潘虹 劉讓東 王薇薇 王彥 閻超

摘 要 以甲基丙烯酸縮水甘油酯（GMA）和乙二醇二甲基丙烯酸酯（EDMA）為功能性單體，偶氮二異丁腈（AIBN）為引發(fā)劑，加入γ-（甲基丙烯酰氧）丙基三甲氧基硅（γ-MAPS）修飾的氣相SiO2納米粒子（MFSNP），在二元致孔劑環(huán)己醇及十二烷醇的作用下，通過原位聚合反應(yīng)形成雜化poly（GMA-EDMA-MFSNP）整體柱。進(jìn)一步通過GMA的開環(huán)反應(yīng)，將苯丙氨酸（Phenylalanine）鍵合在雜化整體柱表面，制備了氣相SiO2納米粒子摻雜的新型雜化整體柱Phe-poly（GMA-EDMA-MFSNP）。對(duì)制備整體柱的各反應(yīng)物配比和苯丙氨酸的修飾條件等進(jìn)行優(yōu)化，在最優(yōu)條件下制備的整體柱為一類兩性離子整體柱，具有反相和離子交換結(jié)合的混合分離機(jī)制。將此整體柱用于加壓毛細(xì)管電色譜時(shí)，烷基苯、多環(huán)芳烴、苯甲酸類和苯酚類小分子以及多肽的分離效果良好，其中甲苯的分離柱效最高， 可達(dá)122592 N/m。

關(guān)鍵詞 氣相二氧化硅納米粒子; 苯丙氨酸; 雜化整體柱; 加壓毛細(xì)管電色譜

1 引 言

加壓毛細(xì)管電色譜（Pressurized capillary electrochromatography，pCEC）是一種新型的電動(dòng)微分離技術(shù)，兼有毛細(xì)管液相色譜（Capillary liquid chromatography，cLC）的高選擇性和毛細(xì)管電泳（Capillary electrophresis， CE）的高柱效、高分辨率及快速分離的特點(diǎn)。基于加壓毛細(xì)管電色譜平臺(tái)，不僅一些易電離的酸、堿及兩性物質(zhì)可得到分離，不易電離的中性物質(zhì)也能夠得到分離[1]。

毛細(xì)管柱作為毛細(xì)管色譜儀器的核心組件，直接影響分離效果。常見的毛細(xì)管柱可分為填充柱和空管柱。空管柱多用于毛細(xì)管電泳的分離，而填充柱則適用于加壓毛細(xì)管電色譜。整體柱作為一種新型色譜填充固定相，被譽(yù)為第四代色譜固定相，克服了二氧化硅填充柱的柱塞效應(yīng)，并且可以引入多種功能性基團(tuán)，是近年色譜領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)[2]，尤其是摻雜有納米材料的整體柱固定相更是發(fā)展迅速。在高效液相色譜（High performance liquid chromatography HPLC）或毛細(xì)管電色譜（Capillary electrochromatography CEC）的平臺(tái)上，摻雜有納米材料的整體柱可用于多種化合物的分離[3～7]。按照納米材料的引入方式，可分為后修飾和包埋兩種方式： 后修飾[8]是在整體柱制備完成后，再通過共價(jià)鍵或靜電相互作用，將納米材料鍵合到其孔隙表面; 包埋[9]即將納米材料摻雜到整體柱預(yù)聚合反應(yīng)液內(nèi)，與單體共同反應(yīng)，具有制備方法簡(jiǎn)單方便、易操作等優(yōu)點(diǎn)。Lei等[10]將3種核殼型納米粒子摻雜到poly（BMA-EDMA）中，制得雜化整體柱，發(fā)現(xiàn)雜化整體柱的比表面積顯著增大，在CEC分離模式下，有機(jī)酸的分離選擇性和柱效都有所提高。

氣相SiO2納米粒子（Fumed silica nanopartilces，F(xiàn)SNP）粒徑小，比表面積大，其表面的硅羥基易于用功能性試劑修飾，從而可將修飾后的FSNP通過鍵合的方式嫁接到整體柱內(nèi)部。另外，經(jīng)修飾后的FSNP上的殘余硅羥基還可進(jìn)一步改性。Aydoan等[11]將表面修飾乙烯基的FSNP摻雜到poly（GMM-EDMA）聚合整體柱內(nèi)，在納米粒子的硅羥基上修飾碳十八烷基，在HPLC模式下，分離效果明顯提高，可用于苯酚類、苯胺類小分子和標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)的分離。

本研究以γ-（甲基丙烯酰氧）丙基三甲氧基硅（γ-Methacryloxypropyltrimethoxy silane）對(duì)FSNP進(jìn)行表面改性，合成了甲基丙烯?；揎椀臍庀郤iO2納米粒子（Methacryloyl fumed silica nanoparticle，MFSNP），并將其摻雜入poly（GMA-EDMA）聚合物反應(yīng)液中，合成雜化poly（GMA-EDMA-MFSNP）整體柱，并進(jìn)一步通過開環(huán)反應(yīng)將苯丙氨酸修飾到雜化poly（GMA-EDMA-MFSNP）整體柱的表面，合成了一種新型兩性雜化整體柱Phe-poly（GMA-EDMA-MFSNP）。將此整體柱應(yīng)用于pCEC，可實(shí)現(xiàn)多種小分子和多肽的良好分離。

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 儀器與試劑

TrisepTM2100加壓毛細(xì)管電色譜儀（美國(guó)Unimicro Technologie公司）; S-4800場(chǎng)發(fā)射掃描電子顯微鏡（SEM，日本電子株式會(huì)社）; IR/Nicolet 6700紅外光譜儀（美國(guó)Thermo Nicolet公司）; 石英毛細(xì)管柱（100 μm i.d. × 360 μm o.d.，河北永年銳灃色譜器件公司）。

乙腈（ACN）、甲醇（MeOH）（色譜純， 美國(guó)Tedia公司）; 甲基丙烯酸甘油酯（GMA，97%，美國(guó)Acros Organics公司）、乙二醇二甲基丙烯酸酯（EDMA，98%，美國(guó)Sigma-Aldrich公司）、偶氮二異丁腈（AIBN，上海試四赫維公司）、γ-（甲基丙烯酰氧）丙基三甲氧基硅（γ-MAPS，北京百靈威公司）; NaH2PO4、Na2HPO4（上海凌峰化學(xué)試劑有限公司）; 硫脲、丙苯、丁苯、環(huán)己苯、苊、菲、熒蒽、沒食子酸、間羥苯甲酸、3，5-二羥基苯甲酸、間苯三酚（上海阿拉丁生化科技股份有限公司）; L-苯丙氨酸、苯甲酸、甲苯、乙苯、4-硝基苯酚、水楊酸（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）; 對(duì)苯二酚、間苯二酚、間甲酚、鄰苯二酚（中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)有限公司）; 萘（上?；瘜W(xué)試劑采購(gòu)供應(yīng)站）; 苯并[a]蒽（美國(guó)Accustandard公司）; DE-11（97.05%）、DE-10（98.95%）（上海GL Biochem公司）; 緩激肽（Bradykinin）、蛋氨酸-腦啡肽（Met-Enkephalin）、Subtance P（≥95.0%， 上海生工生物工程公司）; 氣相SiO2納米粒子（Fumed silica nano-particle， FSNP，Aerosil 2000，粒徑為12 nm，比表面積為（200±25） m2/g，德國(guó)Degussa AG公司）。

2.2 甲基丙烯?；揎椀臍庀郤iO2納米粒子（MFSNP）的合成

采用γ-MAPS對(duì)FSNP表面烯基化[12]： 稱取1g FSNP于50 mL圓底燒瓶中，加入25 mL 乙醇和5.2 mL HCl溶液。超聲混合均勻后，磁力攪拌并升溫至80℃，并在升溫過程中逐滴加入3.6 mL γ-MAPS， 整個(gè)反應(yīng)持續(xù)6 h。反應(yīng)結(jié)束后，用水和無水乙醇洗滌至中性，45℃烘干，得到的產(chǎn)物即為甲基丙烯酰基化的氣相SiO2納米粒子（MFSNP），備用。

2.3 Poly（GMA-EDMA）整體柱和雜化poly（GMA-EDMA-MFSNP）整體柱的制備

2.3.1 Poly（GMA-EDMA） 整體柱的制備 制備毛細(xì)管整體柱前，先用γ-MAPS對(duì)石英毛細(xì)管空管進(jìn)行硅烷化預(yù)處理[13]。稱取GMA（30%， w/w）、EDMA（30%， w/w）、十二烷醇（30%， w/w）、環(huán)己醇 （30%， w/w）及單體質(zhì)量1%（w/w）的AIBN加入1.5 mL 離心管內(nèi)，渦旋混合均勻，超聲至澄清透明狀態(tài)，得到poly（GMA-EDMA）聚合物混合液。在上述混合液中通N2約5 min后，將該聚合物溶液填入到γ-MAPS預(yù)處理過的毛細(xì)管空管中，有效填入長(zhǎng)度為25 cm（總長(zhǎng)50 cm）。用橡膠塞密封毛細(xì)管柱兩端，放入60℃水浴中反應(yīng)12 h。反應(yīng)結(jié)束后，用甲醇沖洗，除去未反應(yīng)的單體和致孔劑，制備得到poly（GMA-EDMA） 整體柱。

2.3.2 雜化Poly（GMA-EDMA-MFSNP） 整體柱的制備 稱取適量2.2節(jié)制備的MFSNP，加入到poly（GMA-EDMA）聚合物混合液中，形成濃度為10 mg/mL的懸濁液，渦旋并超聲，使MFSNP均勻分散。在上述懸濁液中通N2約5 min后，將聚合物溶液填入到γ-MAPS預(yù)處理過的毛細(xì)管空管中，有效填入長(zhǎng)度為25 cm（總長(zhǎng)50 cm）。用橡膠塞密封柱毛細(xì)管柱兩端，放入60℃水浴中反應(yīng)12 h。反應(yīng)結(jié)束后，用甲醇沖洗，除去未反應(yīng)的單體和致孔劑，制得雜化poly（GMA-EDMA-MFSNP） 整體柱。

2.4 苯丙氨酸修飾的3種整體柱的制備

2.4.1 Phe-poly（GMA-EDMA） 整體柱的制備 稱取適量苯丙氨酸，用50 mmol/L NaH2PO4（pH 8）溶解，配制成0.1 mol/L苯丙氨酸溶液。將1 μL上述溶液注入到2.3節(jié)中制備的poly（GMA-EDMA）整體柱中，然后用橡膠塞密封毛細(xì)管柱兩端，放入60℃水浴中反應(yīng)12 h。反應(yīng)結(jié)束后，用水和甲醇沖洗除未反應(yīng)的苯丙氨酸，制備得苯丙氨酸修飾的Phe-poly（GMA-EDMA）整體柱。

2.4.2 雜化Phe-poly（GMA-EDMA-MFSNP）整體柱的制備 制備方法同2.4.1節(jié)，不同之處是將poly（GMA-EDMA）整體柱更換為2.3節(jié)制備的雜化poly（GMA-EDMA-MFSNP） 整體柱。

2.4.3 空白對(duì)照雜化poly（GMA-EDMA-MFSNP）整體柱的制備 為考察苯丙氨酸修飾雜化整體柱的效果，同時(shí)用不含苯丙氨酸的空白溶劑50 mmol/L NaH2PO4（pH=8）同法處理2.3節(jié)制備的雜化poly（GMA-EDMA-MFSNP）， 作為空白對(duì)照雜化整體柱，記作空白對(duì)照雜化poly（GMA-EDMA-MFSNP）整體柱。

2.5 整體柱性能考察

2.5.1 滲透率K的測(cè)定 在室溫條件下，采用毛細(xì)管液相色譜分離模式，以甲醇為流動(dòng)相，根據(jù)公式K=μLΔP×η[14]，測(cè)定整體柱的滲透率K。其中，μ為甲醇通過毛細(xì)管整體柱的線性流速，ΔP為甲醇通過毛細(xì)管整體柱的柱壓，L為毛細(xì)管整體柱的有效長(zhǎng)度，η為甲醇在室溫下的動(dòng)態(tài)粘滯度（0.58×10x3 Pa·s）。

2.5.2 電滲流的測(cè)定 以硫脲為電滲流分析物，在cLC和pCEC兩種模式下，根據(jù)公式μEOF=μeoE=Le/t02-Le/t01V/Lt [15]（1）計(jì)算電滲流（μEOF）大小。

其中，E為所施加的電場(chǎng)強(qiáng)度，Lt為整體柱的總長(zhǎng)度，Le為整體柱的有效長(zhǎng)度，t01和t02為硫脲分別為在cLC和pCEC模式下的保留時(shí)間。

2.5.3 色譜性能考察 在cLC和pCEC模式下，將毛細(xì)管整體柱用于分離不同類型的化合物，考察其色譜性能。毛細(xì)管整體柱規(guī)格為 25 cm （總長(zhǎng)50 cm） × 100 μm（I.D.），分流前進(jìn)樣環(huán)體積約為1 μL，分流比約為100∶1，實(shí)際進(jìn)樣量為10 nL。采用整體柱每米的理論塔板數(shù)計(jì)算柱效。保留因子（k）的計(jì)算公式如下：k=tm-t0t0（2）其中， tm為所測(cè)分離物質(zhì)的保留時(shí)間，t0為中性物質(zhì)的保留時(shí)間，本實(shí)驗(yàn)采用硫脲為中性物質(zhì)。

3 結(jié)果與討論

3.1 5種整體柱的制備流程

本研究共制備了5種類型的整體柱，以考察雜化Phe-poly（GMA-EDMA-MFSNP）整體柱的效果，如圖1所示。首先，以GMA和EDMA為單體，以十二烷醇和環(huán)己醇為致孔劑，通過原位聚合，制得poly（GMA-EDMA）整體柱; 其次，在聚合物反應(yīng)液中加入γ-MAPS修飾的氣相SiO2納米粒子（MFSNP），并通過原位聚合，制得摻雜MFSNP的雜化poly（GMA-EDMA-MFASNP）整體柱; 再次，在這兩種整體柱上，通過進(jìn)一步開環(huán)反應(yīng)，修飾苯丙氨酸（Phenylalanine），分別制得Phe-poly（GMA-EDMA）整體柱和雜化Phe-poly（GMA-EDMA-MFSNP）整體柱，這兩種整體柱后續(xù)可以用于考察摻雜MFSNP對(duì)于整體柱分離性能的影響。另外，為了比較苯丙氨酸修飾對(duì)雜化Phe-poly（GMA-EDMA-MFSNP）整體柱性能的影響，本研究還采用空白溶劑50 mmol/L NaH2PO4（pH=8）替代苯丙氨酸/NaH2PO4 溶液，制備了空白對(duì)照雜化poly（GMA-EDMA-MFSNP）整體柱。

3.3 雜化整體柱poly（GMA-EDMA-MFSNP）配方的優(yōu)化

3.3.1 Poly（GMA-EDMA） 整體柱配方優(yōu)化 首先對(duì)不含MFSNP的純聚合物整體柱poly（GMA-EDMA）配方進(jìn)行優(yōu)化，見表1。將AIBN設(shè)為GMA和EDMA質(zhì)量之和的1%[17]，當(dāng)單體中GMA和EDMA質(zhì)量比為3∶1， 致孔劑中環(huán)己醇和十二烷醇質(zhì)量比為1∶1時(shí)，改變單體與致孔劑之間的比例，其結(jié)果見表1中的1、2、3、4號(hào)柱。當(dāng)致孔劑的量減小時(shí)，整體柱滲透性降低，當(dāng)單體和致孔劑質(zhì)量比為40∶60時(shí)，整體柱柱效最高，因此確定單體與致孔劑的最佳質(zhì)量比為40∶60。

當(dāng)單體和致孔劑質(zhì)量比為40∶60，致孔劑中環(huán)己醇和十二烷醇質(zhì)量比為1∶1時(shí)，改變單體中GMA與EDMA的比例，其結(jié)果可見表1中的2、5、6、7號(hào)柱。當(dāng)GMA比例增大，整體柱的滲透性略有減小，在GMA比例達(dá)到30%即GMA和EDMA質(zhì)量比為3∶1 時(shí)，整體柱柱效最高，繼續(xù)增大GMA的比例，柱效下降。因此，選擇GMA∶EDMA的最佳比例為3∶1。

對(duì)致孔劑中環(huán)己醇和十二烷醇的比例進(jìn)行優(yōu)化，見表1中的2、8、9號(hào)柱。當(dāng)單體與致孔劑的質(zhì)量比為40∶60，單體中GMA與EDMA的質(zhì)量比為3∶1時(shí)，增大十二烷醇的比例，整體柱的滲透性增大; 當(dāng)十二烷醇的比例為30%，即十二烷醇與環(huán)己醇的質(zhì)量比為1∶1時(shí)，柱效最高。因此，將十二烷醇和環(huán)己醇的最佳比例確定為1∶1。

綜上所述，poly（GMA-EDMA）整體柱的最佳配方為單體和致孔劑質(zhì)量比為40∶60，GMA與EDMA的質(zhì)量比為3∶1，環(huán)己醇與十二烷醇的質(zhì)量比為3∶1，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。

3.3.2 雜化poly（GMA-EDMA-MFSNP）整體柱中摻雜MFSNP濃度的優(yōu)化 在柱2的基礎(chǔ)上，將MFSNP摻雜到聚合物混合液中，混合均勻后抽入毛細(xì)管柱內(nèi)，制作雜化poly（GMA-EDMA-MFSNP）整體柱。本實(shí)驗(yàn)考察了不同濃度MFSNP對(duì)整體柱性能的影響，如表2所示。3.4 苯丙氨酸修飾條件的優(yōu)化

上述合成的雜化poly（GMA-EDMA-MFSNP）整體柱骨架內(nèi)幾乎沒有帶電物質(zhì)，因此只能產(chǎn)生微弱的電滲流，不適用于pCEC平臺(tái)。所以在雜化poly（GMA-EDMA-MFSNP）整體柱表面引入苯丙氨酸，苯丙氨酸中的氨基可與GMA中的環(huán)氧基團(tuán)發(fā)生開環(huán)反應(yīng)，鍵合在其表面，未反應(yīng)的羧基和反應(yīng)后的仲胺基團(tuán)為帶電離子，可以產(chǎn)生電滲流。并且苯丙氨酸上的苯環(huán)可以增強(qiáng)雜化poly（GMA-EDMA-MFSNP）整體柱疏水作用，從而提高對(duì)疏水性分析物的分離效率。根據(jù)產(chǎn)生電滲流的大小，本研究對(duì)反應(yīng)所需的苯丙氨酸的濃度和反應(yīng)時(shí)間進(jìn)行優(yōu)化。以硫脲為測(cè)定電滲流大小的分析物，20 mmol/L PBS為緩沖溶液，在10 kV電壓作用下，測(cè)定整體柱的電滲流μEOF，結(jié)果見圖3。當(dāng)苯丙氨酸的濃度為 0.10 mol/L時(shí)， μEOF最大; 當(dāng)苯丙氨酸與整體柱反應(yīng)12 h時(shí)， μEOF最大。3.5 Phe-poly（GMA-EDMA-MFSNP）整體柱性能考察

3.5.1 整體柱的形貌特征 根據(jù)苯丙氨酸的最佳修飾條件，將其鍵合在雜化整體柱和純聚合物整體柱表面，分別得到雜化Phe-poly（GMA-EDMA-MFSNP）整體柱和Phe-poly（GMA-EDMA）整體柱，其場(chǎng)發(fā)射掃描電鏡圖見圖4A和4B，圖4C為未修飾苯丙氨酸的雜化poly（GMA-EDMA-MFSNP）整體柱的掃描電鏡圖。MFSNP 的平均粒徑為12 nm，比表面積為 （200 ± 25） m2/g。從圖4A可見，雜化Phe-poly（GMA-EDMA-MFSNP） 整體柱內(nèi)部呈多孔結(jié)構(gòu)，固定相和毛細(xì)管壁結(jié)合緊密，固定相內(nèi)部團(tuán)聚物分布較均勻。對(duì)比圖4A和4B可知，相比Phe-poly（GMA-EDMA） 整體柱，雜化Phe-poly（GMA-EDMA-MFSNP）整體柱內(nèi)部團(tuán)聚物分布更均勻，結(jié)構(gòu)更小，比表面積增大，有利于提高整體柱柱效。對(duì)比4A和4C可知，修飾苯丙氨酸前后，雜化poly（GMA-EDMA-MFSNP）整體柱內(nèi)部結(jié)構(gòu)未發(fā)生明顯改變。

3.5.2 Phe-poly（GMA-EDMA-MFSNP）的分離機(jī)理考察 在cLC模式下，考察了Phe-poly（GMA-EDMA-MFSNP）的分離機(jī)理。從圖5可見，隨著ACN濃度（45%～70%， V/V）增大，甲苯、乙苯和萘的保留因子k明顯減小，說明此整體柱呈反相分離機(jī)理。

此外，當(dāng)流動(dòng)相緩沖液pH值在2.5～3.7范圍內(nèi)，雜化Phe-poly（GMA-EDMA-MFSNP）整體柱的電滲流向陽極移動(dòng)，pH值越小，陽極電滲流越大（圖6）。這可能是由于苯丙氨酸的仲胺在酸性條件下帶正電荷，而羧酸的電離受到抑制; 隨著pH值增大，仲胺離子的電離減弱，羧酸的電離增強(qiáng)，在pH=3.7時(shí)，苯丙氨酸表面電荷基本為0，幾乎沒有電滲流。在pH 3.7～9.0范圍內(nèi)，羧酸的電離程度大于仲胺，因此苯丙氨酸表面帶負(fù)電，產(chǎn)生陰極電滲流，與文獻(xiàn)[18]報(bào)道結(jié)果基本一致。綜上，雜化Phe-poly（GMA-EDMA-MFSNP）為兩性柱，既可產(chǎn)生陽極電滲流，又可產(chǎn)生陰極電滲流，這也說明苯丙氨酸成功鍵合在整體柱表面。

3.5.3 雜化Phe-poly（GMA-EDMA-MFSNP）整體柱和Phe-poly（GMA-EDMA）整體柱的對(duì)比 在運(yùn)行電壓15 kV，流動(dòng)相包含10 mmol/L PBS緩沖液（pH 7.21）的條件下，雜化Phe-poly（GMA-EDMA-MFSNP）整體柱可對(duì)包括硫脲在內(nèi)的6種多環(huán)芳烴進(jìn)行基線分離。在同樣條件下，雖然不含MFSNP的純聚合物整體柱Phe-poly（GMA-EDMA）也可對(duì)這6種小分子進(jìn)行分離，但是分離柱效不及雜化Phe-poly（GMA-EDMA-MFSNP）整體柱，如表3所示。這說明加入MFSNP可以改善整體柱性能，使其表面積增大，內(nèi)部結(jié)構(gòu)均勻，從而提高了整體柱的柱效。

3.5.4 雜化Phe-poly（GMA-EDMA-MFSNP）整體柱與空白對(duì)照poly（GMA-EDMA-MFSNP）整體柱電滲流對(duì)比 制備一個(gè)空白對(duì)照柱，即空白對(duì)照雜化整體柱poly（GMA-EDMA-MFSNP）。雜化Phe-poly（GMA-EDMA-MFSNP） 整體柱和空白對(duì)照柱poly（GMA-EDMA-MFSNP）在cLC模式和pCEC模式下對(duì)硫脲和甲苯的分離效果見圖7。相對(duì)于cLC模式，雜化Phe-poly（GMA-EDMA-MFSNP） 整體柱在10 kV電壓作用下，硫脲和甲苯的保留時(shí)間明顯縮短，分離速度加快; 而空白對(duì)照柱poly（GMA-EDMA-MFSNP）在10 kV電壓作用下，保留時(shí)間的縮短并不明顯。3.5.5 雜化Phe-poly（GMA-EDMA-MFSNP）整體柱對(duì)小分子的分離 在pCEC模式下，運(yùn)行電壓為15 kV時(shí)，雜化Phe-poly（GMA-EDMA-MFSNP）整體柱可對(duì)包括硫脲在內(nèi)的6種中性烷基苯小分子進(jìn)行完全分離。其中甲苯的柱效可以達(dá)到122592 N/m，乙苯、丙苯、丁苯和環(huán)己苯的柱效分別為126211、125930、122973和116088 N/m，分離色譜圖如圖8A所示。據(jù)文獻(xiàn)[19]報(bào)道，poly（GMA-EDMA）整體柱經(jīng)苯丙氨酸修飾后，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)甲苯、乙苯、丙苯和丁苯的分離，其柱效分別為56700、44500、34500和34600 N/m。將該結(jié)果與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比，雜化Phe-poly（GMA-EDMA-MFSNP）整體柱的柱效明顯更高，這再次證明加入MFSNP可提高整體柱柱效。

3.5.6 雜化Phe-poly（GMA-EDMA-MFSNP）整體柱對(duì)多肽的分離 雜化Phe-poly（GMA-EDMA-MFSNP）整體柱表面鍵合的苯丙氨酸既含仲胺基團(tuán)，又有羧基，是一種兩性離子整體柱，其既具有離子交換的分離機(jī)理，

4 結(jié) 論

以滲透性和柱效為考察指標(biāo)，對(duì)poly（GMA-EDMA）整體柱的配方進(jìn)行優(yōu)化，在優(yōu)化的配方中加入了γ-（甲基丙烯酰氧）丙基三甲氧基硅烷（γ-MAPS）修飾的氣相SiO2納米粒子（MFSNP），使其共價(jià)結(jié)合在poly（GMA-EDMA）內(nèi)部，并進(jìn)一步通過苯丙氨酸修飾，制備了新型雜化Phe-poly（GMA-EDMA-MFSNP）整體柱。此雜化Phe-poly（GMA-EDMA-MFSNP）整體柱滲透性良好，內(nèi)部結(jié)構(gòu)分布均勻，其電滲流方向隨緩沖液pH值變化而變化，是一種兩性離子整體柱，且具有反相和離子交換相結(jié)合的混合分離模式，對(duì)小分子和多肽化合物都可以進(jìn)行良好的分離。本研究為制備新型雜化整體柱的研究和發(fā)展提供了借鑒。

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