周佳彬，陳俊，劉臣，靳峰

0 引言

惡性原發(fā)性腦腫瘤是現(xiàn)今最難治的腫瘤類型之一，其5年生存率不到35%[1]，而腦膠質(zhì)瘤是原發(fā)性腦腫瘤最常見(jiàn)的腫瘤類型，約占40%以上，具有高侵襲性、高復(fù)發(fā)性、高死亡率和預(yù)后差的特點(diǎn)[2]，惡性膠質(zhì)瘤的中位生存期僅15~23月，5年生存率不足6%[3]。盡管目前顯微神經(jīng)外科手術(shù)技術(shù)已經(jīng)得到廣泛普及，手術(shù)聯(lián)合放化療的綜合治療方式以及基因治療、免疫治療等多種治療手段得到廣泛應(yīng)用，但臨床上膠質(zhì)瘤的預(yù)后仍較差。

綠原酸（Chlorogenic acid, CGA），又稱咖啡鞣酸，其分子式為C16H18O9，是一種廣泛存在于金銀花、杜仲等天然植物中的多酚類物質(zhì)，具有抗炎、抗氧化、抗腫瘤、保肝、調(diào)節(jié)免疫等多種生物學(xué)活性[4]。隨著萃取、提純技術(shù)的發(fā)展和研究的深入，綠原酸的抗腫瘤作用越來(lái)越受到重視。多項(xiàng)研究表明，綠原酸對(duì)肺癌[5]、肝癌[6]、鼻咽癌[7]以及結(jié)腸癌[8]等多種腫瘤都具有良好的防治效果。然而，目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于綠原酸誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡及其相關(guān)機(jī)制的研究鮮有報(bào)道。本研究以膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U251為研究對(duì)象，探討綠原酸誘導(dǎo)U251細(xì)胞凋亡的作用及其分子機(jī)制，為膠質(zhì)瘤治療的新藥開(kāi)發(fā)提供理論依據(jù)和新思路。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 細(xì)胞 人源膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251、人源肝細(xì)胞系LO2、小鼠源小膠質(zhì)細(xì)胞BV2均購(gòu)自中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心。

1.1.2 試劑 綠原酸（Aladdin，上海，CAS號(hào)：327-97-9，純度＞98%），DMSO（Sigma，美國(guó)），DMEM/F12培養(yǎng)基、PBS緩沖液（Hyclone，美國(guó)），胎牛血清（四季青，杭州）；胰蛋白酶（吉諾，杭州）；青、鏈霉素（Solarbio，北京）；RNAiso plus、SYBR Premix Ex Taq Ⅱ、ROX Reference Dye（TaKaRa，日本）；CCK-8試劑盒（同仁，日本）；Annexin V-FITC/PI細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒（BD，美國(guó)）；Hoechst 33342染色液（碧云天，上海）；p53、Bax、Bcl-2、Caspase-3抗體、HRP標(biāo)記山羊抗兔IgG（ABclonal，武漢），Livin、GAPDH抗體（CST，美國(guó)）；ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒（碧云天，上海）；PCR引物合成（擎科，武漢）。

1.1.3 儀器 CO2恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱（Thermo Scientific，美國(guó)）；Step one熒光定量PCR儀（ABI，美國(guó)）；倒置相差顯微鏡（Oplympus，日本）；流式細(xì)胞儀（BD，美國(guó)）。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng) 人膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251細(xì)胞用含10%胎牛血清、100 u/ml青霉素和100 μg/ml鏈霉素的DMEM/F12培養(yǎng)基， 于37℃、5%CO2恒溫培養(yǎng)中培養(yǎng)。細(xì)胞生長(zhǎng)達(dá)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期（70%~80%）后，用0.25%胰酶消化貼壁細(xì)胞，按照1:2~1:3的比例傳代培養(yǎng)。

1.2.2 CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞毒性和細(xì)胞增殖 將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的U251細(xì)胞消化后，用無(wú)血清培養(yǎng)基重懸計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞密度以5 000個(gè)/孔的密度接種于96孔板中，37℃過(guò)夜培養(yǎng)。次日吸棄培養(yǎng)基后，加入含有不同濃度綠原酸（20、40、80、160 μg/ml）的培養(yǎng)基0.1 ml，每組設(shè)置5個(gè)復(fù)孔，對(duì)照組加入0.1% DMSO培養(yǎng)基0.1 ml，另設(shè)空白組（不含細(xì)胞只加培養(yǎng)基）。分別培養(yǎng)24、48和72 h后，每孔加入10 ml CCK-8試劑，于37℃培養(yǎng)箱避光孵育2 h，酶標(biāo)儀上檢測(cè)45 nm波長(zhǎng)處吸光度值（A值），計(jì)算細(xì)胞存活率。另外，不同濃度綠原酸干預(yù)LO2和BV2細(xì)胞48 h后，CCK-8檢測(cè)細(xì)胞毒性，具體方法同上。細(xì)胞存活率（%）=（A藥物組-A空白組）/（A對(duì)照組-A空白組）×100%。改良寇氏法（公式為lgIC50=Xm-I [P-（3-Pm-Pn）/4]，Xm為lg最大劑量，P為陽(yáng)性反應(yīng)率之和，Pm為最大陽(yáng)性反應(yīng)率，Pn為最小陽(yáng)性反應(yīng)率）計(jì)算不同時(shí)間綠原酸作用的IC50。重復(fù)3次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)，方法同上。

1.2.3 倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化 選擇處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的U251細(xì)胞消化后，以（3~5）×105個(gè)/孔接種至6孔板，每孔加入2 ml培養(yǎng)基培養(yǎng)，細(xì)胞貼壁后，0、20、40、80、160 μg/ml綠原酸分別干預(yù)細(xì)胞48 h后，倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。

1.2.4 Annexin V-FITC/PI染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡 收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的U251細(xì)胞，以5×105個(gè)/孔的密度接種于6孔板，37℃、5%CO2培養(yǎng)箱過(guò)夜。次日吸棄培養(yǎng)基，加入含有不同濃度綠原酸（20、40、80、160 μg/ml）的培養(yǎng)基2 ml，對(duì)照組加入含0.1%DMSO的培養(yǎng)基，處理48 h后，收集細(xì)胞和培養(yǎng)上清液，按照Annexin V-FITC/PI凋亡檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書操作，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡，重復(fù)3次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)。

1.2.5 Hoechst 33342染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡 收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的U251細(xì)胞，以2×105個(gè)/孔的密度接種于6孔板，細(xì)胞貼壁后吸棄培養(yǎng)基，加入含有不同濃度綠原酸（20、40、80、160 μg/ml）的培養(yǎng)基2 ml，對(duì)照組加入含0.1%DMSO的培養(yǎng)基，處理48 h后棄上清液，PBS洗3次后加入Hoechst 33342染色液，染色15 min后棄上清液，PBS洗3次，熒光顯微鏡觀察細(xì)胞凋亡情況。

1.2.6 RT-PCR檢測(cè)p53、Livin、Bax和Bcl-2 mRNA表達(dá)水平 收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期U251細(xì)胞，以1×106個(gè)/孔接種于6孔板過(guò)夜培養(yǎng)，次日加入含有不同濃度綠原酸（0、20、40、80、160 μg/ml）的培養(yǎng)基2 ml，處理48 h后，每孔加入0.5 ml RNAiso plus提取總RNA，分光光度儀檢測(cè)RNA的濃度與質(zhì)量，OD260/OD280在1.8~2.0左右的RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄成cDNA，-20℃保存?zhèn)溆?。采用RT-PCR試劑盒按照說(shuō)明書操作，檢測(cè)基因mRNA的表達(dá)水平。RT-PCR引物序列，見(jiàn)表1。RT-PCR 10 μl反應(yīng)體系包括：4 μl體系（0.2 μl上游引物、0.2 μl下游引物、0.2 μl Rox、3.4 ml DEPC水）加6 μl體系（0.1 μl cDNA模板、0.2 μl Mix、0.7 μl DEPC水、5 μl TB Green）。兩步法PCR擴(kuò)增條件：保溫階段：95℃ 30 s；循環(huán)階段：95℃ 5 s，60℃ 30 s，共40個(gè)循環(huán)。

1.2.7 Western blot檢測(cè)p53、Livin、Bax、Bcl-2和Caspase-3的表達(dá) 不同濃度綠原酸（0、20、40、80、160 μg/ml）干預(yù)U251細(xì)胞48 h后，加RIPA提取細(xì)胞總蛋白，BCA試劑盒檢測(cè)蛋白樣本濃度。取50 μg總蛋白裂解上清液，進(jìn)行SDS-PAGE凝膠電泳、切膠、轉(zhuǎn)膜、封閉后，加入一抗，4℃過(guò)夜孵育，TBST洗膜3次，每次10 min，加入二抗孵育1 h，TBST洗膜3次，每次10 min，條帶浸于超敏ECL化學(xué)發(fā)光反應(yīng)液（A液:B液=1:1）中3 min，室溫下置于化學(xué)發(fā)光成像儀上曝光，以GAPDH作為內(nèi)參。1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

表1 RT-PCR引物列表Table1 List of Real-time PCR primer

采用SPSS25.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，所得數(shù)據(jù)以（x±s）表示，組間兩兩比較采用t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 倒置相差顯微鏡下觀察U251細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化

對(duì)照組U251細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，胞體飽滿，大小均一，細(xì)胞間接觸緊密，有突出向周圍伸展。80 μg/ml CGA濃度組U251細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)差，部分細(xì)胞變圓，大小不一，細(xì)胞間接觸明顯變少，胞體皺縮明顯，突觸萎縮，且懸浮細(xì)胞碎片較多，見(jiàn)圖1。

2.2 綠原酸對(duì)LO2和BV2細(xì)胞的細(xì)胞毒性

圖1 80μg/ml綠原酸干預(yù)U251細(xì)胞48h后光學(xué)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化Figure1 Morphology changes of U251 cells intervened with 80 μg/ml chlorogenic acid (CGA) for 48h observed under light microscope

不同濃度綠原酸（0、20、40、80、160 μg/ml）干預(yù)LO2和BV2細(xì)胞48 h后，細(xì)胞存活率無(wú)明顯變化（均P>0.05），見(jiàn)圖2。

2.3 綠原酸對(duì)U251細(xì)胞增殖的抑制作用

不同濃度綠原酸（0、20、40、80、160 μg/ml）干預(yù)U251細(xì)胞24、48和72 h后，U251細(xì)胞存活率隨藥物作用濃度的升高及作用時(shí)間的延長(zhǎng)而明顯降低（24 h: t20=2.3457, P<0.05, t40=6.7037, P<0.01,t80=15.0227, P<0.01, t160=22.9172, P<0.01; 48 h:t20=7.1296, P<0.01, t40=16.7032, P<0.01, t80=28.7043,P<0.01, t160=26.7849, P<0.01; 72 h: t20=14.3316,P<0.01，t40=26.8094, P<0.01, t80=32.5768, P<0.01，t160=48.2500, P<0.01），且綠原酸對(duì)膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞增殖的抑制作用表現(xiàn)為濃度依賴性和時(shí)間依賴性，見(jiàn)表2。改良寇氏法測(cè)得24、48和72 h的IC50分別為41.67、32.97和26.94 μg/ml。

2.4 不同濃度綠原酸促進(jìn)U251細(xì)胞凋亡

隨著綠原酸作用濃度的升高，與對(duì)照組（Control）相比，U251細(xì)胞的早期凋亡比例、晚期凋亡比例和總凋亡率逐漸增加（Q2: t40=16.1942, P<0.01,t80=15.8495, P<0.01, t160=36.1062, P<0.01；Q3：t40=1.2948, P>0.05, t80=61.6755, P<0.01, t160=40.5892,P<0.01; Q4: t40=87.8441, P<0.01, t80=52.4510, P<0.01,t160=64.4245, P<0.01；Q2+Q3: t40=8.6292, P<0.01,t80=31.9058, P<0.01, t160=60.8099, P<0.01），見(jiàn)表3、圖3。Hoechst 33342染色表明：隨綠原酸濃度的增加，U251細(xì)胞凋亡明顯增多。Control組細(xì)胞核呈規(guī)則的圓形，淡藍(lán)色著色均勻；藥物組細(xì)胞核固縮、碎裂，形狀不一，染色質(zhì)著色明亮，有典型的凋亡小體，見(jiàn)圖4。

2.5 綠原酸在mRNA水平上調(diào)p53和Bax的表達(dá)，下調(diào)Livin和Bcl-2的表達(dá)

不同濃度（40、80、160 μg/ml）CGA干預(yù)U251細(xì)胞48 h后，RT-PCR結(jié)果表明，與Control組相比，隨著CGA濃度的增加，Livin和Bcl-2表達(dá)下調(diào)，p53和Bax表達(dá)上調(diào)，（Livin: t40=2.7998,P>0.05, t80=5.6715, P<0.01, t160=7.8133, P<0.01; p53:t40=0.1232, P>0.05, t80=3.5666, P<0.05, t160=17.7536,P<0.01; Bax: t40=2.8826, P<0.05, t80=6.7625, P<0.01,t160=13.7818, P<0.01; Bcl-2: t40=3.4279, P<0.05,t80=24.3339, P<0.01, t160=12.8588, P<0.01），見(jiàn)圖5。2.6 綠原酸在蛋白水平上調(diào)p53、Bax和Caspase-3的表達(dá)，下調(diào)Livin和Bcl-2的表達(dá)

圖2 不同濃度CGA干預(yù)LO2、BV2細(xì)胞48h的細(xì)胞毒性Figure2 Cytotoxicity of LO2 and BV2 cells intervened with different concentration of CGA for 48h

表2 不同濃度CGA作用不同時(shí)間對(duì)U251細(xì)胞增殖的影響 (n=5)Table2 Effects of different concentration of CGA on proliferation of U251 cells (n=5)

表3 不同濃度CGA干預(yù)U251細(xì)胞48h后的凋亡率Table3 Apoptosis of U251 cells treated with different concentration of CGA for 48h

圖3 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CGA干預(yù)U251細(xì)胞48h后的細(xì)胞凋亡Figure3 Apoptosis of U251 cells intervened with CGA for 48h detected by flow cytometry

40、80、160 μg/ml CGA干預(yù)U251細(xì)胞48 h后，與Control組相比，隨著CGA濃度的增加，Livin和Bcl-2表達(dá)下調(diào)（Livin: t40=6.4160, P<0.01，t80=11.3185, P<0.01，t160=23.0744, P<0.01；Bcl-2:t40=5.9407, P<0.01，t80=7.7944, P<0.01，t160=12.2478,P<0.01）；p53和Bax表達(dá)明顯上調(diào)（p53: t40=8.2217,P<0.01, t80=11.2683, P<0.01, t160=17.7536, P<0.01; Bax:t40=3.3779, P<0.05, t80=9.0943, P<0.01, t160=24.5234,P<0.01），并且表達(dá)水平呈濃度依賴性。80、160 μg/ml CGA干預(yù)后Caspase-3的表達(dá)明顯增加（Caspase-3: t40=1.3042, P>0.05, t80=4.7828, P<0.01,t160=8.5720, P<0.01），見(jiàn)圖 6。

3 討論

圖5 CGA干預(yù)U251細(xì)胞48h后相關(guān)基因mRNA表達(dá)水平的改變Figure5 Related genes mRNA expression in U251 cells treated with CGA for 48h

圖6 CGA干預(yù)U251細(xì)胞48h后相關(guān)基因蛋白表達(dá)水平的改變Figure6 Related genes protein expression in U251 cells treated with CGA for 48h

近年來(lái)，中草藥因在抗炎、抗氧化、抗腫瘤等方面具有較好的療效成為醫(yī)學(xué)研究的熱點(diǎn)之一。傳統(tǒng)中草藥在腫瘤治療上具有一定的優(yōu)勢(shì)，但由于技術(shù)限制等原因，傳統(tǒng)中草藥有效成分尚不明確，導(dǎo)致其抗腫瘤的治療應(yīng)用受限。

隨著萃取技術(shù)的發(fā)展，目前已經(jīng)證實(shí)很多中草藥有效提取成分有顯著的抗膠質(zhì)瘤作用。劉海鵬等[9]發(fā)現(xiàn)，靈芝酸A能夠誘導(dǎo)U251細(xì)胞凋亡，抑制其增殖和侵襲能力，并能抑制KDR mRNA和蛋白的表達(dá)。黃鎏等[10]發(fā)現(xiàn)，牛蒡子苷元能夠抑制人膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞的增殖并促進(jìn)細(xì)胞凋亡，其作用機(jī)制與調(diào)控Bcl-2、Bax的表達(dá)水平有關(guān)。郭培中等[11]研究表明，白藜蘆醇誘導(dǎo)U251細(xì)胞增殖抑制和凋亡與抑制Wnt/β-catenin/p53信號(hào)通路激活相關(guān)。周廣洲等[12]研究發(fā)現(xiàn)，柯里拉京能夠有效促進(jìn)U251細(xì)胞凋亡，抑制U251細(xì)胞遷移，其具體機(jī)制尚不明確。

綠原酸是一種天然提取物，對(duì)多種惡性腫瘤都具有抗腫瘤作用。本研究發(fā)現(xiàn)綠原酸對(duì)U251細(xì)胞的增殖有顯著抑制作用，而且表現(xiàn)為濃度和時(shí)間依賴性，這種抑制作用很可能是通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡來(lái)實(shí)現(xiàn)的。

細(xì)胞凋亡是一種由基因調(diào)控、細(xì)胞內(nèi)自主激活死亡程序的死亡方式。細(xì)胞凋亡的途徑主要有死亡受體介導(dǎo)的凋亡途徑[13]（外源性凋亡途徑）、線粒體凋亡途徑[14]（內(nèi)源性凋亡途徑）和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的凋亡[15]，參與細(xì)胞凋亡的蛋白家族主要有4種：胱天蛋白酶Caspases家族、銜接蛋白家族、Bcl-2家族和凋亡抑制蛋白IAPs家族。各種途徑的細(xì)胞凋亡最終多是以活化Caspases蛋白從而引發(fā)后續(xù)相關(guān)蛋白降解的級(jí)聯(lián)反應(yīng)發(fā)生的，在這個(gè)過(guò)程中，Caspase-3的活化起核心作用[16]，是細(xì)胞凋亡發(fā)生的關(guān)鍵蛋白。Bcl-2蛋白家族成員通常分為兩類：抗凋亡蛋白分子（Bcl-2、Bcl-xL、Mcl-1等）和促凋亡蛋白分子（Bax、Bad、Bak、Bid等），其中Bcl-2作為重要的調(diào)控細(xì)胞凋亡的負(fù)向分子，能夠與促凋亡蛋白結(jié)合導(dǎo)致凋亡失調(diào)，促使細(xì)胞逃避凋亡[17]。重要的促凋亡蛋白Bax的激活與線粒體凋亡密切相關(guān)，活化的Bax導(dǎo)致線粒體通透性轉(zhuǎn)運(yùn)孔開(kāi)放，線粒體通透性增加引起細(xì)胞色素C（Cyt C）釋放，最終引起細(xì)胞凋亡。本研究證實(shí)了綠原酸是通過(guò)上調(diào)Bax表達(dá)、下調(diào)Bcl-2表達(dá)，最終激活Caspase-3蛋白促進(jìn)膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞凋亡。

作為重要的抑癌基因，p53在調(diào)控細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期、介導(dǎo)DNA損傷修復(fù)及調(diào)節(jié)細(xì)胞自噬等多種生物學(xué)過(guò)程中有著廣泛的作用[18-19]。細(xì)胞處于應(yīng)激狀態(tài)時(shí)，p53能夠直接或間接激活內(nèi)源性細(xì)胞凋亡途徑中Bax的表達(dá)、抑制Bcl-2的表達(dá)，反式激活內(nèi)質(zhì)網(wǎng)凋亡途徑中Scotin、CDIP的表達(dá)，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[20]。p53也能促進(jìn)死亡受體超家族成員Fas-L、TRAIL等與相應(yīng)配體結(jié)合形成死亡誘導(dǎo)信號(hào)復(fù)合體（deathinducing signaling complex, DISC），激活外源性細(xì)胞凋亡途徑[21]，進(jìn)而激活Caspase-8促進(jìn)細(xì)胞凋亡。此外，p53還能夠直接激活Caspase-6誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。根據(jù)本研究結(jié)果，我們推斷綠原酸處理后的U251細(xì)胞凋亡與p53的表達(dá)明顯上調(diào)有關(guān)（P<0.05）。

Livin（ML-IAP、KIAP、BIRC7）是2000年發(fā)現(xiàn)的IAPs成員之一，它的抗凋亡作用是通過(guò)直接抑制Caspases實(shí)現(xiàn)的，目前研究發(fā)現(xiàn)，Livin的BIR結(jié)構(gòu)區(qū)對(duì)Caspase-3具有強(qiáng)大的抑制作用，并且還能夠直接抑制Caspase-7，9活性而抑制細(xì)胞凋亡[22]。本研究結(jié)果提示，綠原酸誘導(dǎo)的U251細(xì)胞凋亡可能與Livin的表達(dá)下調(diào)有關(guān)（P<0.05）。

綠原酸在抗膠質(zhì)瘤治療中具有良好的應(yīng)用前景，不僅可以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，還能通過(guò)其他方面發(fā)揮抗腫瘤作用：（1）調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境免疫功能：綠原酸能夠通過(guò)活化STAT1增加M1型巨噬細(xì)胞的比例，抑制STAT6減少M(fèi)2型巨噬細(xì)胞的比例，抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)[23]；（2）抑制腫瘤新生血管生成：綠原酸能夠抑制血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)，進(jìn)而下調(diào)AKT和HIF-1的表達(dá)，抑制血管生成；（3）調(diào)節(jié)細(xì)胞代謝：綠原酸能夠通過(guò)抑制葡萄糖-6-磷酸脫氫酶的活性干擾細(xì)胞糖酵解途徑[24]，進(jìn)而抑制腫瘤生長(zhǎng)。此外，由于綠原酸具有較好的保肝作用[25]，與抗腫瘤化療藥聯(lián)合應(yīng)用，不僅能夠減少化療藥物的肝毒性，還可能發(fā)揮協(xié)同抗腫瘤作用。

綜上所述，綠原酸誘導(dǎo)U251細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制可能是通過(guò)上調(diào)p53和Bax的表達(dá)、下調(diào)Livin和Bcl-2表達(dá)，增強(qiáng)Caspase-3蛋白活性，從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。本實(shí)驗(yàn)為綠原酸誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究提供了初步的理論指導(dǎo)，為綠原酸的開(kāi)發(fā)和臨床應(yīng)用提供了重要的依據(jù)，發(fā)現(xiàn)綠原酸抗膠質(zhì)瘤作用的靶點(diǎn)和探索綠原酸在體內(nèi)抗膠質(zhì)瘤活性也將是下一步的研究重點(diǎn)。