吳 翠，徐 靚，馬玉翠，洪 專，晉文慧，巢志茂

(1. 中國中醫(yī)科學院中藥研究所，北京 100700； 2. 國家中藥材產(chǎn)業(yè)技術體系貯藏與包裝崗位，北京 100700； 3. 國家海洋局第三海洋研究所，廈門 361005)

貯藏是中藥材從采收加工到臨床使用前的重要環(huán)節(jié)。受貯藏環(huán)境和自身特性的影響，中藥材易出現(xiàn)變色、霉變、蟲蛀、酸敗等多種肉眼可見的變質(zhì)現(xiàn)象，其中所含化學成分則出現(xiàn)含量的增多、減少、成分消失或產(chǎn)生新的成分[1]。觀察和測定中藥材在貯藏過程中物理和化學性質(zhì)隨貯藏時間的動態(tài)變化有利于控制中藥材的質(zhì)量，對中藥材合理貯藏時間的制定具有突出的實用價值和參考意義。

常用中藥材菊花是菊科植物菊ChrysanthemummorifoliumRamat.的干燥頭狀花序，功效為清熱解毒、散風清熱、平肝明目等，在臨床使用時常用于頭痛眩暈、風熱感冒、目赤腫痛等癥狀[2]，被原衛(wèi)生部列入《既是食品又是藥品的物品名單》中，并使用廣泛。菊花配伍天麻可以提高天麻對陰虛陽亢型高血壓的治療效果[3]，配伍蒲公英、赤芍等組成的菊花煎對潰瘍性結(jié)腸炎患者血液內(nèi)血小板膜糖蛋白異常體現(xiàn)出較好的抑制作用[4]。菊花中的酚類成分具有抗氧化活性[5]，總黃酮對大鼠心肌缺血具有保護作用[6]，b-欖香烯是菊花揮發(fā)油中的主要成分，研究表明其具有很好的抑癌作用[7]。文獻顯示，菊花在實驗室的自然條件下貯藏3年會出現(xiàn)變色和蟲蛀現(xiàn)象[8]，隨著貯藏時間的延長，總黃酮的含量逐漸降低[8]，質(zhì)量下降。但尚未見菊花在不同貯藏庫中不同貯藏時間下理化指標變化的文獻報道。

本實驗將購得菊花分裝后，分別放置于簡易庫和冷藏庫中貯藏，于貯藏過程中固定的時間間隔取出，觀察外觀、測定化學成分的含量，以觀察菊花在貯藏過程中外在物理性質(zhì)和內(nèi)在化學成分含量隨貯藏時間的動態(tài)變化，以期為其在貯藏過程中質(zhì)量的控制提供實驗以及數(shù)據(jù)基礎。

1 材料與方法

1.1 試劑

綠原酸對照品(批號PS11111001，純度98.84%)，3,5-O-二咖啡酰基奎寧酸對照品(批號PS11101302，純度98.64%)，木犀草苷對照品(批號PS0342-0020，純度98.5%)。甲醇和乙腈為色譜純(Thermo Fisher Scientific公司)，水為娃哈哈純凈水(杭州娃哈哈集團有限公司)，乙醇、磷酸、冰醋酸為分析純(北京化學工業(yè)集團有限責任公司)。

1.2 主要儀器

Shimadzu LC-20AT型高效液相色譜儀，配備SIL-20 A型自動進樣器，DGU-20A5型自動脫氣機，LC-20AT型泵，SPD-M20 A型二極管陣列檢測器，CTO-10ASvp柱溫箱，LC-solution色譜工作站(日本Shimadzu公司)，XS105 Dual Range型電子分析天平(感量為0.01 mg)(Mettler Toledo儀器系統(tǒng)有限公司)，Ohaus CP224C型電子天平(感量為0.1 mg，奧豪斯(上海)儀器有限公司)，KQ-100E型超聲波清洗器(100 W，40 kHz，昆山市超聲儀器有限公司)，JWS-A5型溫濕度表(北京市亞光儀器有限責任公司)，DFT-50 A型手提式高速粉碎機(溫嶺市林大機械有限公司)，比澤爾5P系統(tǒng)壓縮機(Bizeer制冷技術(中國)有限公司)，高翔DL60冷風機(浙江高翔工貿(mào)有限公司)。

1.3 貯藏庫的建立

表1顯示，簡易庫未進行溫濕度和光照等調(diào)節(jié)，每天上午10點記錄溫度和濕度。冷藏庫采用冷風機控制倉庫溫濕度，從而保持恒定溫度和濕度環(huán)境，采用紙箱密封控制光照。

表1 簡易庫溫濕度

1.4 藥材

本實驗所用菊花樣品品種為亳菊，2014年從河北安國藥材市場購買，由中國中醫(yī)科學院中藥研究所巢志茂研究員鑒定為菊科植物菊ChrysanthemummorifoliumRamat.的干燥頭狀花序，樣品在貯藏之前放置于該所1016實驗室。

2014年7月11日，將菊花分裝于白色不透光的塑料編織袋中，分別放置于簡易庫和冷藏庫中貯藏，留出適量菊花作為0月的樣品。分別于貯藏日期為2014年10月31日、2015年4月30日和10月31日、2016年4月30日和10月31日、2017年4月30日時，從庫中取出適量菊花樣品，作為貯藏3、9、15、21、27、33個月的樣品。

1.5 外觀觀察

表2顯示，從簡易庫和冷藏庫中取出適量樣品，平鋪于白色搪瓷盤中，在日光下觀察菊花樣品的色澤和質(zhì)地并記錄。

1.6 水分測定

取“1.5”項下樣品適量粉碎，過一號篩，按2015版《中國藥典》通則水分含量測定項下規(guī)定的第二法即烘干法[10]進行測定。

1.7 綠原酸、3,5-O-二咖啡?；鼘幩岷湍鞠蒈盏暮繙y定

1.7.1 色譜條件 Dikma Diamonsil C18(2)色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 mm)，以乙腈為流動相A，以0.1%磷酸溶液為流動相B進行梯度洗脫(0～11 min，90%A→82%B；11～30 min，82%A→80%B；30～40 min，80%B)，檢測波長設定為348 nm，流速為1.0 mL·min-1，柱溫為35 ℃，進樣量為10 mL。

1.7.2 對照品溶液的制備 取對照品綠原酸、3,5-O-二咖啡?；鼘幩岷湍鞠蒈者m量，分別精密稱定0.9 mg、0.6 mg和2.0 mg，用70%甲醇其溶解于體積為10 mL棕色量瓶中并加至刻度，配制成濃度分別為0.036 mg·mL-1、0.024 mg·mL-1和0.08 mg·mL-1的對照品溶液。

表2 簡易庫與冷藏庫中菊花的色澤、質(zhì)地、水分、綠原酸、3,5-O-二咖啡酰基奎寧酸、木犀草苷的結(jié)果

1.7.3 供試品溶液的制備 圖1表2顯示，取“1.6”項下樣品粉末0.25 g精密稱定，放入體積為50 mL的具塞錐形瓶中，精密加入25 mL70%的甲醇，密塞并稱定重量后超聲處理40 min取出，放至室溫后第2次稱定重量，以70%的甲醇補足超聲處理減失的重量，搖勻并濾過，取續(xù)濾液過0.22 mm微孔濾膜即得。對照品與供試品的HPLC色譜圖。采用外標一點法計算干品中的含量。

注：A.對照品；B.供試品；1.綠原酸；2.木犀草苷；3.3,5-O-二咖啡?；鼘幩釄D1 對照品和菊花供試品的HPLC圖

2 結(jié)果

2.1 貯藏庫溫濕度變化

簡易庫溫度范圍為15～42 ℃，濕度范圍為30%～74% RH。冷藏庫溫度在整個貯藏過程中均保持在3.5～5.0 ℃，濕度均保持在65～75% RH相對濕度。

2.2 色澤和質(zhì)地

表2結(jié)果顯示，簡易庫中的菊花色澤從0月的類白色到第15個月的黃白色，再到第27個月出現(xiàn)黃褐色，色澤顯著加深；質(zhì)地在第27個月時出現(xiàn)輕脆易碎的現(xiàn)象。冷藏庫中的菊花色澤在第27個月才出現(xiàn)黃白色，并一直保持到第33個月，質(zhì)地始終保持體輕質(zhì)柔潤的狀態(tài)。

2.3 水分

表2結(jié)果顯示，菊花的水分含量最高值為0月時的12.26%，之后出現(xiàn)小幅度下降，簡易庫中的最低值為7.22%，冷藏庫中最低值為8.46%，均在《中國藥典》規(guī)定的不得高于15%的范圍內(nèi)。

2.4 有效成分的含量

綠原酸、3,5-O-二咖啡?；鼘幩岷湍鞠蒈帐蔷栈ǖ挠行С煞郑瑢τ谄浜繙y定，按照《中國藥典》規(guī)定的HPLC方法直接進行測定[2]，因此未進行方法學考察的試驗。

表2結(jié)果顯示，綠原酸的含量，0月時最高為3.431 mg·g-1。在簡易庫貯藏27個月后出現(xiàn)下降，最低值為2.536 mg·g-1，下降了26.1%；在冷藏庫中含量基本保持不變。

3,5-O-二咖啡酰基奎寧酸的含量，0月時最高，為21.62 mg·g-1。在簡易庫貯藏15個月后出現(xiàn)下降，最低值為16.89 mg·g-1，下降了21.8%，之后未再繼續(xù)下降；在冷藏庫中的含量基本保持不變。

木犀草苷的含量出現(xiàn)了波動，總體呈現(xiàn)升高趨勢。在簡易庫貯藏15個月后升高到1.622 mg·g-1，最高值為第27個月時的1.705 mg·g-1，上升了1.12倍。在冷藏庫貯藏27個月后升高到1.861 mg·g-1，上升了1.31倍。

3 討論

本實驗中所用菊花為亳菊，類白色，體輕質(zhì)柔潤。在簡易庫中貯藏15個月時出現(xiàn)了輕度的變色，呈黃白色，但是在貯藏27個月后加深為黃褐色，質(zhì)地輕脆易碎，影響臨床的調(diào)劑。在冷藏庫中貯藏27個月后才出現(xiàn)輕度的色澤加深，為黃白色，依舊體輕柔潤。相比于冷藏庫，簡易庫中菊花的色澤在每個時段都相對較深。

在貯藏33個月的過程中，菊花的水分始終在《中國藥典》規(guī)定的不得高于15%的范圍內(nèi)，不過在簡易庫貯藏27個月后低到了7.22%。這與花類藥材失水后色澤會由鮮艷變?yōu)榘档?，從而造成感官上色澤加深[11]的現(xiàn)象一致，說明冷藏庫的條件更有利于保持花類藥材的色澤。

綠原酸的含量盡管最低值低到0.25%，但依舊在中國藥典規(guī)定的不得低于0.20%的范圍內(nèi)。綠原酸含量隨著貯藏時間的延長，出現(xiàn)的這種下降現(xiàn)象與綠原酸在溫度和光照的影響下會被破壞的報道[12-13]是一致的。

3,5-O-二咖啡?；鼘幩岬暮浚诤喴讕熘匈A藏15個月后出現(xiàn)了顯著的下降。文獻曾報道，該化合物在高溫的炒制條件下易被破壞[13]，本文的結(jié)果顯示，即使是在最高42 ℃的簡易庫條件下也會出現(xiàn)一定程度的破壞。不過，即使經(jīng)過33個月的貯藏，無論是簡易庫還是冷藏庫，仍然在中國藥典規(guī)定的不得低于0.70%的范圍內(nèi)。

綜合以上貯藏過程中外觀和理化指標的動態(tài)測定，冷藏更有利于質(zhì)量的穩(wěn)定，而在簡易庫條件下，建議其貯藏時間不得超過27個月。