鄧 超 孔立紅

(湖北中醫(yī)藥大學(xué),武漢 430060)

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎是一種常見的免疫性疾病，該病以關(guān)節(jié)滑膜組織破壞為主要病理特征。在有關(guān)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的實驗研究中，常常需要取大鼠的滑膜組織，如何快速準(zhǔn)確地取出大鼠的滑膜組織是實驗成敗的關(guān)鍵之一[1]。取大鼠膝關(guān)節(jié)滑膜的傳統(tǒng)方法[2-3]是：將大鼠仰位固定，沿后肢膝關(guān)節(jié)正中縱行切開直至暴露出以膝關(guān)節(jié)為中心約3 cm×3 cm的區(qū)域，沿髕骨上沿向下切割至髕骨，再分別沿髕骨兩側(cè)向下分離至脛骨，此時即打開膝關(guān)節(jié)腔，見由髕骨下極向下延續(xù)的一層平滑光亮呈淡黃色的滑膜組織。用眼科鑷鈍性分離關(guān)節(jié)囊的滑膜層和纖維層，完整剝離滑膜組織，最后以眼科鑷輕輕夾住其中央，用眼科剪完整剪下滑膜組織。這種方法效率比較低，通過大量的實踐我們總結(jié)出一種更加快速可行的取大鼠膝關(guān)節(jié)滑膜的方法，現(xiàn)介紹如下：

1 材料與方法

1.1 材料

泡沫板，注射器針頭，手術(shù)剪，手術(shù)刀柄，15號手術(shù)刀，眼科剪，眼科鑷。

1.2 實驗動物

Wistar大鼠，來源于湖北省實驗動物中心，體質(zhì)量200～220 g，許可證號：SCXK(鄂)2008-0005。

1.3 操作方法

1.3.1將大鼠用頸椎脫臼法處死，用注射器針頭仰位固定于泡沫板子上，后肢外展外旋屈膝固定。

1.3.2用鑷子捏起膝關(guān)節(jié)周圍皮毛，用手術(shù)剪剪開皮毛、切開皮下筋膜，暴露出大鼠膝關(guān)節(jié)周圍肌肉(如圖1所示)。

1.3.3用15號手術(shù)刀剝離大鼠膝關(guān)節(jié)周圍肌肉，此時以髕韌帶為標(biāo)志，剝離髕韌帶上方及兩側(cè)的肌肉群(如圖2所示)。

1.3.4小心橫向切開髕韌帶下方止點(脛骨結(jié)節(jié)處)，用鑷子從下向上捏起髕韌帶，此時即可看到髕下脂肪墊，小心剝離髕下脂肪墊，此時即可看到以髕骨為中心的關(guān)節(jié)囊(如圖3所示)。

1.3.5用眼科鑷鈍性分離表面的纖維層，即暴露出滑膜層。用眼科鑷捏起髕韌帶，即可看到以髕骨為中心的滑膜組織。用眼科剪小心剪下滑膜組織即可(如圖4所示)。

圖1 顯露大鼠膝關(guān)節(jié)周圍肌肉過程Fig.1 The process ofexposing musclearoundknee joint of rat

圖2 剝離大鼠膝關(guān)節(jié)周圍肌肉過程Fig.2 The process ofstripping muscle aroundknee joint of rat

圖3 剝離大鼠膝關(guān)節(jié)髕下脂肪墊過程Fig.3 The process of strippingsubpatellar pad ofkeen joint of rat

圖4 大鼠膝關(guān)節(jié)滑膜組織Fig.4 Synovial tissueof rat knee joint

2 討論

2.1 此方法較傳統(tǒng)方法的優(yōu)勢

(1)先剝離周圍的肌肉，能為后面暴露關(guān)節(jié)打好基礎(chǔ)，較傳統(tǒng)方法先縱行切開再向兩側(cè)分離可行性更高。而且肌肉在關(guān)節(jié)外，在沒切到髕骨之前可以髕韌帶為標(biāo)志切除周圍肌肉，操作時也可以粗糙一些，只要不切到髕韌帶并不會破壞關(guān)節(jié)內(nèi)的滑膜組織，因此既快速又能為后面操作帶來便利；(2)橫行切斷髕韌帶下方止點處，用鑷子提起髕韌帶，以髕韌帶為著力點向上分離，能更好地將滑膜組織完整地分離。

2.2 此方法的局限性

此方法是一種快速可行獲取大鼠滑膜組織的方法，但須要注意的是，取得的滑膜組織可能會有其他組織附著(如：脂肪組織，肌肉組織)，可滿足一般實驗要求，如做滑膜組織的病理切片，生化(ELISA)，蛋白、基因分析(western blot、PCR)等，需在無菌的條件下做滑膜細(xì)胞原代培養(yǎng)后進一步提取。