梁利斌

[摘要] 目的 比較研究脊柱結(jié)核BacT/ALERT3D法、改良羅氏培養(yǎng)法等不同技術(shù)與病理標(biāo)本膿液、病灶壁等結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)及藥敏試驗(yàn)結(jié)果，探討應(yīng)用價(jià)值較高的技術(shù)和標(biāo)本。 方法 2016年2月—2018年2月期間，方便選擇該院脊柱結(jié)核患者的病理標(biāo)本作為資料，共96例，包含膿液、病灶壁，并進(jìn)行結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)，分別采用BacT/ALERT3D法、改良羅氏培養(yǎng)法，并針對(duì)培養(yǎng)陽(yáng)性細(xì)菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，分析不同培養(yǎng)方法、不同病理組織標(biāo)本的陽(yáng)性率，并進(jìn)行比較。結(jié)果 在BacT/ALERT3D法中，病理標(biāo)本病灶壁培養(yǎng)結(jié)果陽(yáng)性率45.09%顯著高于膿液陽(yáng)性率28.98%（χ2=16.41，P<0.05），在改良羅氏培養(yǎng)法中，病理標(biāo)本病灶壁培養(yǎng)結(jié)果陽(yáng)性率31.27%顯著高于膿液陽(yáng)性率16.24%（χ2=18.55，P<0.05），即不同病理標(biāo)本培養(yǎng)結(jié)果均存在差異，且均以病灶壁陽(yáng)性率最高（P<0.05）。 結(jié)論 與改良羅氏培養(yǎng)法相比，BacT/ALERT3D法檢出率更高，利于結(jié)核病的早期診治，其中病灶壁標(biāo)本培養(yǎng)陽(yáng)性率更高，應(yīng)用價(jià)值相對(duì)更高，值得推廣應(yīng)用。

[關(guān)鍵詞] 脊柱結(jié)核;病理標(biāo)本;結(jié)核分枝桿菌;BacT/ALERT3D法、改良羅氏培養(yǎng)法

[中圖分類(lèi)號(hào)] R5? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1674-0742（2019）01（a）-0026-03

當(dāng)前對(duì)結(jié)核病診斷以結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)為主，但脊柱結(jié)核病理標(biāo)本行結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)陽(yáng)性率存在差異，因此需加強(qiáng)對(duì)最佳結(jié)果脊柱結(jié)核病理標(biāo)本的研究，常見(jiàn)的脊柱結(jié)核病理標(biāo)本包含膿液、肉芽組織及病灶壁[1]。此外不同結(jié)合桿菌培養(yǎng)方法也屬于影響陽(yáng)性率的因素，如BacT/ALERT3D法、改良羅氏培養(yǎng)法的結(jié)果存在一定的差異，也需進(jìn)行比較研究[2]。為此，該次研究對(duì)脊柱結(jié)核不同技術(shù)與病理標(biāo)本結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)及藥敏試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行了探討，以2016年2月—2018年2月期間收治的96例為對(duì)象，報(bào)道如下。

1? 資料與方法

1.1? 一般資料

方便選擇該院行不同手術(shù)方式獲取的脊柱結(jié)核患者的病理標(biāo)本作為資料，共96例，均經(jīng)臨床、影像學(xué)、組織病理學(xué)及實(shí)驗(yàn)室相關(guān)檢查確診。96例患者中男性52例，女性44例，年齡在15～72歲之間，平均年齡為（38.61±2.45）歲，包含頸椎結(jié)核3例，胸椎結(jié)核34例，胸腰段結(jié)核26例，腰椎結(jié)核17例，腰骶部結(jié)核16例。患者均知情且同意，研究經(jīng)過(guò)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2? 方法

96例患者采用不同手術(shù)方式獲取標(biāo)本，采用無(wú)菌注射液吸取膿液，骨刀切取骨病灶，置于無(wú)菌平皿密封。

BacT/ALERT3D法：采用油酸、甘油、紫色燃料及1%牛血清蛋白組成10 mL復(fù)合溶液，在處理培養(yǎng)瓶中加入0.5 mL抗生素，接種經(jīng)中和或離心沉淀后標(biāo)本0.5 mL，經(jīng)掃描確認(rèn)后，置入BacT/ALERT3D全自動(dòng)分支桿菌培養(yǎng)儀中，由儀器自動(dòng)監(jiān)測(cè)，提示陽(yáng)性后取出，陰性在儀器報(bào)告陰性后取出。改良羅氏培養(yǎng)法嚴(yán)格依據(jù)《結(jié)核病診斷細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)規(guī)程》[3]操作。

將培養(yǎng)結(jié)果陽(yáng)性的病灶組織依據(jù)《結(jié)核分枝桿菌藥物敏感試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)化操作程序及質(zhì)量保證手冊(cè)》[4]進(jìn)行操作。

1.3? 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理分析，計(jì)量數(shù)據(jù)采用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，進(jìn)行t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用[n（%）]表示，進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2? 結(jié)果

2.1? 不同培養(yǎng)方法檢出陽(yáng)性率比較

BacT/ALERT3D法檢出陽(yáng)性率36.50%顯著高于改良羅氏培養(yǎng)法23.26%（χ2=24.67，P<0.05）。

2.2? 不同病理標(biāo)本培養(yǎng)結(jié)果分析

在BacT/ALERT3D法中，病理標(biāo)本病灶壁培養(yǎng)結(jié)果陽(yáng)性率45.09%顯著高于膿液陽(yáng)性率28.98%，在改良羅氏培養(yǎng)法中，病理標(biāo)本病灶壁培養(yǎng)結(jié)果陽(yáng)性率31.27%顯著高于膿液陽(yáng)性率16.24%，即不同病理標(biāo)本培養(yǎng)結(jié)果均存在差異，且均以病灶壁陽(yáng)性率最高（P<0.05）。

3? 討論

目前在脊柱結(jié)核診斷中可采用BacT/ALERT3D法和改良羅氏培養(yǎng)法進(jìn)行結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)，其中羅氏培養(yǎng)法培養(yǎng)基含有谷氨酸鈉，可為細(xì)菌提供多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，且具有毒性低，補(bǔ)充無(wú)機(jī)鹽等優(yōu)勢(shì)，利于細(xì)菌的生長(zhǎng)，可為大多數(shù)分支桿菌提供良好的環(huán)境[5-6]。改良羅氏培養(yǎng)法將丙酮酸鈉代替丙三醇，進(jìn)一步促進(jìn)牛分至桿菌和非洲分至桿菌的生長(zhǎng)，利于進(jìn)一步提高標(biāo)本陽(yáng)性率[7]。BacT/ALERT3D法屬于全自動(dòng)非放射性的快速細(xì)菌培養(yǎng)系統(tǒng)，培養(yǎng)基中含有肉湯、油酸、甘油等成分，且其將牛血清代謝結(jié)合游離脂肪酸，起到保護(hù)結(jié)核分至桿菌的作用[8]。BacT/ALERT3D法主要是利用二氧化碳比色對(duì)結(jié)核分枝桿菌的生長(zhǎng)情況進(jìn)行顯示，當(dāng)分支桿菌生長(zhǎng)時(shí)，二氧化碳滲透至感應(yīng)器，并改變感應(yīng)器的酸堿度值，顏色會(huì)由深綠色變?yōu)辄S色，且可實(shí)現(xiàn)自動(dòng)連續(xù)檢測(cè)[9]。該次研究結(jié)果顯示BacT/ALERT3D法檢出陽(yáng)性率36.50%顯著高于改良羅氏培養(yǎng)法23.26%（P<0.05）;表明BacT/ALERT3D法檢出檢出價(jià)值更高，與改良羅氏培養(yǎng)法易受到標(biāo)本采集、保存條件及實(shí)驗(yàn)操作等因素影響相比，其具有操作簡(jiǎn)單、結(jié)果準(zhǔn)確等優(yōu)勢(shì)，利于為結(jié)核病的早期診治提供可靠依據(jù)。脊柱結(jié)核存在菌量多、毒力強(qiáng)等特征，會(huì)表現(xiàn)出漿液性或漿液纖維蛋白性炎，并經(jīng)過(guò)一系列病理變化形成結(jié)核性肉芽及干酪樣壞死物，伴隨大量的結(jié)核桿菌。該次研究結(jié)果顯示在BacT/ALERT3D法中，病理標(biāo)該病灶壁培養(yǎng)結(jié)果陽(yáng)性率45.09%顯著高于膿液陽(yáng)性率28.98%（χ2=16.41，P<0.05），在改良羅氏培養(yǎng)法中，病理標(biāo)本病灶壁培養(yǎng)結(jié)果陽(yáng)性率31.27%顯著高于膿液陽(yáng)性率16.24%（χ2=18.55， P<0.05），即不同病理標(biāo)本培養(yǎng)結(jié)果均存在差異，且均以病灶壁陽(yáng)性率最高（P<0.05），表明膿液是壞死組織，里面的結(jié)核桿菌較少，而病灶壁則具有一定的優(yōu)勢(shì)。與孫宇航等[12]《脊柱結(jié)核不同技術(shù)與病理標(biāo)本結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)及藥敏試驗(yàn)的比較》結(jié)果，Bac T/ALERT 3D法和改良羅氏培養(yǎng)法培養(yǎng)結(jié)核分枝桿菌的陽(yáng)性率分別為32.82%和20.99%。兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;Bac T/ALERT3D法中膿液、肉芽組織、病灶壁3種標(biāo)本的陽(yáng)性率分別為34.17%、23.08%、15.58%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;改良羅氏培養(yǎng)法中上述3種標(biāo)本的陽(yáng)性率分別為26.13%、12.43%、5.84%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）”基本一致。

綜上所述，為實(shí)現(xiàn)結(jié)核病的早期應(yīng)選擇病灶壁標(biāo)本培養(yǎng)，并采用BacT/ALERT3D法，具有陽(yáng)性率高的優(yōu)勢(shì)，值得推廣。

[參考文獻(xiàn)]

[1]? 金陽(yáng)輝， 石仕元， 鄭琦，等. Xpert MTB/RIF在脊柱結(jié)核診斷及利福平耐藥檢測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值[J].中國(guó)骨傷，2017，30（9）：787-791.

[2]? 蒲艷. 結(jié)核分枝桿菌熒光判讀藥敏試驗(yàn)的方法探討[J]. 海峽藥學(xué)， 2017， 29（7）：82-83.

[3]? 周偉杰. 青島市胸科醫(yī)院肺外結(jié)核的分枝桿菌培養(yǎng)及藥敏試驗(yàn)結(jié)果分析[J]. 中國(guó)保健營(yíng)養(yǎng)， 2016， 26（33）：11.

[4]? 牛家峰， 尚永明， 張寧，等. 復(fù)治肺結(jié)核患者痰液耐藥結(jié)核分枝桿菌鑒定中熒光定量PCR與反向點(diǎn)雜交技術(shù)的聯(lián)合應(yīng)用[J]. 山東醫(yī)藥， 2016， 56（31）：69-71.

[5]? 李論宇， 別明江， 阿忠，等. 西藏地區(qū)135株結(jié)核分枝桿菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果分析[J]. 西部皮革， 2016， 38（24）：36.

[6]? Hühns M， Erbersdobler A， Obliers A， et al. Identification of HPV Types and Mycobacterium Tuberculosis Complex in Historical Long-Term Preserved Formalin Fixed Tissues in Different Human Organs：[J].Plos One， 2017， 12（1）：e0170353.

[7]? 陳林， 沈靜， 朱大冕，等. 基因芯片技術(shù)在檢測(cè)痰涂陽(yáng)肺結(jié)核患者結(jié)核分枝桿菌耐藥性的應(yīng)用效果[J]. 檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2017，14（9）：1220-1223.

[8]? 周正， 王曉蕾， 陳海燕，等. GeneXpert MTB/RIF在脊柱結(jié)核診斷中的應(yīng)用[J]. 山東醫(yī)藥， 2017， 57（17）：90-92.

[9]? 張智發(fā)， 楊曉清， 楊全中，等. 經(jīng)后腹膜腹腔鏡清除結(jié)核性腰大肌膿腫的臨床應(yīng)用[J].中華腔鏡外科雜志：電子版， 2016， 9（2）：89-92.

[10]? Eminaga O， Bettendorf O， Bettendorf O， et al. Analysis of topographical distribution of prostate cancer and related pathological findings in prostatectomy specimens using cMDX document architecture[J]. Journal of Biomedical Informatics， 2016， 59（C）：240-247.

[11]? 葉勇軍， 鐘瓊. CT引導(dǎo)下脊柱穿刺活檢術(shù)的應(yīng)用及并發(fā)癥[J]. 江西醫(yī)藥， 2016， 51（11）：1285-1286.

[12]? 孫宇航， 王騫， 施建黨，等. 脊柱結(jié)核不同技術(shù)與病理標(biāo)本結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)及藥敏試驗(yàn)的比較[J].中國(guó)矯形外科雜志， 2018，24（2）：159-163.

（收稿日期：2018-10-13）