馬 莉，范立葉

(濰坊市婦幼保健院產(chǎn)科，山東 濰坊 261011)

妊娠期高血壓疾病(hypertensive disorder complicating pregnancy，HDCP)是妊娠期特有的疾病，其基本病理特征是全身小動脈痙攣，導(dǎo)致全身各系統(tǒng)器官的血液灌流減少，可嚴(yán)重危害母兒健康，甚至導(dǎo)致母兒死亡。該病病因和發(fā)病機制復(fù)雜，近年來血管內(nèi)皮細胞損傷和胰島素抵抗成為妊娠期高血壓疾病研究的熱點。脂聯(lián)素(adiponectin，APN)和chemerin被證實為新的脂肪細胞因子，在脂肪組織中高表達，與脂代謝、血管內(nèi)皮功能、胰島素抵抗、炎癥反應(yīng)等有關(guān)，影響血糖和脂質(zhì)穩(wěn)態(tài)及血壓的調(diào)節(jié)。本研究主要是通過檢測妊娠期高血壓疾病患者血清中的脂聯(lián)素和chemerin的表達情況，以研究其在妊娠期高血壓疾病發(fā)病過程中的作用及意義。

1研究對象與方法

1.1研究對象

選取2016年12月至2018年1月在濰坊市婦幼保健院系統(tǒng)產(chǎn)前檢查的孕婦共110例作為研究對象，其中正常妊娠30例作為對照組，妊娠期高血壓疾病患者80例作為疾病組(其中妊娠期高血壓組22例，輕度子癇前期組30例，重度子癇前期組28例)。對照組孕婦年齡為(27.63±1.81)歲、孕周為(37.25±0.49)周、身體質(zhì)量指數(shù)為(26.78±1.53)kg/m2。疾病組孕婦年齡為(28.29±1.56)歲、孕周為(36.56±0.64)周、身體質(zhì)量指數(shù)為(28.75±1.69)kg/m2，兩組一般臨床特征比較均無統(tǒng)計學(xué)差異(均P>0.05)。

1.2病例納入標(biāo)準(zhǔn)

妊娠期高血壓疾病的診斷和分類標(biāo)準(zhǔn)參考謝幸主編的第8版《婦產(chǎn)科學(xué)》，所選孕婦平素月經(jīng)規(guī)則，孕期均經(jīng)彩超核對孕周無誤，所有研究對象均無其它合并癥，無煙酒不良嗜好。所有孕婦在測量血壓前未使用任何降壓藥物治療。產(chǎn)后12周返院隨訪。

1.3血清采集及檢測

孕婦于檢查前一晚上開始禁食10～12h，次日清晨空腹抽2管肘靜脈血，每管4mL，一管送至檢驗科用全自動生化分析儀檢測血脂水平，另外一管靜置1h后，3 000r/min，離心15min，在超凈工作臺中用微量加樣器吸取血清后加入到已滅菌的EP管中。應(yīng)用雙抗體夾心法檢測血清chemerin的水平，實驗試劑人chemerin試劑盒購于北京市聯(lián)動生物試劑有限公司。應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)法檢測血清脂聯(lián)素水平，試劑盒由上海酶聯(lián)生物科技有限公司生產(chǎn)。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法

本研究數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進行分析，數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差來描述，采用t檢驗兩組數(shù)據(jù)之間的比較。用單因素方差分析做多組數(shù)據(jù)之間的比較。使用Pearson分析做關(guān)聯(lián)性分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1兩組血清chemerin、脂聯(lián)素、血脂濃度對比

疾病組血清chemerin濃度明顯高于對照組(t=-13.92，P<0.05)，隨病情加重逐漸升高，重度子癇前期組變化最明顯，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=-6.39，P<0.01)。妊娠期高血壓組患者血清中脂聯(lián)素的水平與對照組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；輕度子癇前期組、重度子癇前期組患者的血清脂聯(lián)素濃度均明顯低于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(t值分別為8.17、4.62，均P<0.01)。疾病組總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL)均高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(t值分別為-3.06、-1.98、-2.75，均P<0.05)；疾病組高密度脂蛋白(HDL)低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=2.03，P<0.05)，見表1。

表1各組孕婦血清chemerin、脂聯(lián)素、血脂水平的比較

注：*與對照組比較，P<0.05；#疾病組與對照組比較。

2.2兩組血清chemerin、脂聯(lián)素濃度與血脂的相關(guān)性

子癇前期組患者的血清chemerin、脂聯(lián)素濃度與TC、TG、HDL、LDL的水平均顯著相關(guān)(chemerin：r分別為0.616、0.558、-0.473、0.392；脂聯(lián)素：r分別為-0.635、-0.472、0.430、-0.429；均P<0.05),見表2。妊娠期高血壓組的血清chemerin、脂聯(lián)素濃度與血脂水平無明顯相關(guān)(P>0.05)。

表2子癇前期患者血清脂聯(lián)素、chemerin和血脂的相關(guān)性(r)

Table2CorrelationbetweenserumAPN,chemerinandbloodlipidinpatientswithpreeclampsia(r)

項目TC(mmol/L)TG(mmol/L)HDL(mmol/L)LDL(mmol/L)脂聯(lián)素-0.635-0.4720.430-0.429chemerin0.6160.558-0.4730.392

注：均P<0.05。

3討論

3.1 Chemerin與妊娠期高血壓疾病

3.1.1血清chemerin蛋白的生理作用

Chemerin也稱為他扎羅汀誘導(dǎo)基因，最早是1997年Nagpal等應(yīng)用他扎羅汀藥物治療銀屑病時克隆出的，他扎羅汀藥物可以使其表達上調(diào)。人chemerin基因位于染色體7q36.1，長度為3 289bp，包含4個外顯子及3個內(nèi)含子。通過定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)或者Northern雜交技術(shù)，人體肝臟、白色脂肪組織、胎盤及腎臟中均有chemerin mRNA的較高表達，肺臟、垂體、卵巢、皮膚、腎上腺、腸道、胰腺中也有表達。2007年Bozaoglu等證實chemerin是一種新的脂肪細胞因子，在脂肪組織中高表達，對脂肪細胞的分化和代謝有調(diào)節(jié)作用，并且與肥胖和代謝綜合征有關(guān)，影響血糖和脂質(zhì)穩(wěn)態(tài)及血壓的調(diào)節(jié)。

3.1.2血清chemerin蛋白在妊娠期高血壓疾病中的變化及作用

脂肪細胞能影響母體代謝、胰島素抵抗(IR)及炎癥反應(yīng)，引起糖尿病、多發(fā)性硬化癥及高血壓。妊娠期高血壓疾病患者存在IR、糖耐量異常、脂代謝異常、低度炎癥反應(yīng)、肥胖等病理狀態(tài)，分娩后發(fā)生遠期心血管及代謝性疾病的風(fēng)險明顯升高。由此推測脂肪細胞因子可能與妊娠期高血壓疾病的發(fā)病過程有關(guān)。Bozaoglu等人于2007年研究表明chemerin在糖脂代謝中發(fā)揮重要作用。敲除成熟脂肪細胞的chemerin基因能減少其它調(diào)節(jié)糖脂代謝穩(wěn)態(tài)相關(guān)基因的表達，如葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白-4(glucose transporter-4)、APN、瘦素(leptin)等，導(dǎo)致基礎(chǔ)脂肪分解率及磷酸二酯酶抑制劑刺激的脂肪分解率的降低。Fasshauer等人于2008年研究發(fā)現(xiàn)脂肪細胞因子如leptin、APN、抵抗素(resistin)、內(nèi)脂素(visfatin)、apelin、載脂蛋白-2(lipocalin-2)，炎癥介質(zhì)如白介素6(IL-6)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)等能表達于子宮內(nèi)，對妊娠期血脂代謝及炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)發(fā)揮一定的作用，參與了妊娠期高血壓疾病的發(fā)病過程。Ernst等人于2010年研究發(fā)現(xiàn)，在肥胖/糖尿病小鼠脂肪組織、肝臟及骨骼肌細胞中，血清chemerin表達水平升高，外源性給予chemerin加重了葡萄糖耐受不良，降低了血清胰島素水平，并且減弱了組織對葡萄糖的攝取。血清chemerin水平升高對糖脂代謝的調(diào)節(jié)可能參與了妊娠期高血壓疾病的病理生理過程，但是本研究的樣本量太小，還需更大樣本量進一步研究。2009年Lehrke等人的研究表明，血清chemerin水平與IL-6、C反應(yīng)蛋白(CRP)、TNF-α等炎癥介質(zhì)呈正相關(guān)，IL-6、TNF-α能使脂肪組織表達和分泌chemerin增加。在3T3-L1細胞和小鼠白色脂肪細胞中，炎癥介質(zhì)TNF-α和IL-1能通過NF-β途徑，使chemerin的合成和分泌增加。炎性介質(zhì)(如TNF-α、IL-6、氧自由基等)能促進氧化應(yīng)激，持續(xù)生成過氧化物，引起血管內(nèi)皮損傷，導(dǎo)致血管內(nèi)皮功能障礙，縮血管物質(zhì)血栓素A2(TXA2)的產(chǎn)生增加，舒血管物質(zhì)前列環(huán)素產(chǎn)生減少，出現(xiàn)痙攣性血管收縮，導(dǎo)致血壓升高。由以上結(jié)果可以推測chemerin可能通過促進炎癥反應(yīng)，參與了妊娠期高血壓疾病的發(fā)生、發(fā)展。

Cetin等人[1]通過研究發(fā)現(xiàn)血清chemerin在重度子癇前期患者顯著高于輕度子癇前期患者和健康孕婦，血清chemerin水平與患者的收縮壓/舒張壓、CRP、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、蛋白尿、住院時間成正相關(guān)；與分娩孕周、新生兒出生體重及出生Apgar評分呈負相關(guān)，母體血清>252.0ng/mL預(yù)測子癇前期的敏感度為95.5%，特異度為95.7%，并得出結(jié)論血清chemerin水平與子癇前期的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，與不良新生兒結(jié)局有顯著的相關(guān)性。Turgut等人[2]發(fā)現(xiàn)肥胖的子癇前期患者血清chemerin和游離脂肪酸(FFA)水平高于非肥胖子癇前期患者和正常妊娠者。與子癇前期組相比，正常組的氧化狀態(tài)(TOS)和氧化應(yīng)激指數(shù)(OSI)水平顯著降低，而肥胖和非肥胖先兆子癇患者則沒有發(fā)現(xiàn)差異。Xu等人[3]招募518名孕婦，橫斷面研究表明，子癇前期患者的母體血清chemerin濃度顯著升高，然而，關(guān)于chemerin和子癇前期之間因果關(guān)系的數(shù)據(jù)有限，線性回歸分析發(fā)現(xiàn)血清chemerin水平與血漿C反應(yīng)蛋白水平呈正相關(guān)，Logistic回歸分析表明，身體質(zhì)量指數(shù)和血清chemerin水平似乎是先兆子癇的獨立預(yù)測因子。

本實驗結(jié)果顯示，疾病組患者血清chemerin的濃度顯著高于血壓正常的孕婦，重度子癇前期患者血清chemerin濃度明顯高于輕度子癇前期患者，這與Cetin[1]、Xu等[3]的研究結(jié)果是一致的。但PE患者血清chemerin水平升高的具體機制及其對PE發(fā)病的具體作用還需要進一步研究闡明。

3.2脂聯(lián)素與妊娠期高血壓疾病

脂聯(lián)素是由脂肪細胞分泌的一種特異性的激素蛋白，1995年紐約愛因斯坦醫(yī)學(xué)院的Scherer等首先將其從鼠的脂肪細胞中分離出來。1999年Arita等命名為脂聯(lián)素，并建立測定人血清中脂聯(lián)素濃度的方法。脂聯(lián)素能增加機體對脂質(zhì)的攝取及氧化，使肌肉組織和肝臟中甘油三酯和游離脂肪酸的水平降低，從而改善脂代謝。脂聯(lián)素還可增加外周組織對胰島素的敏感性，降低胰島素抵抗。脂聯(lián)素有保護心血管內(nèi)皮的功能，具有抑制動脈粥樣硬化形成和抑制炎癥反應(yīng)等作用。綜上所述，脂聯(lián)素是與肥胖呈負相關(guān)的細胞因子。代謝綜合征是一種合并有高血壓與脂質(zhì)及血糖代謝異常的綜合征，它是由基因3q27決定的，而脂聯(lián)素的編碼基因也恰巧位于該區(qū)域。妊娠期高血壓疾病在某種程度上與代謝綜合征存在相似的臨床表現(xiàn)，推測脂聯(lián)素可能與妊娠期高血壓疾病相關(guān)。

Ouchi等人于2000年進行的體外試驗顯示，脂聯(lián)素顯著抑制了TNF-α誘導(dǎo)的單核細胞對動脈內(nèi)皮細胞的黏附作用，抑制了內(nèi)皮細胞中黏附分子的表達，并且具有劑量依賴性，從而減輕內(nèi)皮細胞的炎癥反應(yīng)。其中部分是通過環(huán)磷酸腺苷(cAMP)依賴的調(diào)節(jié)核因子κB的信號傳導(dǎo)途徑而發(fā)揮作用的。Shimabukuro等人于2003年在受損傷的血管壁內(nèi)皮中檢測到脂聯(lián)素，而在未損傷的血管壁上則無脂聯(lián)素表達。Chen等于2006年研究發(fā)現(xiàn)在人的胎盤組織中，脂聯(lián)素在mRNA和蛋白水平均有表達，主要在合體滋養(yǎng)層中表達。放射免疫分析顯示胎盤在體外培養(yǎng)基可分泌脂聯(lián)素。因此推測胎盤是妊娠期母體血清中脂聯(lián)素的重要來源。Wang等人[4]采用ELISA法測定血APN濃度，發(fā)現(xiàn)患者的APN水平明顯低于對照組。并且檢測了脂聯(lián)素中兩個單核苷酸多態(tài)性+45T>G(rs2241766)和+276G>T(rs1501299)的基因型、等位基因和單倍型的頻率。他們發(fā)現(xiàn)SNP+276 TT基因型與防止妊娠期高血壓疾病顯著相關(guān)，而G基因型的作用則相反。與對照組相比，SNP+276的基因型和等位基因頻率分布有顯著差異。揭示了兩個單核苷酸多態(tài)性與妊娠期高血壓疾病患者脂質(zhì)代謝紊亂之間的關(guān)聯(lián)。

本研究采用ELISA法檢測研究對象的血清脂聯(lián)素的濃度，妊娠期高血壓組患者的血清脂聯(lián)素水平與對照組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。輕度子癇前期患者的血清脂聯(lián)素水平(7.68±1.16μg/mL)和重度子癇前期患者的血清脂聯(lián)素水平(5.27±1.35μg/mL)均明顯高于對照組(均P<0.05)。發(fā)現(xiàn)患者血清脂聯(lián)素濃度與TC、TG、LDL和HDL的升降均顯著相關(guān)(P<0.05)。韓乃枝[5]的研究結(jié)果與本研究結(jié)果一致，重度子癇前期組孕婦的血清脂聯(lián)素水平低于輕度子癇前期組。但Ramsay等在2003年研究發(fā)現(xiàn)正常人妊娠時血漿脂聯(lián)素濃度沒有升高，患妊娠期高血壓疾病的孕婦血清中脂聯(lián)素的水平并不降低，反而異常升高，他認為此種現(xiàn)象可能是通過促進脂肪的利用而減輕內(nèi)皮損傷的生理反應(yīng)，或是繼發(fā)于過度的非特異性的脂肪細胞的脂解作用。沈永紅等人[6]也發(fā)現(xiàn)重度子癇前期組血清脂聯(lián)素和可溶性血管內(nèi)皮生長因子1(sFlt-1)水平均明顯高于輕度子癇前期組和健康對照組，提示脂聯(lián)素和sFlt-1可作為子癇前期的預(yù)測指標(biāo)。脂聯(lián)素在妊娠期高血壓疾病中的具體作用有待于進一步闡明。

綜上所述，chemerin及脂聯(lián)素的表達都與妊娠期高血壓疾病的病理過程密切相關(guān)，然而分娩后兩種因子的表達是否仍高于正常分娩的產(chǎn)婦，以及通過何種機制導(dǎo)致疾病的發(fā)生，與患者遠期發(fā)生心血管疾病的關(guān)系需要進一步研究。本實驗的不足在于研究例數(shù)有限，沒有對產(chǎn)婦和新生兒進行長期的隨訪。且妊娠期高血壓疾病的病因和發(fā)病機制復(fù)雜，多種因子參與了血管內(nèi)皮細胞損傷，單純研究chemerin及脂聯(lián)素存在一定的局限性，若綜合其他因素，開展更大規(guī)模的臨床研究，會為妊娠期高血壓疾病的早期預(yù)防和診斷、治療提供充分的理論和臨床實驗依據(jù)。