劉若楠，鄒東敏，侯海婷，劉 芳，馬玉忠

(河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，河北保定071000)

呼吸系統(tǒng)疾病是影響?zhàn)B羊業(yè)的重大疾病，這類疾病的特點(diǎn)是傳播速度快，難以控制。在該類疾病中尤以肺炎多發(fā)。肺炎主要由病原體和寄生蟲侵襲、飼養(yǎng)環(huán)境的改變、營養(yǎng)缺乏、應(yīng)激等因素引起。銀黃可溶性粉是金銀花和黃芩的提取物，具有止咳平喘，抗病毒，抗細(xì)菌及解熱等功效[1-2]，對動(dòng)物的呼吸道疾病，尤其對肺炎治療效果顯著。

河北省唐縣是全國聞名的育肥羊養(yǎng)殖大縣，當(dāng)前羊的存欄量為100多萬只，當(dāng)前羊肺炎的發(fā)病率很高。本研究選取該縣患肺炎的病羊，通過不同劑量的銀黃可溶性粉治療效果觀察，來確定銀黃可溶性粉的最佳治療劑量，以便為羊肺炎的中藥治療打下基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 藥品及試劑 銀黃可溶性粉，由北京生泰爾科技股份有限公司生產(chǎn)；普通瓊脂培養(yǎng)基，購自北京澳博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司；犢牛血清，購自杭州四季青生物公司；鏈球菌、肺炎雙球菌微量生化鑒定管，購自浙江省杭州天和微生物試劑有限公司；革蘭染色液，購自濰坊漢唐生物工程公司。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物及分組 選取河北省保定市唐縣某養(yǎng)殖場患肺炎小尾寒羊100只，體重在15～20 kg，隨機(jī)分為4組，對照組、試驗(yàn)1組、試驗(yàn)2組和試驗(yàn)3組，每天每只羊分別飼喂銀黃可溶性粉0、0.5 g、1 g、1.5 g。連用10 d，停藥后觀察10 d。

1.3 方法

1.3.1 病料采集與分離培養(yǎng) 用無菌棉拭子采取患羊的鼻腔分泌物，在超凈臺(tái)上將棉拭子用無菌生理鹽水稀釋，接種于血清營養(yǎng)瓊脂平板上，37 ℃培養(yǎng)18～24 h，鏡檢。

1.3.2 細(xì)菌純化和生化鑒定 將典型單菌落接種于血清營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板上，37 ℃恒溫培養(yǎng)18～24 h后，革蘭染色鏡檢，觀察細(xì)菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)。如果出現(xiàn)其他雜菌，按照上述方法再次進(jìn)行純化培養(yǎng)，直到血清瓊脂培養(yǎng)平板上全部為純化的細(xì)菌為止。用接種環(huán)挑取分離培養(yǎng)所得的單菌落，分別接種于細(xì)菌微量生化鑒定管中進(jìn)行鑒定。

1.3.3 臨床癥狀及剖檢變化 觀察病羊的臨床癥狀，選取病羊進(jìn)行尸體剖檢，并記錄病理變化。

1.3.4 病理組織學(xué)檢查 將采集的病料放入Bouin氏液中固定，制備石蠟切片，進(jìn)行病理組織學(xué)觀察。

1.3.5 血液常規(guī)指標(biāo)測定 在治療的第0天、10天、20天采集頸靜脈血液，用日本光電MEK～6450K 血細(xì)胞分析儀檢測血液常規(guī)指標(biāo)。

1.4 數(shù)據(jù)處理 用SPSS19.0軟件對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。P<0.05差異顯著，P<0.01差異極顯著。

2 結(jié)果

2.1 細(xì)菌的分離培養(yǎng)和純化 病料在血清瓊脂平板上培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)了2種菌落。一種為灰白色、透明的微小菌落(見中插彩版圖1)，該細(xì)菌革蘭染色為陽性，呈球形或卵圓形，長鏈狀排列，初步判斷為鏈球菌(見中插彩版圖2)。另一種為光滑、濕潤的菌落(見中插彩版圖3)，染色鏡檢為革蘭陽性球菌，呈圓形或橢圓形，大多成對，從形態(tài)上初步判斷為肺炎雙球菌(見中插彩版圖4)。

圖1 鏈球菌的分離培養(yǎng)

圖2 鏈球菌革蘭染色 (1 000×)

圖3 雙球菌分離培養(yǎng)

圖4 肺炎雙球菌革蘭染色 (1 000×)

2.2 細(xì)菌的生化鑒定

2.2.1 鏈球菌的生化鑒定 該菌對葡萄糖、果糖、乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，蔗糖只產(chǎn)酸，山梨醇、M.R.試驗(yàn)、 V-P試驗(yàn)、甘露醇試驗(yàn)陰性，符合鏈球菌的生化特征[5](表1)。

表1 鏈球菌生化鑒定結(jié)果

注：“+”陽性;“-”陰性.“⊕”產(chǎn)酸產(chǎn)氣

2.2 肺炎雙球菌的生化鑒定 根據(jù)生化結(jié)果可知，分離菌株能分解葡萄糖、果糖、乳糖、麥芽糖，甘露醇、山梨醇、七葉苷、M.R.、硝酸鹽還原試驗(yàn)陰性，符合肺炎雙球菌生化特性[3](表2)。

表2 肺炎雙球菌生化鑒定結(jié)果

注：+:陽性;-:陰性

2.3 臨床癥狀及剖檢變化

2.3.1 臨床癥狀觀察 病羊體溫升高，精神沉郁，食欲減退，并伴有腹瀉、消瘦、貧血、流鼻涕等癥狀。鼻液初期呈漿液性，后期變?yōu)槟撔?，呼吸次?shù)增多，嚴(yán)重者咳嗽、氣喘。糞便稀軟并混有黏液。有的病羊眼瞼腫脹，結(jié)膜充血。

2.3.2 剖檢病理變化 可見膽囊顯著腫大(見中插彩版圖5)；肺纖維化(見中插彩版圖6);呈大葉性肺炎，切開有大量泡沫流出；全身淋巴結(jié)腫脹，胃腸道黏膜充血、出血(見中插彩版圖7);皺胃黏膜出血嚴(yán)重(見中插彩版圖8)。有的病羊會(huì)伴有腹水；心臟質(zhì)軟，心內(nèi)膜及冠狀溝附近有出血點(diǎn)。

圖5 膽囊增大

圖6 纖維素性肺炎

圖7 腸道出血

圖8 皺胃出血

2.4 病理組織學(xué)觀察 可見肺泡壁增厚，肺間質(zhì)增寬，炎性細(xì)胞增多(見中插彩版圖10)(正常肺泡壁見中插彩版圖9);細(xì)支氣管也有部分滲出物(見中插彩版圖11);肺泡內(nèi)有大量滲出物(見中插彩版圖12);靜脈擴(kuò)張、充血，肺泡壁細(xì)胞增生。

圖9 正常肺泡壁 (100×)

圖10 肺間質(zhì)增寬 (100×)

圖11 細(xì)支氣管內(nèi)有滲出物 (400×)

圖12 肺泡內(nèi)滲出物 (400×)

2.5 血常規(guī)測定 如表3所示,0 d時(shí)，各組羊的白細(xì)胞和嗜中性粒細(xì)胞數(shù)顯著升高。10 d時(shí)，第1組、第2組羊的白細(xì)胞與對照組相比差異極顯著(P<0.01)，嗜中性粒細(xì)胞與對照組相比差異顯著(P<0.05)；20 d時(shí)，第2組、第3組羊的白細(xì)胞與對照組相比差異極顯著(P<0.01)，嗜中性粒細(xì)胞與對照組相比差異顯著(P<0.05)。

3 討論

通過病羊臨床癥狀觀察、病理剖檢及實(shí)驗(yàn)室診斷，確定引起羊肺炎的主要病原菌是鏈球菌和肺炎雙球菌。鏈球菌和肺炎雙球菌是在自然界分布廣泛，屬于條件致病菌。但是應(yīng)與巴桿菌鑒別診斷，后者為革蘭陰性菌。目前，我國對羊的支原體肺炎研究的較多，而對鏈球菌的研究相對較少。羊肺炎的發(fā)生涉及宿主、病原體、環(huán)境等因素。發(fā)病后造成羊免疫抑制和免疫調(diào)節(jié)功能下降[4]，引起纖維素性肺炎、敗血癥甚至死亡。肺炎時(shí)羊出現(xiàn)明顯的臨床癥狀和病理變化，血液常規(guī)指標(biāo)也明顯高于正常值。在治療的第10天時(shí)，第2組、第3組羊的白細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞數(shù)目都有了明顯的下降，說明炎癥反應(yīng)減輕。經(jīng)過20 d后，第2組和第3組白細(xì)胞和嗜中性粒細(xì)胞接近正常水平。通過以上數(shù)據(jù)可以看出，第2組和第3組的治療效果較好。綜合考慮，以第2組(金美康1.0 g/只)的用法和用量最佳，故每天每只羊 1.0 g銀黃可溶性粉，連用10 d，可以有效降低肺炎發(fā)生。

表3 血液常規(guī)指標(biāo)變化 (n=25)

指標(biāo)參考值第2組第3組0 d10 d20 d0 d10 d20 dWBC(×109/L)4.00-12.0032.89±0.0515.03±0.12**12.18±0.10**34.15±0.0913.56±0.11**12.45±0.10**Gran(×109/L)0.40-6.2418.90±0.147.43±0.08*9.90±0.03*19.50±0.117.83±0.04*6.02±0.07*

*:與對照組相比差異顯著(P<0.05)；**：與對照組相比差異極顯著(P<0.01)

目前，肺炎鏈球菌疫苗大多都是莢膜血清型疫苗，只能引起血清特異性反應(yīng)，有一定的局限性[9]，所以做好平時(shí)的預(yù)防工作尤為重要，規(guī)?；B(yǎng)羊場應(yīng)根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果選擇合理治療藥物[5]。本病全年均可發(fā)生，尤其冬春季節(jié)，注意防寒保暖，給予適量維生素，提高動(dòng)物本身的抵抗力，減少疾病的發(fā)生。