劉義文 廖春嬌 樊利芳

[摘要]目的 檢測(cè)PPARγ與PGC-1在胃腺癌演變各階段過(guò)程中的表達(dá)，探討PPARγ和PGC-1在胃癌發(fā)生中的作用及其臨床病理意義。方法 選擇2011年1月～2016年9月荊州市第二人民醫(yī)院收集的135例胃腺癌組織標(biāo)本、52例正常胃黏膜組織標(biāo)本以及19例慢性萎縮性胃炎、31例腸上皮化生、16例不典型增生等不同程度癌前病變組織標(biāo)本。采用免疫組化方法，檢測(cè)PPARγ、PGC-1在各組標(biāo)本中的表達(dá)情況，分析正常胃黏膜、癌前病變、胃腺癌組織中PPARγ、PGC-1的陽(yáng)性表達(dá)差異以及PPARγ、PGC-1表達(dá)之間的相關(guān)性，并分析其表達(dá)與胃癌病理特征的關(guān)系。結(jié)果 PPARγ及PGC-1在胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率較癌前病變組織及正常胃黏膜組織中的表達(dá)降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。135例胃癌中，PPARγ與PGC-1的表達(dá)成顯著正相關(guān)（r=0.956，P<0.05）；PPARγ、PGC-1陽(yáng)性表達(dá)隨著胃癌組織分化程度的降低而降低（P<0.05），PPARγ、PGC-1陽(yáng)性表達(dá)與患者的Borrmann分型、Lauren分型、組織分化程度及TNM分期有關(guān)（P<0.05）。PPARγ、PGC-1陽(yáng)性表達(dá)與患者的性別、年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否無(wú)相關(guān)性（P>0.05）。結(jié)論 PPARγ、PGC-1表達(dá)與胃癌發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切，檢測(cè)PPARγ、PGC-1表達(dá)水平有助于預(yù)測(cè)胃癌的進(jìn)展。

[關(guān)鍵詞]胃腺癌；癌前病變；氧化物酶體增殖物激活受體γ；輔助活化因子1

[中圖分類號(hào)] R735.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2019）4（b）-0016-05

[Abstract] Objective To detect the expression of PPARγ and PGC-1 of the evolution of gastric adenocarcinoma in different stages， and to explore the role of PPARγ and PGC-1 in the development of gastric cancer and its clinicopathological significance. Methods From January 2011 to September 2016， 135 gastric adenocarcinoma tissue specimens， 52 normal gastric mucosa tissue specimens， 19 cases of chronic atrophic gastritis， 31 cases of intestinal metaplasia and 16 cases of atypical hyperplasia were collected from the Second People′s Hospital of Jingzhou City. The expression of PPARγ and PGC-1 was examined by immunohistochemical method. The difference of positive expression of PPARγ and PGC-1 in normal gastric mucosa， precancerous lesions and gastric adenocarcinoma were analyzed， and the correlation between the expression of PPARγ and PGC-1 and the pathological characteristics of gastric cancer were analyzed. Results The positive expression rates of PPARγ and PGC-1 in the gastric cancer tissues were lower than those in the precancerous lesion tissues and the normal gastric mucosa tissues， and the difference was statistically significant （P<0.05）. In 135 cases of gastric adenocarcinoma， the expression of PPARγ was positively correlated with PGC-1 expression （r=0.956， P<0.05）. The expression levels of PPARγ and PGC-1 were decreased with the lower ranked differentiation of gastric cancer （P<0.05）. The expression levels of PPARγ and PGC-1 were closely associated with the Borrmann type， Lauren classification， the histological differentiation and TNM tumor stage （P<0.05）. However， there was no significant association between the expression of PPARγ and PGC-1 and the gender， age and lymph node metastasis （P>0.05）. Conclusion The expression levels of PPAR and PGC-1 are closely related to the occurrence and development of gastric cancer. Monitoring the expression levels of PPARγ and PGC-1 may be helpful to predict the development and progression of gastric cancer.

[Key words] Gastric adenocarcinoma； Precancerous lesions； PPARγ； PGC-1

過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ（peroxisome proliferators-activated receptor gamma，PPARγ）是一類核轉(zhuǎn)錄因子[1]，有調(diào)節(jié)基因表達(dá)的作用，通過(guò)增加細(xì)胞凋亡從而實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞增殖的抑制[2]。PPARγ輔助活化因子1（PGC-1）屬于PPARγ的輔助活化因子家族，PGC-1通過(guò)與特異轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，對(duì)基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生巨大效應(yīng)。PGC-1對(duì)于線粒體功能、細(xì)胞能量代謝均有良好的調(diào)節(jié)作用，并通過(guò)這些作用的發(fā)揮參與到各種疾病的發(fā)生及發(fā)展當(dāng)中[3-5]。近年來(lái)的研究指出，PPAR-γ及PGC-1分別在多種腫瘤發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用，但具體的作用機(jī)制以及在臨床診斷及治療中的意義仍然不明了。以往研究顯示PPARγ在食管癌、濾泡甲狀腺癌、宮頸癌中表達(dá)下調(diào)[6-9]，在胰腺癌、卵巢癌中的表達(dá)明顯上調(diào)[10-11]，而關(guān)于PPARγ及PGC-1在胃癌及癌前病變中表達(dá)情況的研究相對(duì)較少，進(jìn)一步研究?jī)烧咴谖赴┣安∽兗拔赴┙M織中的表達(dá)，可明確PPARγ和PGC-1在胃癌演變各階段過(guò)程中的表達(dá)水平，為胃癌早期診斷及進(jìn)展提供依據(jù)。本研究對(duì)PPAR-γ、PGC-1在胃腺癌及癌前病變中的表達(dá)情況展開(kāi)研究。

1資料與方法

1.1一般資料

本研究的組織標(biāo)本為荊州市第二人民醫(yī)院2011年1月～2016年9月收集的135例胃腺癌組織標(biāo)本、52例正常胃黏膜組織標(biāo)本以及19例慢性萎縮性胃炎、31例腸上皮化生、16例不典型增生等不同程度癌前病變組織標(biāo)本。135例胃癌標(biāo)本中，男87例，女48例；患者的年齡為35～84歲，平均（67.33±4.27）歲；Borrmann分型：Ⅰ型2例，Ⅱ型19例，Ⅲ型103例，Ⅳ型11例；Lauren分型：腸型胃癌63例，彌漫型胃癌60例，混合型胃癌12例；WHO組織學(xué)分型：乳頭狀腺癌1例，高分化管狀腺癌1例，中分化管狀腺癌53例，低分化腺癌62例，未分化腺癌3例，黏液腺癌13例，印戒細(xì)胞癌2例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況：41例未發(fā)生轉(zhuǎn)移，94例發(fā)生轉(zhuǎn)移。本研究通過(guò)了本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核并遵循臨床相關(guān)倫理研究規(guī)定，所有患者均知情并簽署知情同意書(shū)。

1.2試劑

鼠抗人PPARγ單克隆抗體（批號(hào)：F16090-62，克隆號(hào)：3P25，上海撫生實(shí)業(yè)有限公司）、兔抗人PGC-1多克隆抗體（批號(hào)：100906B070，克隆號(hào)：G168-726，中杉金橋生物技術(shù)有限公司）、免疫組化試劑盒及DAB辣根過(guò)氧化物酶顯色試劑盒均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)公司（工作濃度為1∶100）。

1.3方法

1.3.1免疫組織化學(xué)法檢測(cè)組織中PPARγ、PGC-1表達(dá) 組織標(biāo)本經(jīng)10%甲醛固定后常規(guī)石蠟包埋，根據(jù)HE染色切片進(jìn)行挑選蠟塊，5 μm厚連續(xù)切片，免疫組化染色采用SP法，按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

1.3.2免疫組化結(jié)果判定 我院病理科主任使用奧林巴斯光學(xué)顯微鏡BX43觀察病理標(biāo)本（放大倍數(shù)為200倍）。PPARγ、PGC-1陽(yáng)性表達(dá)為黃色顆粒，染色部位主要集中于細(xì)胞核和（或）細(xì)胞漿，以染色程度評(píng)分、陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞百分比評(píng)分對(duì)PPARγ、PGC-1表達(dá)情況進(jìn)行評(píng)估。染色程度評(píng)分：無(wú)著色為0分；有輕度著色，呈現(xiàn)淺黃色為1分；有中度著色，呈現(xiàn)棕黃色為2分；有重度著色，呈現(xiàn)棕褐色為3分。陽(yáng)性細(xì)胞染色百分比評(píng)分：陽(yáng)性細(xì)胞<5%為0分；陽(yáng)性細(xì)胞在5%～25%之間為1分；陽(yáng)性細(xì)胞>25%～50%為2分；陽(yáng)性細(xì)胞>50%～70%為3分；陽(yáng)性細(xì)胞>70%為4分。染色結(jié)果=染色程度評(píng)分×陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞百分比評(píng)分，染色結(jié)果為0分，則為陰性（-），染色結(jié)果為1～4分為弱陽(yáng)性（+），染色結(jié)果為5～8分為中度陽(yáng)性（++），染色結(jié)果為9～12分為強(qiáng)陽(yáng)性（+++）。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)相關(guān)數(shù)據(jù)資料進(jìn)行處理分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)，采用Spearman相關(guān)分析對(duì)胃癌中PPARγ、PGC-1表達(dá)相關(guān)性進(jìn)行分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1正常胃黏膜、癌前病變、胃腺癌組織中PPARγ的表達(dá)情況分析

PPARγ在胃腺癌組織、不典型增生組織、腸上皮化生組織、慢性萎縮性胃炎組織及正常胃黏膜組織中的表達(dá)總陽(yáng)性率分別為54.07%（73/135）、87.50%（14/16）、83.87%（26/31）、89.47%（17/19）、71.15%（37/52）。各組織的PPARγ陽(yáng)性表達(dá)情況為癌前病變>正常胃黏膜>胃腺癌，各組織間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）（表1），具體表達(dá)情況見(jiàn)圖1（封四）。

2.2正常胃黏膜、癌前病變、胃腺癌組織中PGC-1的表達(dá)情況分析

PGC-1在胃腺癌組織、不典型增生組織、腸上皮化生組織、慢性萎縮性胃炎組織及正常胃黏膜組織中表達(dá)總陽(yáng)性率分別為48.15%（65/135）、62.50%（10/16）、87.10%（27/31）、89.47%（17/19）、69.23%（36/52）。各組織中的PGC-1陽(yáng)性表達(dá)情況為癌前病變>正常胃黏膜>胃腺癌，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）（表2），具體表達(dá)情況見(jiàn)圖2（封四）。

2.3 PPARγ、PGC-1陽(yáng)性表達(dá)與胃腺癌臨床病理特征的關(guān)系

對(duì)135例胃癌患者的PPARγ、PGC-1陽(yáng)性表達(dá)與病理關(guān)系進(jìn)行分析，結(jié)果顯示PPARγ、PGC-1陽(yáng)性表達(dá)與患者的Borrmann分型、Lauren分型、組織分化程度及TNM分期有關(guān)（P<0.05）。PPARγ、PGC-1陽(yáng)性表達(dá)與患者的性別、年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)（P>0.05）（表3）。

2.4胃腺癌中PPARγ、PGC-1表達(dá)相關(guān)性分析

本研究135例胃腺癌患者中，PPARγ、PGC-1均為陽(yáng)性者62例，均為陰性者59例，PPARγ陰性、PGC-1陽(yáng)性者3例，PPARγ陽(yáng)性、PGC-1陰性者11例，兩者之間的表達(dá)情況成正相關(guān)關(guān)系，r值絕對(duì)值為0.956，在0.8～1之間，接近于1（P<0.05），相關(guān)性強(qiáng)，具體見(jiàn)表4。

3討論

胃癌為臨床常見(jiàn)惡性腫瘤，發(fā)病率在我國(guó)各種腫瘤排名中居于第二位[12]。普遍觀點(diǎn)認(rèn)為胃癌是一個(gè)循序漸進(jìn)的發(fā)展過(guò)程，即由正常→癌前病變→癌變的演變過(guò)程。PPAR-γ屬于配體依賴核轉(zhuǎn)錄因子，有脂肪組織特異性，在各種代謝、腫瘤細(xì)胞的增殖分化及凋亡中都發(fā)揮重要作用[1-2]。PGC-1是PPAR-γ的主要轉(zhuǎn)錄刺激因子，直接影響其作用的發(fā)揮。在人食管癌中發(fā)現(xiàn)PPARγ表達(dá)下調(diào)[6]，然而在肺癌、結(jié)腸癌、乳腺癌中表達(dá)上調(diào)[13-15]。本研究結(jié)果顯示，PPARγ、PGC-1在癌前病變組織中的表達(dá)水平明顯高于正常胃黏膜組織（P<0.05），而在胃腺癌組織中的表達(dá)水平顯著低于癌前病變組織、正常胃黏膜組織（P<0.05），提示PPARγ、PGC-1水平降低在胃黏膜細(xì)胞惡變的過(guò)程中可能是一個(gè)重要因素，在胃癌發(fā)生過(guò)程中可能發(fā)揮抑制作用。PGC-1在胃癌發(fā)展、形成階段對(duì)于癌細(xì)胞的增殖、分化具有抑制作用，能夠保護(hù)機(jī)體防止癌細(xì)胞侵害，分泌水平迅速提升以適應(yīng)抑制癌細(xì)胞的需要，因此會(huì)出現(xiàn)癌前病變階段PPARγ、PGC-1表達(dá)水平上調(diào)現(xiàn)象，而隨著癌癥的形成、惡化，癌細(xì)胞大量增殖、分化，PGC-1對(duì)癌細(xì)胞的抑制作用受限，無(wú)法正常發(fā)揮，進(jìn)而出現(xiàn)表達(dá)下調(diào)現(xiàn)象。本研究結(jié)果提示PPARγ、PGC-1在癌前病變、癌癥發(fā)展惡化中表達(dá)水平呈現(xiàn)“上升→下降”變化趨勢(shì)，可能與其機(jī)體保護(hù)、癌抑制作用有關(guān)，但具體機(jī)制仍需要進(jìn)一步研究證實(shí)。

本研究發(fā)現(xiàn)PPARγ、PGC-1陽(yáng)性表達(dá)與患者的Borrmann分型、Lauren分型、WHO分型中管狀腺癌的組織分化程度及TNM分期有關(guān)（P<0.05），但未發(fā)現(xiàn)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有明顯相關(guān)性。廖山嬰等[16]的研究顯示，PPARγ在胃癌低分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中的表達(dá)水平有明顯提升，這與本研究有些許出入，可能與本研究選擇的病例數(shù)相對(duì)較少有關(guān)，對(duì)于這一問(wèn)題需進(jìn)一步深入研究分析。本研究結(jié)果顯示，PPARγ、PGC-1陽(yáng)性表達(dá)率隨著組織分化水平的降低而降低，提示Borrmann分型越高、Lauren分型越重、WHO分型中管狀腺癌的分化度越低，患者的PPARγ、PGC-1表達(dá)度越低，PPARγ、PGC-1活性的逐步降低可能參與胃癌及進(jìn)展，隨著腫瘤惡化程度的加重，患者的PPARγ、PGC-1表達(dá)出現(xiàn)明顯下調(diào)。但是PPARγ、PGC-1陽(yáng)性表達(dá)與患者的性別、年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否無(wú)明顯相關(guān)性（P>0.05），提示胃腺癌的PPARγ、PGC-1陽(yáng)性表達(dá)狀況與其病理分型密切相關(guān)。

PPARγ為潛在的腫瘤抑制因子，PGC-1為PPARγ的輔助活化因子，PGC-1改變能夠影響PPARγ活動(dòng)，進(jìn)而在腫瘤疾病發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮作用[17-18]。本研究結(jié)果顯示，PGC-1、PPARγ表達(dá)具有正相關(guān)關(guān)系，兩者的相關(guān)性也支持兩者在胃癌發(fā)生、發(fā)展中相互影響，共同發(fā)生作用。由于多重因素的影響和限制，本研究未能獲得胃癌患者較準(zhǔn)確的隨訪數(shù)據(jù)，以至于對(duì)胃癌的預(yù)后評(píng)估未能完成，從而未能得出PGC-1、PPARγ的表達(dá)與胃癌預(yù)后的相關(guān)性。

綜上所述，本組研究證實(shí)胃癌癌前病變組織中PPARγ、PGC-1陽(yáng)性表達(dá)上調(diào)，而胃癌組織中PPARγ、PGC-1陽(yáng)性表達(dá)下調(diào)，且兩者之間的變化具有同步性，提示PPARγ、PGC-1表達(dá)與胃癌發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切。PPARγ、PGC-1陽(yáng)性表達(dá)與胃癌的Borrmann分型、Lauren分型、WHO分型中管狀腺癌的組織分化程度有關(guān)，其表達(dá)水平會(huì)隨著患者病情的惡化而降低，檢測(cè)PPARγ、PGC-1表達(dá)水平，有助于預(yù)測(cè)胃癌的進(jìn)展情況。

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（收稿日期：2018-09-19 本文編輯：祁海文）