周健 張旭升 黃戰(zhàn)軍

【摘要】目的：觀察麝香保心丸對(duì)代謝綜合征（MS）大鼠主動(dòng)脈重構(gòu)的影響。方法：用高果糖飲食飼養(yǎng)SD大鼠建立代謝綜合征大鼠模型，成功后大鼠隨機(jī)分為模型對(duì)照組和麝香保心丸干預(yù)組，用Masson染色血管膠原沉積情況，用放射免疫法檢測(cè)大鼠血清單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MonocyteChemoattractantprotein-1，MCP-1）含量，用免疫組化法檢測(cè)主動(dòng)脈MCP-1受體表達(dá)。結(jié)果：高果糖飲食可成功誘導(dǎo)高血壓、高甘油三酯血癥和高血糖等特征的代謝綜合征模型，Masson染色可見(jiàn)MS組大鼠主動(dòng)脈有明顯膠原沉積，與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組血清MCP-1含量明顯增加，主動(dòng)脈MCP-1受體表達(dá)亦同步上調(diào)。用麝香保心丸干預(yù)后，MCP-1表達(dá)下調(diào)，同時(shí)，血管膠原沉積有所減輕。結(jié)論：麝香保心丸可改善代謝綜合征大鼠血管重構(gòu)，可能與下調(diào)MCP-1表達(dá)有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】麝香保心丸;代謝綜合征;血管重構(gòu);MCP-1

【中圖分類(lèi)號(hào)】R285.5【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A【文章編號(hào)】1007-8517（2019）1-0012-03

Abstract：Objectives[JP2]ToinvestigatetheeffectofShexiangBaoxinPill（SXBXP）onVascularremodelinginmetabolicsyndrome（MS）modelrats.MethodsMSmodelofratswereinducedbyhighfructosedietforeightweeks，thentheywererandomlydividedintoMSgroupandMSplusSXBXPgroup.TheMonocyteChemoattractantprotein-1（MCP-1）contentsweredetectedbyradioimmunoassay，andtheexpressionsofcorrespondingreceptorsweredeterminedbyimmunohistochemistry.TheexpressionofcollagenwasdeterminedbyMassonstaining.ResultsTheMSmodelofratswereinducedbyhighfructosedietsuccessfully.MassonstainingshowedthattherewerecollagendepositedinaorticwallofMSrats.MCP-1contentsinserumonMSgroupwereincreasedsignificantlythanthoseinthecontrolgroup（P<0.01）.Meanwhile，theexpressionsofcorrespondingreceptorwereup-regulatedobviously.Inaddition，SXBXPdietcouldreducethedegreeofMCP-1content，inthesametime，thecollagendepositionofvascularwasrelieved.ConclusionOursresultsindicatedthatSXBXPsignificantlyimprovethevascularremodelingonMSmodelratspartlythroughreducingMCP-1content.[JP]Keywords：ShexiangBaoxinPill（SXBXP）;MetabolicSyndrome;VascularRemodeling;MCP-1

代謝綜合征[1]（MetabolicSyndrome，MS）包括高血壓、高脂血癥和血糖代謝異常等心血管危險(xiǎn)因素，可導(dǎo)致血管內(nèi)皮功能障礙和動(dòng)脈粥樣硬化等心血管疾病的發(fā)生發(fā)展，并導(dǎo)致血管重構(gòu)，是目前冠心病、腦梗塞等常見(jiàn)心腦血管疾病發(fā)病率升高的主要因素之一。因此，防治MS導(dǎo)致的血管重構(gòu)除了控制相應(yīng)的危險(xiǎn)因素，還需要具有血管保護(hù)或抗動(dòng)脈粥樣硬化的藥物。麝香保心丸具有舒張血管、抑制炎癥反應(yīng)、抗動(dòng)脈粥樣硬化及抑制血管鈣化等作用[2-3]，在臨床上治療心絞痛、心肌梗死等發(fā)揮了很大的作用，能否改善MS導(dǎo)致的血管重構(gòu)尚不清楚。為此，本實(shí)驗(yàn)在MS大鼠模型上，用麝香保心丸干預(yù)，觀察血管重構(gòu)的變化，并觀察血清MCP-1及主動(dòng)脈相應(yīng)受體表達(dá)的變化，初步探討相關(guān)可能的機(jī)制。

1材料

1.1動(dòng)物無(wú)特定病原體級(jí)（SPF）雄性SD大鼠由汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，8周齡。

1.2材料高果糖飼料（60%，北京華阜康生物科技有限公司）;MCP-1試劑盒（北京華英生物研究所）;MCP-1受體一抗、二抗及DAB顯色試劑盒（武漢博士德）;其余為進(jìn)口或國(guó)產(chǎn)分析純?cè)噭?。麝香保心丸（批?hào)：12050401，上海和黃藥業(yè)有限公司）。[JP]1.3儀器BP-2010A鼠尾動(dòng)脈測(cè)壓儀（北京軟隆生物）;BeckmanCoulterAU5800生化儀;血糖試紙及快速血糖儀購(gòu)自美國(guó)雅培。

2方法

2.1MS動(dòng)物模型制備參照參考文獻(xiàn)[4]制備大鼠MS模型，取雄性SD大鼠8只作為正常對(duì)照組，普通飼料喂養(yǎng);取16只雄性SD大鼠作為MS組，高果糖飼料喂養(yǎng)8周后，檢測(cè)血糖、血脂和尾動(dòng)脈壓水平，以確定MS模型建立成功（高血糖、高血脂及高血壓狀態(tài)）。將造模成功的MS大鼠隨機(jī)分成MS組（8）和MS+麝香保心丸組（8），繼續(xù)高果糖飼料喂養(yǎng)，MS+麝香保心丸組予麝香保心丸25mg/kg灌胃1次。飼養(yǎng)4周后稱(chēng)重后，3%水合氯醛麻醉，心臟取血，血液置入含有促凝劑的5mL塑料試管中，充分混勻，4度離心分離血清，-80℃保存。摘取胸主動(dòng)脈，用冰生理鹽水沖洗后，4%多聚甲醛固定，石蠟包埋。

2.2血糖、甘油三酯和血壓的測(cè)定禁食8h后尾動(dòng)脈取血，采用快速血糖儀檢測(cè)血糖，并分離血清，采用BeckmanCoulterAU5800生化儀檢測(cè)血清甘油三酯水平;采用鼠尾動(dòng)脈測(cè)壓儀測(cè)量血壓。

2.3血清MCP-1含量的測(cè)定將血清送至北京華英生物研究所，采用放射免疫法測(cè)定血清MCP-1含量，具體步驟按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。

2.4免疫組織化學(xué)法檢測(cè)主動(dòng)脈組織MCP-1受體的表達(dá)采用4%多聚甲醛固定胸主動(dòng)脈，石蠟包埋，制作4μm厚切片，常規(guī)脫臘入水，抗原修復(fù)，封閉非特異性抗原，滴加一抗過(guò)夜，滴加二抗，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，鹽酸酒精分化、脫水、透明、中性樹(shù)膠封片，具體步驟按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

2.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析法，兩兩比較采用q檢驗(yàn)。以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3結(jié)果

3.1大鼠MS模型特征經(jīng)高果糖飼料喂養(yǎng)8周后，大鼠血清血糖、甘油三酯和尾動(dòng)脈壓水平明顯高于正常對(duì)照組（P<0.01），提示MS模型建立成功。見(jiàn)表1。

3.2Masson染色采用Masson染色觀察大鼠主動(dòng)脈組織，與正常組比較，MS大鼠發(fā)現(xiàn)血管全層均有明顯膠原沉積，血管細(xì)胞和彈力纖維排列紊亂，管壁增厚，用麝香保心丸干預(yù)后膠原沉積有所改善。見(jiàn)圖1。

3.3大鼠血清MCP-1含量的變化MS組血清MCP-1含量明顯增加（P<0.01），采用麝香保心丸干預(yù)后，血清MCP-1含量有所下降（P<0.01）。詳見(jiàn)表2。

3.4大鼠胸主動(dòng)脈組織MCP-1受體表達(dá)的變化與正常組相比，MS組主動(dòng)脈組織MCP-1受體表達(dá)明顯上調(diào)，用麝香保心丸干預(yù)后，主動(dòng)脈組織MCP-1受體表達(dá)有所下調(diào)。見(jiàn)圖2。

4討論

隨著近年來(lái)國(guó)民生活條件改善和生活方式的改變，肥胖人群越來(lái)越多，導(dǎo)致MS的患病率明顯增加，包括高血壓及糖脂代謝異常等多種心血管危險(xiǎn)因素，這些危險(xiǎn)因素均可導(dǎo)致血管損傷，最終導(dǎo)致血管重構(gòu)的發(fā)生。實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)MS大鼠模型可出現(xiàn)血管重構(gòu)，表現(xiàn)在血管內(nèi)膜及中膜不均一增厚，結(jié)構(gòu)紊亂，平滑肌細(xì)胞增殖明顯，涉及的可能分子機(jī)制包括炎癥因子、一些血管活性因子及脂肪細(xì)胞因子等生物效應(yīng)相關(guān)[4-5]。因此，探索參與血管重構(gòu)的機(jī)制，為其防治提供新的策略，具有重要的間接臨床意義。

本實(shí)驗(yàn)采用高果糖飼料喂養(yǎng)后，血清血糖、甘油三酯水平及尾動(dòng)脈壓明顯高于對(duì)照組，提示大鼠MS模型建立成功。同時(shí)發(fā)現(xiàn)MS大鼠主動(dòng)脈大量膠原沉積，血管細(xì)胞排列紊亂，提示主動(dòng)脈重構(gòu)，與國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究一致。同時(shí)血清MCP-1水平明顯高于正常組，同時(shí)主動(dòng)脈組織MCP-1受體的表達(dá)亦同步下調(diào)，而MCP-1是體內(nèi)重要的促炎癥因子，可誘導(dǎo)炎癥細(xì)胞聚集，產(chǎn)生并加重局部組織的炎癥反應(yīng)，而炎癥貫穿于血管重構(gòu)始終，是導(dǎo)致血管功能及解剖結(jié)構(gòu)異常重要分子機(jī)制之一，加劇動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展，也促進(jìn)血管重構(gòu)的發(fā)生與發(fā)展。

麝香保心丸在臨床上作為一種常用治療冠心病的有效藥物，對(duì)緩解心絞痛、改善心肌缺血等有顯著的作用。本實(shí)驗(yàn)用麝香保心丸干預(yù)后，MS大鼠主動(dòng)脈膠原沉積有所減輕，血清MCP-1水平明顯下降，主動(dòng)脈組織MCP-1受體表達(dá)同步下調(diào)，這提示麝香保心丸有明顯的抑制炎癥反應(yīng)的作用，并可改善血管重構(gòu)，可能是改善血管重構(gòu)的重要分子機(jī)制之一。

實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)麝香保心丸可改善MS大鼠誘導(dǎo)的血管重構(gòu)并抑制MCP-1及其受體的表達(dá)，這將為血管重構(gòu)的機(jī)制研究及防治提供新的思路和作用靶點(diǎn)，具體的分子作用機(jī)制和細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路尚需進(jìn)一步研究證實(shí)。由于植物提取物成分和有效成分作用靶點(diǎn)的復(fù)雜性，中藥成分對(duì)保護(hù)血管內(nèi)皮功能的藥理學(xué)作用尚需進(jìn)一步研究。

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