá)明顯上調(diào)(P<0.001)。同時(shí),以40歲和70歲為界限,將病人分為三組(<40歲,40-70歲和>70歲),結(jié)果發(fā)現(xiàn)大于70歲的老年患者的SASH1 mRNA表達(dá)上調(diào)(P<0.001)。以Her2受體陰陽(yáng)性為界限,分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)Her2陽(yáng)性的患者的SASH1 mRNA表達(dá)上調(diào)(P=0.028)。而分別以雌激素受體和孕激素受體陰陽(yáng)性以及結(jié)節(jié)狀態(tài)為界限,發(fā)現(xiàn)SASH1 mRNA的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值分別為0.314,0.171和0.377,見圖2)。

該圖由Oncomine生成,表明了差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)的mRNA的過(guò)表達(dá)(紅色)或下調(diào)(藍(lán)色)的數(shù)據(jù)集的數(shù)量圖1 SASH1在不同腫瘤中的轉(zhuǎn)錄水平Figure 1 The transcription levels of SASH1 in different types of cancers

三陰乳腺癌是一種雌激素受體、孕激素受體和Her2受體均陰性的乳腺癌,本研究發(fā)現(xiàn)三陰乳腺癌與非三陰乳腺癌患者的SASH1 mRNA的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.273)。在斯卡夫布魯姆和理查森等級(jí)狀態(tài)(Scarff Bloom & Richardson grade status,SBR)的病理分級(jí)中,我們發(fā)現(xiàn),SBR等級(jí)越低的患者SASH1 mRNA表達(dá)水平越高(SBR1>SBR2>SBR3),且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001,見圖2)。

表1不同類型的乳腺癌和乳腺正常組織之間SASH1表達(dá)在轉(zhuǎn)錄水平上的顯著變化(ONCOMINE數(shù)據(jù)庫(kù))

Table1ThesignificantchangesofSASH1expressionintranscriptionlevelbetweendifferenttypesofbreastcancerandnormalbreasttissues(ONCOMINEdatabase)

SASH1表達(dá)類型 乳腺癌vs正常組織差異倍數(shù)PT檢驗(yàn)值 數(shù)據(jù)集高表達(dá)間質(zhì)浸潤(rùn)性乳腺癌3.5729.37×10-2315.786Finak Breast低表達(dá)浸潤(rùn)性導(dǎo)管乳腺癌-2.6665.03×10-13-10.667Zhao Breast低表達(dá)小葉乳腺癌-2.1612.50×10-7-7.272Zhao Breast低表達(dá)浸潤(rùn)性導(dǎo)管乳腺癌-2.9801.27×10-111-40.280Curtis Breast低表達(dá)浸潤(rùn)性小葉乳腺癌-2.4808.68×10-5319.841Curtis Breast低表達(dá)浸潤(rùn)性小葉乳腺癌和導(dǎo)管乳腺癌-2.7095.60×10-36-17.550Curtis Breast低表達(dá)乳腺癌-3.3227.49×10-9-11.318Curtis Breast低表達(dá)小葉乳腺癌-2.5375.56×10-30-16.528Curtis Breast低表達(dá)黏液性乳腺癌-2.9485.10×10-21-14.645Curtis Breast低表達(dá)髓質(zhì)乳腺癌-3.2552.10×10-14-12.151Curtis Breast低表達(dá)浸潤(rùn)性乳腺癌-2.9292.51×10-8-8.188Curtis Breast低表達(dá)原位導(dǎo)管乳腺癌-2.1492.00×10-4-5.322Curtis Breast低表達(dá)導(dǎo)管乳腺癌-3.4931.59×10-11-9.175Richardson Breast 2低表達(dá)間質(zhì)浸潤(rùn)性導(dǎo)管乳腺癌-2.0865.25×10-5-4.931Ma Breast 4低表達(dá)浸潤(rùn)性導(dǎo)管乳腺癌-3.0142.38×10-44-19.088TCGA Breast低表達(dá)浸潤(rùn)性乳腺癌-2.2856.02×10-20-10.732TCGA Breast低表達(dá)浸潤(rùn)性小葉乳腺癌-2.0736.71×10-9-6.798TCGA Breast低表達(dá)間質(zhì)浸潤(rùn)性導(dǎo)管乳腺癌-2.4942.18×10-4-4.941Karnoub Breast低表達(dá)浸潤(rùn)性乳腺癌-2.9687.67×10-4-8.135Gluck Breast

括號(hào)內(nèi)數(shù)值為相應(yīng)組患者數(shù)圖2 SASH1 mRNA的表達(dá)水平與乳腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系Figure 2 The relationship between mRNA expression of SASH1 and clinicopathological parameters of breast carcinoma

2.3 SASH1在乳腺癌患者中低表達(dá)及與臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系

為了驗(yàn)證SASH1在乳腺癌中的表達(dá)水平及與臨床病理參數(shù)的關(guān)系,課題組選取了80例乳腺癌患者標(biāo)本和29例癌旁正常組織,進(jìn)行免疫組織化學(xué)法分析，結(jié)果證實(shí),29例癌旁正常組織中SASH1明顯高表達(dá)(22/29,75.9%),而在80例乳腺癌組織中SASH1明顯低表達(dá)(67/80,83.8%),SASH1表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,見圖3)。這一發(fā)現(xiàn)也與“結(jié)果2.1”中Oncomine數(shù)據(jù)庫(kù)所發(fā)現(xiàn)的SASH1 mRNA在大多數(shù)乳腺癌患者中低表達(dá)的結(jié)果一致。

A.正常組織中SASH1表達(dá)水平;B-E.分別為乳腺癌組織中SASH1表達(dá)陰性、弱陽(yáng)性、中等陽(yáng)性和強(qiáng)陽(yáng)性圖3 免疫組織化學(xué)法分析SASH1在乳腺癌組織和癌旁正常組織中的表達(dá)情況 (DAB,×200) Figure 3 Immunohistochemical analysis of SASH1 protein expression in breast cancer tissues andnormal breast tissues (DAB,×200)

同時(shí),通過(guò)分析SASH1蛋白表達(dá)水平和乳腺癌患者臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系來(lái)驗(yàn)證bc-GenExMiner v4.0在線數(shù)據(jù)庫(kù)得出的SASH1 mRNA水平與臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系是否可靠。結(jié)果證實(shí)80例進(jìn)行淋巴結(jié)清掃的乳腺癌組織中,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性的SASH1低表達(dá)率略高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性組,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(88.1%vs78.9%,P>0.05);同樣以51歲為界將患者分成兩組,結(jié)果發(fā)現(xiàn)≤51歲SASH1低表達(dá)的患者明顯高于SASH1高表達(dá)患者(SASH1低表達(dá)和高表達(dá)分別為61例和2例)。然而大于51歲的患者中,SASH1高表達(dá)的患者數(shù)量明顯高于低表達(dá)患者(SASH1高表達(dá)和低表達(dá)分別為11例和6例),并且這一表達(dá)的不一致性的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);同時(shí),根據(jù)腫瘤面積和腫瘤分級(jí)進(jìn)行分組討論時(shí)也發(fā)現(xiàn)SASH1低表達(dá)與其相關(guān)(P<0.05),并且腫瘤分級(jí)越低SASH1高表達(dá)率越高,Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ級(jí)的SASH1高表達(dá)率分別為32.0%，11.1%和5.3%(見表2)。這一發(fā)現(xiàn)也與“結(jié)果2.2”中bc-GenExMiner v4.0在線數(shù)據(jù)庫(kù)所發(fā)現(xiàn)的乳腺癌患者SASH1 mRNA表達(dá)水平與臨床病理學(xué)的關(guān)系相對(duì)應(yīng)。

2.4 SASH1高表達(dá)提高乳腺癌患者的生存時(shí)間

Kaplan-Meier曲線分析發(fā)現(xiàn),在SASH1 mRNA表達(dá)水平和乳腺癌預(yù)后的3個(gè)數(shù)據(jù)集中,SASH1高表達(dá)均能延長(zhǎng)患者的RFS,提高患者的預(yù)后,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),226022-at數(shù)據(jù)集、213236-at數(shù)據(jù)集和41644-at數(shù)據(jù)集的HR分別為0.78,0.88和0.87;然而,SASH1高表達(dá)雖然可以延長(zhǎng)患者的OS,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05,見圖4)。

表2乳腺癌組織中SASH1蛋白表達(dá)與乳腺癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系

Table2AssociationofSASH1expressionwiththeclinicalparametersofbreastcancerpatients

臨床病理參數(shù)nSASH1低高卡方檢驗(yàn)值P淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移1.23>0.05 陽(yáng)性38308 陰性42375腫瘤直徑7.96<0.05 ≤1 cm18153 1.1-2 cm24168 2.1-3 cm24231 >3 cm1091組織學(xué)分級(jí)6.94<0.05 Ⅰ25178 Ⅱ36324 Ⅲ19181年齡37.24<0.01 ≤51歲63612 >51歲17611

2.5 SASH1突變不會(huì)影響乳腺癌患者的預(yù)后

在1 098例乳腺癌標(biāo)本中,有67例發(fā)生了突變(6%)(見圖5A)。通過(guò)Kaplan-Meier曲線分析發(fā)現(xiàn),SASH1突變不會(huì)影響乳腺癌患者OS和DFS,說(shuō)明SASH1突變與否都不會(huì)改變患者的預(yù)后(見圖5)。

圖4 Kaplan-Meier分析乳腺癌患者中SASH1mRNA表達(dá)水平的預(yù)后價(jià)值Figure 4 The prognostic value of SASH1 mRNA level in BC patients by Kaplan-Meier plotter

圖5 SASH1基因突變對(duì)乳腺癌患者預(yù)后影響的cBioPortal分析Figure 5 Analysis of the influence of SASH1 gene mutation on the prognosis of patients with breast cancer by cBioPortal

3 討論

在過(guò)去的幾十年里,乳腺癌的治療有了很大改善,但在澳大利亞、美國(guó)和英國(guó)等發(fā)達(dá)國(guó)家都仍有15%-20%的患者術(shù)后生存時(shí)間小于10年[6]。關(guān)于這方面的花費(fèi)占據(jù)了公共衛(wèi)生部門有關(guān)癌癥相關(guān)的發(fā)病率和死亡率成本的很大一部分。對(duì)于當(dāng)前一線治療無(wú)效的腫瘤其治療可能更復(fù)雜[10]。未來(lái)的疾病控制將取決于對(duì)疾病分子生物學(xué)的更多了解,從而確定與診斷相關(guān)的基因的新型個(gè)性化醫(yī)療方法[11]。

SASH1作為一種抑癌基因已有報(bào)道,其高表達(dá)可能促進(jìn)癌細(xì)胞的凋亡[8]。但關(guān)于SASH1與乳腺癌患者預(yù)后方面的研究還非常少,通過(guò)檢索Pubmed數(shù)據(jù)庫(kù)僅發(fā)現(xiàn)14篇SASH1與乳腺癌關(guān)系的研究,這些文章絕大多數(shù)僅僅研究了SASH1與乳腺癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系,并沒(méi)有去進(jìn)一步探討SASH1對(duì)乳腺癌患者預(yù)后的影響。

本研究通過(guò)生物信息學(xué)技術(shù),利用Oncomine、Breast cancer gene-expression miner v4.0、Kaplan-Meier Plotter、TCGA data and cBioPortal等在線數(shù)據(jù)庫(kù),結(jié)合免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)綜合分析了SASH1表達(dá)水平和乳腺癌患者的關(guān)系。

Yang等[12]證實(shí),SASH1表達(dá)水平與膠質(zhì)瘤WHO分級(jí)密切相關(guān)。在121個(gè)病例中,SASH1低表達(dá)占66.9%,且其中大多數(shù)為Ⅲ-Ⅳ級(jí),而33.1%的SASH1高表達(dá)的病例中大多數(shù)為Ⅰ-Ⅱ級(jí)。這說(shuō)明SASH1表達(dá)水平與膠質(zhì)瘤分級(jí)密切相關(guān),在較低惡性程度時(shí)表現(xiàn)出較高的表達(dá),隨著惡性程度的增加而顯著下降。原發(fā)性肝癌和甲狀腺腫瘤中,SASH1 mRNA表達(dá)水平明顯降低[13]。與相應(yīng)正常組織比較,50例乳腺癌組織標(biāo)本中有37例(74%)的SASH1表達(dá)明顯下調(diào)[14]。Gong等[8]研究也發(fā)現(xiàn),與對(duì)照組相比,乳腺癌患者中SASH1的陽(yáng)性率顯著降低(63/186,33.9%)。這些研究都表明了SASH1在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中扮演了一個(gè)關(guān)鍵角色。我們通過(guò)Oncomine數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行基因差異性表達(dá)分析發(fā)現(xiàn),與正常組織相比,乳腺癌組織中SASH1 mRNA的表達(dá)明顯下降,18個(gè)數(shù)據(jù)集的SASH1 mRNA低表達(dá),1個(gè)數(shù)據(jù)集的SASH1 mRNA高表達(dá),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(見圖1，3和表1)。因此,這一研究結(jié)果表明乳腺癌組織中SASH1 mRNA表達(dá)下調(diào)。

李述等[5]證實(shí)SASH1低表達(dá)與乳腺癌的轉(zhuǎn)移和分級(jí)呈正相關(guān),而與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)。同時(shí),一些研究也揭示SASH1表達(dá)下降與腫瘤大小、侵襲性生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移和生存率低有關(guān)[13-15]。SASH1表達(dá)增強(qiáng)與U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲能力降低有關(guān)[12]。從組織學(xué)類型上看,SASH1表達(dá)陽(yáng)性率在浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌、浸潤(rùn)性小葉癌、黏液癌和浸潤(rùn)性篩狀癌中無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異[8]。Burgess等[7]最近報(bào)道了在雌激素受體陽(yáng)性和陰性乳腺癌中SASH1表達(dá)的存在顯著差異,但人類表皮生長(zhǎng)因子受體2(HER2)陽(yáng)性和陰性乳腺癌之間卻沒(méi)有發(fā)現(xiàn)SASH1陽(yáng)性率存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。以上研究都表明SASH1的表達(dá)水平可能與乳腺癌患者的臨床病例參數(shù)有關(guān)。本研究通過(guò)bc-GenExMiner v4.0在線數(shù)據(jù)庫(kù)和免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)分析發(fā)現(xiàn),在Her2陽(yáng)性的乳腺癌中SASH1 mRNA表達(dá)明顯增加,而這一現(xiàn)象卻沒(méi)有在雌激素受體陽(yáng)性或孕激素受體陽(yáng)性的病人中觀察到,在這類病人中,SASH1 mRNA水平不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。通過(guò)對(duì)SBR與SASH1 mRNA表達(dá)水平之間關(guān)系的分析,得出SASH1表達(dá)水平越高,SBR(乳腺癌組織學(xué)分級(jí))等級(jí)越低,病人惡性程度越低。同時(shí),統(tǒng)計(jì)學(xué)分析也發(fā)現(xiàn),SASH1表達(dá)水平與患者年齡密切相關(guān),在老年患者中,SASH1表達(dá)水平明顯增加,這一發(fā)現(xiàn)也與臨床上乳腺癌常發(fā)生于中青年患者的現(xiàn)象符合(見圖2和表2)。

Zhou等[16]研究發(fā)現(xiàn)SASH1表達(dá)下調(diào)與胃癌預(yù)后差有關(guān)。但總的來(lái)說(shuō),關(guān)于SASH1表達(dá)與腫瘤患者預(yù)后關(guān)系的研究還很少。特別是SASH1表達(dá)與乳腺癌患者預(yù)后的研究就更少[17]。本研究通過(guò)Kaplan-Meier曲線發(fā)現(xiàn),在3個(gè)數(shù)據(jù)集中SASH1高表達(dá)均能延長(zhǎng)乳腺癌患者的RFS,提高患者的預(yù)后,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,226 022-at,213 236-at,41 644-at的HR分別為0.78,0.88,0.87),說(shuō)明SASH1高表達(dá)是一個(gè)保護(hù)因素,可以促進(jìn)癌細(xì)胞凋亡,抑制癌細(xì)胞侵襲和遷移。反之,腫瘤病人中SASH1表達(dá)下調(diào)會(huì)加速腫瘤轉(zhuǎn)移,縮短病人生存時(shí)間,對(duì)病人預(yù)后不利。當(dāng)我們通過(guò)cBioPortal數(shù)據(jù)庫(kù)分析SASH1突變是否會(huì)影響乳腺癌預(yù)后時(shí),結(jié)果發(fā)現(xiàn)SASH1突變與否,患者的OS和DFS的變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。這一發(fā)現(xiàn)與本研究前面的結(jié)論相悖,其原因是SASH1突變不僅有SASH1 mRNA表達(dá)上調(diào)和下調(diào)。在本研究中,我們發(fā)現(xiàn)有6%的乳腺癌病人SASH1發(fā)生了突變,其中包括錯(cuò)義突變、擴(kuò)增、缺失、mRNA上調(diào)和蛋白上調(diào),因此SASH1突變生存曲線包含的病人不僅是SASH1 mRNA表達(dá)上調(diào)的,還包括其他突變類型病人,如果要明確其他突變是否會(huì)影響病人的預(yù)后,尚需進(jìn)一步的臨床試驗(yàn)來(lái)證實(shí)。

在本研究中,我們系統(tǒng)地分析了SASH1在乳腺癌中的表達(dá)和預(yù)后價(jià)值,從而更好地理解了乳腺癌的分子生物學(xué)異質(zhì)性和復(fù)雜性。我們的發(fā)現(xiàn)進(jìn)一步證實(shí)SASH1作為一個(gè)抑癌基因在乳腺癌中低表達(dá),SASH1低表達(dá)將導(dǎo)致患者預(yù)后不良。本研究也揭示了SASH1是乳腺癌治療的一個(gè)潛在生物靶點(diǎn),同時(shí)也是監(jiān)測(cè)乳腺癌患者預(yù)后的一個(gè)潛在生物標(biāo)志物,能為患者預(yù)后提供一個(gè)更準(zhǔn)確的判斷。