蔡澤宇，胡 偉，孟憲華，王正雄

湖北省宏源藥業(yè)科技股份有限公司武漢研發(fā)中心，湖北 武漢 430206

鹽酸阿那格雷由美國(guó)羅伯茨公司研發(fā)，1997年首次在美國(guó)上市，商品名Agrylin?，中文名安歸寧?，是美國(guó)食品與藥品監(jiān)督管理局（FDA）批準(zhǔn)的唯一一個(gè)針對(duì)原發(fā)性血小板增多癥的藥物［1-2］，在美國(guó)和歐盟均作為孤兒藥申報(bào)［3］，目前在中國(guó)暫未上市。阿那格雷三氯衍生物（結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖1）是鹽酸阿那格雷美國(guó)藥典標(biāo)準(zhǔn)和歐洲藥典標(biāo)準(zhǔn)中的主要雜質(zhì)之一，其化學(xué)名為 6，7，8-三氯-1，5-二氫咪唑［2，1-b］喹唑啉-2（3H）-酮。

圖1 阿那格雷三氯衍生物的結(jié)構(gòu)式Fig.1 Structure of anagrelide trichloro derivative

阿那格雷三氯衍生物的制備方法國(guó)內(nèi)鮮有文獻(xiàn)報(bào)道，為研究此化合物的具體合成過(guò)程，在參考鹽酸阿那格雷的合成［4-5］及其類似物的合成方法［6-7］基礎(chǔ)上，研究出合成阿那格雷三氯衍生物的方法（圖2）。三氯衍生物作為鹽酸阿那格雷重要的雜質(zhì)，對(duì)其進(jìn)行深入研究于鹽酸阿那格雷的開(kāi)發(fā)具有重大的意義，可為鹽酸阿那格雷質(zhì)量研究提供雜質(zhì)對(duì)照品，保障該藥品品質(zhì)。

阿那格雷三氯衍生物的合成是以3，4，5-三氯苯胺為起始原料，與水合氯醛、鹽酸羥胺在無(wú)水硫酸鈉、濃鹽酸作用下縮合成N-（肟基乙酰）-3，4，5-三氯苯胺，再在濃硫酸作用下環(huán)合得到4，5，6-三氯靛紅［8-10］；4，5，6-三氯靛紅在氫氧化鈉水溶液、過(guò)氧化氫作用下開(kāi)環(huán)氧化成6-氨基-2，3，4-三氯苯甲酸［10-11］，其在氫化鋁鋰作用下還原成6-氨基-2，3，4-三氯芐醇［12-14］；6-氨基-2，3，4-三氯芐醇在氯化亞砜作用下進(jìn)行氯化反應(yīng)，所得氯代產(chǎn)物再和甘氨酸甲酯鹽酸鹽縮合成 N-（6-氨基-2，3，4-三氯苯甲基）甘氨酸甲酯［15］；最后與氯甲脒鹽酸鹽在N，N-二異丙基乙胺作用下得到目標(biāo)產(chǎn)物［16］。總收率為14.5%（以3，4，5-三氯苯胺計(jì)）。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與化學(xué)試劑

Bruker AV 400型核磁共振儀（DMSO-d6為溶劑，TMS為內(nèi)標(biāo)）；AgilengtTechnologis 6200系列質(zhì)譜儀；WRS-3型熔點(diǎn)儀（上海儀電）。

所用試劑均為分析純或化學(xué)純，均為阿拉丁公司或國(guó)藥化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 N-（肟基乙酰）-3，4，5-三氯苯胺的合成將3，4，5-三氯苯胺（5.00 g，21 mmol）、水合氯醛（4.50 g，27 mmol）、無(wú)水硫酸鈉（6.50 g，46 mmol）、鹽酸羥胺（5.50 g，79 mmol）、濃鹽酸（2 mL）和水（150 mL）依次投入到500 mL三口瓶中，攪拌升溫至內(nèi)溫為70～80℃，保溫反應(yīng)2～3 h。反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)液降溫至0℃，過(guò)濾，適量水洗滌濾餅，60℃鼓風(fēng)干燥濾餅，得到灰色固體N-（肟基乙酰）-3，4，5-三氯苯胺（4.70 g，收率 83.5%）。LC/MS（m/s）［ES-API］：266.9［M+1］+，269.0［M+3］+，271.0［M+5］+；1H NMR（400MHz，DMSO）δ：7.63（s，1H），8.02（s，2H），10.60（s，1H），12.39（s，1H）。

1.2.2 4，5，6-三氯靛紅的合成 向100 mL三口瓶中加入濃硫酸（18 mL），攪拌加熱至反應(yīng)液溫度為70～80℃，在攪拌情況下分批次向其中加入N-（肟基乙酰）-3，4，5-三氯苯胺（4.70 g，17.67 mmol），加畢，保持內(nèi)溫70～80℃反應(yīng)1～2 h。反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)液降溫至室溫，然后將反應(yīng)液緩慢倒入至2 L攪拌的冰水混合液中，倒完后繼續(xù)攪拌30 min，過(guò)濾，水洗濾餅，濾餅60℃鼓風(fēng)干燥，得到紅褐色固體 4，5，6-三氯靛紅（4.20 g，收率 95.5%）。LC/MS（m/s）［ES-API］：250.0［M+1］+，251.8［M+3］+，254.0［M+5］+。

圖2 阿那格雷三氯衍生物的合成工藝Fig.2 Synthesis process of anagrelide trichloro derivative

1.2.3 6-氨基-2，3，4-三氯苯甲酸的合成 將 4，5，6-三氯靛紅（4.20 g，16.88 mmol）溶解于 6 mol/L氫氧化鈉水溶液（25.3 mL，151.92 mmol）中，并將此混合液加熱至內(nèi)溫50℃左右，保溫情況下，向其中加入體積分?jǐn)?shù)30%過(guò)氧化氫（4.28 g，33.76 mmol），保溫反應(yīng)1 h。反應(yīng)結(jié)束后降溫至室溫，并用濃鹽酸調(diào)節(jié)至中性，過(guò)濾，水洗濾餅，濾餅60℃鼓風(fēng)干燥，得到黃棕色固體 6-氨基-2，3，4-三氯苯甲酸（2.60 g，收 率 64.4%）。LC/MS（m/s）［ES-API］：222.0［M+1-H2O］+，223.9［M+3-H2O］+，226.0［M+5-H2O］+，240.0［M+1］+，242.0［M+3］+，244.0［M+5］+；1H NMR（400 MHz，DMSO+D2O）δ：6.93（s，1H）。

1.2.4 6-氨基-2，3，4-三氯芐醇的合成 氮?dú)獗Ｗo(hù)，在0 ℃下，向氫化鋰鋁（1.19 g，31.39 mmol）的四氫呋喃（40 mL）溶液中滴加 6-氨基-2，3，4-三氯苯甲酸（2.50 g，10.46 mmol）的四氫呋喃（80 mL）溶液，滴加完畢后25℃反應(yīng)2～3 h。反應(yīng)完后，向反應(yīng)液中滴加水（1.2 mL）和質(zhì)量分?jǐn)?shù)5%氫氧化鈉水溶液（1.2 mL），過(guò)濾，乙酸乙酯洗滌濾餅，濾液用水和飽和食鹽水各洗滌1次，無(wú)水硫酸鎂干燥有機(jī)相，過(guò)濾，濾液減壓濃縮至干，得到淺黃色固體 6-氨基-2，3，4-三氯芐醇（1.50 g，收率 63.7%）。LC/MS（m/s）：207.9［M+1-H2O］+，209.9［M+3-H2O］+，211.9［M+5-H2O］+。

1.2.5 N-（6-氨基-2，3，4-三氯苯甲基）甘氨酸甲酯的合成 向單口瓶中加入6-氨基-2，3，4-三氯芐醇（1.50 g，6.67 mmol）和苯（35 mL），攪拌溶液，并緩慢向其中加入氯化亞砜（1.90 g，15.97 mmol），加熱至40～50℃并反應(yīng)3～5 h，減壓濃縮反應(yīng)液；所得濃縮液用苯（70 mL）溶解，并將其滴入至甘氨酸甲酯鹽 酸 鹽（2.25 g、25 mmol）、三 乙 胺（2.70 g、26.7 mmol）和苯（20 mL）的混合溶液中，回流反應(yīng)1～2 h，降溫至10℃，過(guò)濾，苯洗滌濾餅，濾液用水洗滌2次，有機(jī)相用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾，濾液減壓濃縮至干，得到淺黃色固體N-（6-氨基-2，3，4-三氯苯甲基）甘氨酸甲酯（1.20 g，收率60.7%）。LC/MS（m/s）［ES-API］：297.0［M+1］+，299.0［M+3］+，301.0［M+5］+。

1.2.6 阿那格雷三氯衍生物的合成 將N-（6-氨基-2，3，4-三氯苯甲基）甘氨酸甲酯（1.20 g，4.05 mmol）和乙腈（30 mL）加入至反應(yīng)瓶中，攪拌溶解，再加入氯甲脒鹽酸鹽（0.70 g，6.08 mmol），加熱至40℃，加入乙酸（1.3 mL），升溫至回流并反應(yīng)5 h；反應(yīng)完后，降溫至55℃，滴加N，N-二異丙基乙胺（2.5 mL，14.32 mmol），滴加完畢后升溫至回流并反應(yīng)75 min；反應(yīng)完畢后降溫至50℃，加入水（9 mL），保溫反應(yīng)1 h，過(guò)濾，用水和乙醇洗滌濾餅，濾餅40℃鼓風(fēng)干燥得到類白色固體阿那格雷三氯衍生物（0.81 g，收率73.0%）。mp：＞340℃；LC/MS（m/s）［ES-API］：290.0［M+1］+，292.0［M+3］+，294.0［M+5］+；1H NMR（400 MHz，DMSO）δ：4.14（s，2H），4.63（s，2H），7.33（s，1H）。

2 結(jié)果與討論

4，5，6 -三氯靛紅的合成符合桑德邁爾靛紅合成的反應(yīng)機(jī)理，其主要關(guān)注點(diǎn)在于N-（肟基乙酰）-3，4，5-三氯苯胺與4，5，6-三氯靛紅的合成過(guò)程中溫度的控制，溫度過(guò)低會(huì)導(dǎo)致反應(yīng)收率很低，而溫度過(guò)高則會(huì)使產(chǎn)物出現(xiàn)碳化現(xiàn)象，實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，該步驟需要控制反應(yīng)溫度在70～80℃較為合理，4，5，6-三氯靛紅收率為 79.7%（以 3，4，5-三氯苯胺計(jì)）。4，5，6-三氯靛紅氧化開(kāi)環(huán)得到6-氨基-2，3，4-三氯苯甲酸的過(guò)程中，氫氧化鈉水溶液的摩爾濃度需控制在6 mol/L和反應(yīng)溫度為50℃，氫氧化鈉水溶液的濃度過(guò)低或溫度太低則導(dǎo)致反應(yīng)產(chǎn)物6-氨基-2，3，4-三氯苯甲酸純度不夠，且收率也較低；向4，5，6-三氯靛紅的氫氧化鈉溶液中滴加過(guò)氧化氫時(shí)需要控制內(nèi)溫在50℃左右以及反應(yīng)結(jié)束后需要調(diào)節(jié)pH值至中性，因?yàn)闇囟冗^(guò)低或pH值不合適，收率都偏低。阿那格雷三氯衍生物的合成參考了氯甲脒鹽酸鹽作為環(huán)合劑合成阿那格雷的方法，其優(yōu)點(diǎn)在于避免使用劇毒物溴化氰，有利于操作安全和人員防護(hù)。

3 結(jié) 語(yǔ)

本研究提出阿那格雷三氯衍生物的合成方法具有步驟少，收率高特點(diǎn)（總收率14.5%，以3，4，5-三氯苯胺計(jì)），且合成工藝與鹽酸阿那格雷的制備相似性較大，適用于在研究鹽酸阿那格雷的同時(shí)制備阿那格雷三氯衍生物，用于其質(zhì)量研究，具有良好的應(yīng)用前景。