王 霞 ，劉建國 ，馬友記 ，王 毅 ，陳 亮

（1.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，蘭州 730070；2.蘭州市畜牧獸醫(yī)研究所，蘭州 730050）

中草藥作為我國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的重要組成部分，具有較高的藥用價(jià)值，又因其含有多種營養(yǎng)成分，如維生素、氨基酸、礦物質(zhì)、多糖、有機(jī)酸、微量元素等，同時(shí)具有豐富的營養(yǎng)價(jià)值。在畜禽日糧中添加中草藥可以促進(jìn)動(dòng)物生長、提高免疫力、改善畜產(chǎn)品品質(zhì)等。在家禽上的研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加復(fù)方中草藥不但可提高其生長性能和免疫器官指數(shù)，改善雞肉品質(zhì)和蛋品質(zhì)，而且可顯著改善腸道結(jié)構(gòu)并增強(qiáng)其吸收能力［1-2］。王冉［3］的研究表明，日糧中添加復(fù)方中草藥可以提高犢牛的采食量、增強(qiáng)機(jī)體免疫力、提高抗氧化能力。另有研究表明，日糧中添加復(fù)方中草藥能在一定程度上改變羊肉的理化性質(zhì)、提高肉品品質(zhì)，還可以改善羊肉風(fēng)味和瘤胃發(fā)酵功能［4-6］。瘤胃是反芻動(dòng)物營養(yǎng)吸收和消化代謝的重要場所，瘤胃發(fā)育對反芻動(dòng)物的生長有著重要意義［7］。但有關(guān)日糧中添加復(fù)方中草藥對其瘤胃組織形態(tài)學(xué)發(fā)育影響的研究報(bào)道仍十分匱乏?；诖?，本研究擬通過在湖羊日糧中添加不同比例的復(fù)方中草藥，在測定胴體重、眼肌面積、剪切力、脾臟重量等指標(biāo)的基礎(chǔ)上觀察瘤胃的組織形態(tài)學(xué)變化，研究其對湖羊屠宰性能、肉品質(zhì)、免疫水平及瘤胃發(fā)育的影響，為復(fù)方中草藥添加劑在肉羊生產(chǎn)中的應(yīng)用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 復(fù)方中草藥制劑制備

本復(fù)方主要由炙黃芪、黨參、白術(shù)、當(dāng)歸、陳皮、炙甘草、升麻、柴胡組成。上述中草藥原料購自蘭州市醫(yī)藥公司某門店，用粉碎機(jī)進(jìn)行普通粉碎后過40目篩，依次按照 3∶2∶2∶2∶2∶1.5∶1∶1 比例混合均勻，裝袋密封備用。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與動(dòng)物飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)以湖羊?yàn)檠芯繉ο?，由蘭州通大成農(nóng)林科技有限公司皋蘭養(yǎng)殖基地提供。選擇體況良好、健康無病、體重相近的30日齡公羔24只，隨機(jī)分為3組（n=8）：對照組、試驗(yàn)Ⅰ組和試驗(yàn)Ⅱ組。對照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組在基礎(chǔ)日糧中分別添加4%和5%的復(fù)方中草藥添加劑。試驗(yàn)期60 d，對每個(gè)試驗(yàn)組的羔羊進(jìn)行編號，每個(gè)試驗(yàn)組單獨(dú)飼喂，自由飲水，自由采食粉碎的干草，圈內(nèi)設(shè)置舔磚，保持圈舍清潔衛(wèi)生，定期免疫和驅(qū)蟲。試驗(yàn)羊的基礎(chǔ)日糧與營養(yǎng)水平如表1所示。

1.3 樣品的采集與測定

1.3.1 樣品的采集 在試驗(yàn)期結(jié)束后，每個(gè)試驗(yàn)組隨機(jī)挑取3只湖羊，屠宰前24 h禁食，前2 h禁水。頸靜脈放血致死后打開腹腔，采集脾臟組織稱其重量；采集瘤胃腹囊組織3塊，用PBS緩沖液沖洗干凈后迅速投入4%的多聚甲醛溶液中固定，用于石蠟切片的制備。

表1 試驗(yàn)羊的基礎(chǔ)日糧及營養(yǎng)水平（DM基礎(chǔ)）%

1.3.2 屠宰性能和肉品質(zhì)測定指標(biāo)及方法 所有試驗(yàn)羊屠宰前稱重，記為宰前活重。屠宰后去皮毛、頭、前肢腕關(guān)節(jié)、后肢飛節(jié)以下部位和內(nèi)臟（保留腎和腎脂）進(jìn)行稱量，記為胴體重。根據(jù)宰前活重和胴體重計(jì)算屠宰率（屠宰率%=100×胴體重/宰前活重）；用游標(biāo)卡尺測量第12肋骨和第13肋骨之間距背脊中線11 cm處的組織厚度記為GR值；用游標(biāo)卡尺測量眼肌的高度和寬度后，利用公式（眼肌面積=眼肌高度×眼肌寬度×0.7）計(jì)算眼肌面積。參考侯鵬霞［8］的方法測定羊肉失水率、熟肉率和剪切力。肉色、大理石紋用肉色比色板和大理石花紋比色板進(jìn)行對比評分。

1.3.3 瘤胃組織形態(tài)學(xué)試驗(yàn)方法 將固定好的每個(gè)樣品經(jīng)不同濃度梯度乙醇逐級脫水，二甲苯透明，浸蠟，石蠟包埋后，制作成厚度為5 μm的石蠟切片。切片經(jīng)二甲苯脫蠟，依次經(jīng)遞減濃度梯度乙醇逐級脫水（100%、95%、90%、80%和70%乙醇各5 min）后用蘇木精染色8 min，自來水沖洗2 min，1%HCl-酒精分化30 s、流水沖洗30 min，再用0.5%伊紅染色2 min，蒸餾水洗30 s，最后依次經(jīng)遞增梯度酒精脫水、二甲苯透明后用中性樹膠封片。每張切片在4倍光學(xué)顯微鏡下觀察其形態(tài)結(jié)構(gòu)，并選擇組織完整的8個(gè)典型視野用Imagevie軟件測量瘤胃乳頭高度、乳頭寬度、肌層厚度、角質(zhì)層厚度，并采集圖像。

1.4 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)Excel統(tǒng)計(jì)處理后，用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行單因素方差分析及Turkey法多重比較，結(jié)果用x±SD表示。P＜0.05表示組間差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 中草藥添加劑對湖羊屠宰性能的影響

由表2可知，試驗(yàn)Ⅰ組和試驗(yàn)Ⅱ與對照組相比，羔羊的宰前活重、胴體重、屠宰率、GR值和眼肌面積等指標(biāo)均無顯著性差異（P>0.05），但試驗(yàn)Ⅰ組和試驗(yàn)Ⅱ的眼肌面積均高于對照組，而GR值則低于對照組。

表2中草藥添加劑對羔羊屠宰性能的影響

2.2 中草藥添加劑對湖羊肉品質(zhì)的影響

由表3可知，試驗(yàn)Ⅰ組羊肉剪切力顯著高于對照組（P<0.05）和試驗(yàn)Ⅱ組（P<0.05）。試驗(yàn)Ⅰ組和試驗(yàn)Ⅱ組與對照組相比，失水率、熟肉率、肉色、大理石紋等均無顯著性差異（P>0.05），但試驗(yàn)Ⅰ組和試驗(yàn)Ⅱ組失水率均低于對照組，熟肉率則高于對照組。

2.3 中草藥添加劑對羔羊免疫器官發(fā)育的影響

由表4可知，試驗(yàn)Ⅰ組與試驗(yàn)Ⅱ組的脾臟重量與對照組相比，添加不同劑量的中草藥對羔羊免疫器官的重量無顯著影響（P>0.05），但試驗(yàn)Ⅰ組與試驗(yàn)Ⅱ組脾臟重量均高于對照組。

表3中草藥添加劑對羔羊肉品質(zhì)的影響

表4中草藥添加劑對羔羊免疫器官脾臟重量的影響

2.4 復(fù)方中草藥添加劑對湖羊瘤胃組織形態(tài)學(xué)的影響

在顯微鏡下觀察到的瘤胃組織HE染色的切片如圖1所示，試驗(yàn)Ⅰ組瘤胃乳頭形態(tài)較完整，分布較密集，對照組和試驗(yàn)Ⅱ組乳頭分布較稀疏。由表5可知，瘤胃乳頭高度和肌層厚度試驗(yàn)Ⅰ組均顯著高于對照組（P<0.05）和試驗(yàn)Ⅱ組（P<0.05）。瘤胃乳頭寬度和角化層厚度各組之間差異均不顯著（P>0.05），但試驗(yàn)Ⅰ組和試驗(yàn)Ⅱ組均大于對照組。

圖1瘤胃組織形態(tài)結(jié)構(gòu)

表5中草藥添加劑對羔羊瘤胃發(fā)育的影響 μm

3 討論

屠宰性能與動(dòng)物的產(chǎn)肉力、胴體品質(zhì)等密切相關(guān)。眼肌面積與屠宰率直接反映動(dòng)物的產(chǎn)肉性能，GR值是胴體脂肪評分的依據(jù)，GR值越低，說明瘦肉率越高。熟肉率反映了肉品烹調(diào)加工過程中水分損失的程度，熟肉率越高保水性越好。失水率和剪切力越小，說明肉的多汁性越高，肉的嫩度越好［8］。Zhang 等［9］的研究結(jié)果表明，飼料中添加中草藥制劑能夠明顯改善豬肉品質(zhì)。羅燕等［10］發(fā)現(xiàn)中草藥添加劑能顯著改善中國美利奴羊新疆軍墾型的肉品質(zhì)。本試驗(yàn)通過對屠宰性能、肉品質(zhì)測定發(fā)現(xiàn)，隨著復(fù)方中草藥添加比例的增加，湖羊眼肌面積增加，而胴體GR值下降，復(fù)方中草藥添加組熟肉率、失水率、肉色、大理石紋等肉品質(zhì)指標(biāo)與對照組相比均無明顯差異（P>0.05），但添加中草藥后，試驗(yàn)組失水率低于對照組，而熟肉率高于對照組，4%中草藥添加組可以顯著降低剪切力（P<0.05）。上述結(jié)果說明日糧中添加復(fù)方中草藥有助于提高湖羊產(chǎn)肉性能，增加瘦肉率，提高羊肉嫩度，且4%添加量的效果更明顯。

脾臟是機(jī)體最大的免疫器官，是免疫細(xì)胞聚集和免疫應(yīng)答的場所；脾臟變化在一定程度上反映了動(dòng)物的免疫水平，其重量與免疫功能呈正相關(guān)［1，11］。趙紅梅等［12］在21日齡斷奶仔豬的基礎(chǔ)日糧中添加超微中草藥添加劑后發(fā)現(xiàn)，其可以提高脾臟、胸腺免疫器官指數(shù)。夏玉芬等［13］在基礎(chǔ)日糧中分別添加1%、2%和4%的復(fù)方中草藥制劑，研究不同劑量復(fù)方中草藥對舍飼藏羊生長性能和免疫功能的影響，結(jié)果表明，基礎(chǔ)日糧中添加2%和4%的復(fù)方中草藥制劑可顯著改善舍飼藏羊的生長性能、免疫功能，且4%添加劑量的改善效果更顯著。本試驗(yàn)對脾臟稱重后發(fā)現(xiàn)，復(fù)方中草藥添加組的脾臟重量高于對照組，表明日糧中添加復(fù)方中草藥能增加脾臟重量，進(jìn)而改善機(jī)體的免疫功能，與上述報(bào)道一致。

瘤胃的發(fā)育是有效利用飼料的關(guān)鍵，其乳頭高度是衡量瘤胃壁吸收營養(yǎng)物質(zhì)的重要指標(biāo)，其次是瘤胃乳頭寬度、肌層厚度、角化層厚度［14］。人們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，牧草能促進(jìn)瘤胃肌肉的發(fā)育，并保持其上皮細(xì)胞的完整性［15］。已有的許多研究報(bào)道了中草藥可以改變反芻動(dòng)物瘤胃的發(fā)酵模式。祜群等［16］的研究結(jié)果表明，中草藥添加劑有利于維持瘤胃內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，提高瘤胃微生物菌群數(shù)量和蛋白質(zhì)的利用率。高秀華等［17］研究中草藥添加劑對梅花鹿瘤胃消化代謝的影響時(shí)發(fā)現(xiàn)，中草藥添加劑可以顯著提高瘤胃pH值（P<0.05）、TVAF濃度（P<0.05）和乙酸/丙酸比值（P<0.05）。喬國華等［18］研究發(fā)現(xiàn)，女貞子可以提高小尾寒羊瘤胃液總揮發(fā)性脂肪酸濃度和丙酸的濃度。本試驗(yàn)通過測定湖羊瘤胃乳頭高度、寬度和肌層厚度等指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)日糧中添加4%和5%的復(fù)方中草藥均可增加瘤胃乳頭寬度和角化層厚度，添加4%的復(fù)方中草藥制劑可顯著提高其瘤胃乳頭高度（P<0.05）和肌層厚度（P<0.05）。這說明日糧中添加復(fù)方中草藥可促進(jìn)瘤胃腹囊的發(fā)育，且4%的添加量促進(jìn)作用更顯著。這可能是因?yàn)槿占Z中添加中草藥會(huì)影響瘤胃發(fā)酵終產(chǎn)物，產(chǎn)生較高濃度的揮發(fā)性脂肪酸，提供瘤胃上皮發(fā)育所需要的能源，因而促進(jìn)了瘤胃腹囊組織形態(tài)學(xué)的發(fā)育［19］。但其影響機(jī)理需要進(jìn)一步深入研究。

4 小結(jié)

在本試驗(yàn)條件下，在基礎(chǔ)日糧中添加4%和5%的復(fù)方中草藥均具有改善湖羊屠宰性能、肉品質(zhì)，提高脾臟重量和促進(jìn)瘤胃發(fā)育的作用，但4%的添加劑量為最適劑量。