劉浩鋒 丁少波 吳雪婷

[摘要]目的 探討非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）患者耐藥基因檢測對(duì)臨床治療效果的影響。方法 選取2016年3月～2017年3月在我院接受治療的120例NSCLC患者，采用免疫組化S-P法檢測多藥耐藥基因（MDR1）、人類表皮生長因子受體-2基因（c-erbB-2）、谷胱苷肽-S-轉(zhuǎn)移酶（GST-π）的表達(dá)，使用順鉑、長春新堿、長春堿酰胺對(duì)患者進(jìn)行治療，檢測三種耐藥基因陽性表達(dá)患者的腫瘤抑制率。結(jié)果 三種耐藥基因MDR1、c-erbB-2及GST-π的陽性表達(dá)率均低于陰性表達(dá)率（P<0.05）。NSCLC患者的MDR1、c-erbB-2及GST-π基因陽性表達(dá)率與性別、年齡無關(guān)，與病理分期、病理分型、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤程度以及分化程度有關(guān)（P<0.05）。耐藥基因MDR1、c-erbB-2陽性表達(dá)的腫瘤抑制率均低于GST-π基因陽性表達(dá)的腫瘤抑制率（P<0.05）。結(jié)論 對(duì)NSCLC患者進(jìn)行耐藥基因檢測，可以對(duì)患者的耐藥性進(jìn)行診斷，有效提高患者的治療效果及預(yù)后。

[關(guān)鍵詞]非小細(xì)胞肺癌；耐藥基因；多藥耐藥基因；人類表皮生長因子受體-2基因；谷胱苷肽-S-轉(zhuǎn)移酶

[中圖分類號(hào)] R734.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2019）4（b）-0021-05

[Abstract] Objective To explore the influence of drug resistance gene detection in patients with non-small cell lung cancer （NSCLC） on clinical therapeutic efficacy. Methods A total of 120 NSCLC patients who received treatment in our hospital from March 2016 to March 2017 were selected. Multidrug resistance gene （MDR1）， human epidermal growth factor receptor-2 gene （c-erbb-2）， glutathione S transferase （GST-π） were detected by immunohistochemical S-P method. The patients were treated with Cisplatin， Vincristine and Vinblastine Amide， and the tumor inhibition rates of patients with positive expression of three drug resistance genes were detected. Results The positive expression rates of MDR1， c-erbB-2 and GST-π were lower than those of negative expression （P<0.05）. The positive expression rates of MDR1， c-erbB-2 and GST-π genes in NSCLC patients were not related to sex and age， but which were related to pathological stage， pathological type， lymph node metastasis， infiltration degree and differentiation degree （P<0.05）. The tumor inhibition rates of MDR1 and c-erbB-2 positive expression were lower than those of GST-π positive expression （P<0.05）. Conclusion Detection of drug resistance genes in NSCLC patients can diagnose drug resistance of patients and effectively improve the treatment effect and prognosis of patients.

[Key words] Non-small cell lung cancer； Drug resistance gene； Multidrug resistance gene； Human epidermal growth factor receptor-2 gene； Glutathione-S-transferase

目前，肺癌是世界上最常見的一種肺原發(fā)性惡性腫瘤，在世界癌癥的死因排行中躍居前列。隨著現(xiàn)代社會(huì)的發(fā)展，肺癌的患病率和死亡率均有持續(xù)上升的趨勢，嚴(yán)重威脅著人類生命健康[1]。非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）占所有肺癌患者的80%左右，且大部分的患者在確診時(shí)已經(jīng)為晚期，常常會(huì)使用順鉑聯(lián)合吉西他濱/紫杉醇的化療手段對(duì)NSCLC患者進(jìn)行治療[2]。但是對(duì)于NSCLC患者而言，化療的治療效果有限，其腫瘤細(xì)胞會(huì)對(duì)化學(xué)藥物具有一定的耐藥性，可能和患者的多藥耐藥基因（MDR1）、人類表皮生長因子受體-2基因（c-erbB-2）、谷胱苷肽-S-轉(zhuǎn)移酶（GST-π）有關(guān)，從而導(dǎo)致患者化療的效果不太理想，也可能會(huì)因?yàn)榛颊吣退幓驅(qū)熕幬锂a(chǎn)生一定的多藥耐藥性，使化療藥物失去作用，導(dǎo)致患者的治療效果不佳，影響患者的健康[3-4]。本研究旨在探討NSCLC的耐藥基因檢測與患者進(jìn)行化療治療效果的影響。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2016年3月～2017年3月在我院接受治療的120例NSCLC患者，其中男54例，女66例；年齡40～75歲，平均（58.3±5.8）歲；腺癌患者58例，鱗癌患者62例；Ⅰ期患者35例，Ⅱ期患者45例，Ⅲ期患者40例。納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患者均符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)對(duì)NSCLC癥狀的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]。排除標(biāo)準(zhǔn)：①有放化療史的患者；②心功能不全的患者；③存在溝通障礙的患者；④并發(fā)其他惡性腫瘤的患者；⑤近期服用過相關(guān)治療藥物的患者；⑥在其他醫(yī)療機(jī)構(gòu)接受過治療的患者；⑦妊娠期、哺乳期婦女；⑧精神疾病患者。本研究所有患者及其家屬均知情，且簽署知情通知書，并經(jīng)過我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2方法

1.2.1檢測方法 采用免疫組化S-P法檢測耐藥基因MDR1、c-erbB-2及GST-π的表達(dá)，取所有患者手術(shù)切除肺癌組織標(biāo)本，使用4%中性甲醛溶液對(duì)其進(jìn)行固定，并進(jìn)行常規(guī)石蠟包埋，之后進(jìn)行連續(xù)切片作免疫組化標(biāo)記以及革蘭染色待用。將標(biāo)本進(jìn)行連續(xù)的4 μm的切片，對(duì)其進(jìn)行常規(guī)脫水處理，修復(fù)內(nèi)源性過氧化物酶活性和抗原后，加入正常的封閉血清，之后加入一抗（鼠抗人GST-π單克隆抗體購于上海康郎生物科技有限公司，貨號(hào)kl090Po21；兔抗人MDR1單克隆抗體購于上?？茀R生物技術(shù)有限公司，貨號(hào)KH-RP-15；兔抗人c-erbB-2單克隆抗體工作液購于上海雅吉生物有限公司，貨號(hào)YSm-33085m）、二抗（生物素標(biāo)記山羊抗鼠抗兔IgG購于北京華夏遠(yuǎn)洋科技有限公司，貨號(hào)A0277）、三抗（辣根酶標(biāo)記鏈酶卵白素工作液購于上海茁彩生物科技有限公司，貨號(hào)ZC-Q5032），DAB顯色，使用蘇木素進(jìn)行復(fù)染，觀察其結(jié)果。陰性對(duì)照使用TBS代替一抗，陽性對(duì)照切片作陽性對(duì)照。陰陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)：MDR1基因在胞膜或胞質(zhì)處呈黃色為陽性；GST-π基因在細(xì)胞漿處呈棕黃色、顆粒狀為陽性；c-erbB-2基因在細(xì)胞漿和細(xì)胞膜處呈黃色為陽性；無陽性細(xì)胞為陰性。

1.2.2治療方法 所有患者在治療前均適當(dāng)進(jìn)行止吐、水化、利尿等處理。采用順鉑（齊魯制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字 H37021358）、長春新堿[費(fèi)森尤斯卡比（武漢）醫(yī)藥有限公司，國藥準(zhǔn)字 H20045032]、長春堿酰胺（山東宏益騰藥業(yè)有限公司長春制藥分公司，國藥準(zhǔn)字 H20050614）對(duì)患者進(jìn)行治療。順鉑方案：順鉑30 mg/m2加入500 ml生理鹽水靜脈滴注，d2～d4，吉西他濱1000 mg/m2，d1與d8。長春新堿方案：25 mg/m2加入50 ml生理鹽水靜脈滴注，d1～d5。長春堿酰胺方案：3 mg/m2加入2000 ml生理鹽水靜脈緩慢滴注，1次/周。所有患均21 d為1個(gè)周期，治療2個(gè)周期以上觀察治療效果。

1.3腫瘤抑制評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

患者疲乏、呼吸困難、咳嗽等臨床癥狀均消失，患者腫瘤直徑總和縮小的范圍>50%，為判斷腫瘤抑制的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算腫瘤抑制率。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。計(jì)數(shù)資料以百分率（%）描述，組間兩兩比較采用Bonferroni校正后的檢驗(yàn)水準(zhǔn)進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，病理分期、病理分型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、浸潤程度以及分化程度比較均采用秩和檢驗(yàn)，三組間樣本率的比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1三種耐藥基因MDR1、c-erbB-2及GST-π表達(dá)情況的比較

三種耐藥基因MDR1、c-erbB-2及GST-π的陽性表達(dá)率均低于陰性表達(dá)率，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）（表1）。

2.2 MDR1、c-erbB-2及GST-π基因陽性表達(dá)與NSCLC患者臨床病理資料的關(guān)系

NSCLC患者M(jìn)DR1基因陽性表達(dá)率與性別、年齡無關(guān)，與病理分期、病理分型、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤程度以及分化程度有關(guān)，且處于Ⅲ期、腺癌、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、侵及漿膜以及分化程度較高患者的MDR1基因陽性表達(dá)率高于處于Ⅰ與Ⅱ期、鱗癌、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、未及漿膜以及分化程度較低的患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）（表2）。

NSCLC患者c-erbB-2基因陽性表達(dá)率與性別、年齡無關(guān)，與病理分期、病理分型、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤程度以及分化程度有關(guān)，且處于Ⅰ期、鱗癌、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、侵及漿膜以及分化程度較高患者的c-erbB-2基因陽性表達(dá)率低于處于Ⅱ與Ⅲ期、腺癌、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、未及漿膜以及分化程度較低的患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）（表3）。

NSCLC患者GST-π基因陽性表達(dá)率與性別、年齡無關(guān)，與病理分期、病理分型、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤程度以及分化程度有關(guān)，且處于Ⅲ期、鱗癌、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、侵及漿膜以及分化程度較高患者的GST-π基因陽性表達(dá)率高于處于Ⅰ與Ⅱ期、腺癌、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、未及漿膜以及分化程度較低的患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）（表4）。

2.3三種耐藥基因陽性表達(dá)腫瘤抑制率的比較

耐藥基因MDR1、c-erbB-2陽性表達(dá)的腫瘤抑制率均低于GST-π基因陽性表達(dá)的腫瘤抑制率，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）（表5）。

3討論

NSCLC在肺癌中的發(fā)病率較高，一般表現(xiàn)為胸部脹痛、痰血、咳嗽、低熱等，晚期一般表現(xiàn)為疲乏、食欲缺乏、體重減輕，甚至?xí)霈F(xiàn)呼吸困難等局部癥狀。目前的研究顯示[6]，吸煙、職業(yè)、環(huán)境接觸、電離輻射、既往肺部慢性感染、遺傳以及大氣污染等均可導(dǎo)致NSCLC的發(fā)生。由于缺乏有效的早期診斷手段，大部分的NSCLC患者在確診時(shí)已經(jīng)處于晚期，失去了早期的手術(shù)機(jī)會(huì)，臨床上一般會(huì)以化療為主，但是患者的長期存活率較低，其效果不佳有可能與患者的耐藥基因有關(guān)。有研究顯示[7-8]，影響NSCLC患者化療治療效果的主要原因是患者的腫瘤細(xì)胞對(duì)抗癌藥物產(chǎn)生了一定的耐藥性，使其治療效果降低。本研究選取在我院進(jìn)行治療的120例NSCLC患者，檢測其基因型的陽性表達(dá)情況，應(yīng)用一線化療藥物治療，旨在探討耐藥基因MDR1、c-erbB-2及GST-π對(duì)化療藥物的耐藥性。

臨床上NSCLC的耐藥涉及較多的機(jī)制，對(duì)耐藥表型的理解主要表現(xiàn)為與耐藥基因MDR1及其所編碼的蛋白的作用，致使藥物在細(xì)胞中泵出，散布在細(xì)胞外，通過細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)間的藥物轉(zhuǎn)運(yùn)障礙，致使靶藥物的濃度下降，最終導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生耐藥性[9-10]。本研究對(duì)耐藥基因MDR1進(jìn)行檢測探討，結(jié)果顯示，耐藥基因?qū)熕幬锏哪退幮暂^高，腫瘤抑制率較低，可能是因?yàn)镸DR1的產(chǎn)物P-gP會(huì)介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生多藥耐藥性，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生過度增殖現(xiàn)象，最終導(dǎo)致NSCLC患者的化療失敗或者引起腫瘤進(jìn)一步的復(fù)發(fā)，影響患者的身體健康[11]。有研究顯示[12]，NSCLC患者外周血淋巴細(xì)胞耐藥基因MDR1的陽性表達(dá)可能會(huì)與患者的化療方案用藥有關(guān)，其使用NP方案進(jìn)行化療的患者的治療效果顯著低于其表達(dá)為陰性的患者，提示其可能與患者的耐藥性相關(guān)，這與本研究中對(duì)MDR1檢測耐藥性的結(jié)果一致。

另一方面，NSCLC患者的耐藥可能與GST-π的作用有關(guān)，因細(xì)胞解毒功能的增強(qiáng)而導(dǎo)致。GST-π主要參與細(xì)胞的解毒、抵抗外來致癌物質(zhì)的入侵，會(huì)在腫瘤組織中呈現(xiàn)過表達(dá)的狀態(tài)，增強(qiáng)對(duì)抗腫瘤藥物的解毒作用，最終導(dǎo)致NSCLC患者產(chǎn)生多藥耐藥性，影響患者的治療效果[13-14]。本研究對(duì)NSCLC患者耐藥基因GST-π的耐藥性進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示，耐藥基因GST-π對(duì)順鉑、長春新堿以及長春堿酰胺化療藥物的耐藥性均較高，對(duì)腫瘤的抑制率均較低（P<0.05）。臨床中的眾多研究顯示[15-17]，GST-π在NSCLC患者的陽性表達(dá)率較高，可能會(huì)對(duì)NSCLC患者的耐藥性產(chǎn)生介導(dǎo)作用，會(huì)通過外排順鉑類化療藥物抑制其產(chǎn)物依賴對(duì)腫瘤細(xì)胞的凋亡，其結(jié)果顯示GST-π對(duì)NSCLC患者進(jìn)行不同藥物的化療耐受性進(jìn)行檢測，GST-π是會(huì)介導(dǎo)NSCLC患者固有的耐藥性的重要耐藥因素之一，與本研究結(jié)果一致。

另外，NSCLC患者的臨床耐藥也可能會(huì)因?yàn)樗幬镛D(zhuǎn)運(yùn)的改變，使患者對(duì)于藥物的外排作用增加，從而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞內(nèi)的藥物濃度降低，因此會(huì)使患者的化療效果降低，化療藥物的作用難以發(fā)揮，這可能與患者腫瘤的耐藥性有關(guān)[18-19]。目前，耐藥基因c-erbB-2在化療敏感性的研究是臨床上比較熱點(diǎn)的問題，其產(chǎn)物呈現(xiàn)陽性的NSCLC患者比較容易出現(xiàn)術(shù)后轉(zhuǎn)移，可以對(duì)順鉑類的化療藥物產(chǎn)生耐藥作用，目前臨床上少有對(duì)耐藥基因c-erbB-2的檢測來判斷其耐藥性。本研究對(duì)患者的耐藥基因c-erbB-2進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示，c-erbB-2會(huì)對(duì)化療藥物產(chǎn)生一定的耐藥性，腫瘤抑制率較低，可以為臨床上對(duì)化療耐藥研究提供一定的基礎(chǔ)。本研究通過檢測患者的耐藥基因在不同化療方案下的腫瘤抑制情況，可以得出致使患者化療效果不佳的原因是耐藥基因MDR1、c-erbB-2及GST-π呈現(xiàn)出較高的陽性表達(dá)；可能與耐藥基因MDR1、c-erbB-2及GST-π的藥物轉(zhuǎn)運(yùn)改變有關(guān)，其使腫瘤細(xì)胞內(nèi)的藥物濃度降低，導(dǎo)致患者的化療效果不佳，影響化療藥物發(fā)揮作用[20]。

本研究使用不同化療方案對(duì)NSCLC患者進(jìn)行治療，結(jié)果顯示，不同的耐藥基因?qū)Σ煌幕熕幬锞哂休^高的耐藥性，腫瘤抑制率較低，與耐藥基因及其產(chǎn)物對(duì)化療藥物的耐藥性較高，導(dǎo)致化療效果下降。但本研究還存在缺陷，僅研究NSCLC患者三種耐藥基因?qū)熕幬锏哪退幮?，并未更深入研究其他耐藥基因?qū)熕幬锏哪退幮裕虼嗽诮窈蟮难芯繉?shí)驗(yàn)中，希望對(duì)其他耐藥基因?qū)熕幬锏哪退幮赃M(jìn)行更加深入的研究，為NSCLC患者的治療及預(yù)后提供依據(jù)。

綜上所述，對(duì)NSCLC患者進(jìn)行耐藥基因檢測，可以對(duì)患者的耐藥性進(jìn)行診斷，有效提高患者的治療效果及預(yù)后。

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（收稿日期：2018-12-06 本文編輯：祁海文）