王愛霞　李月梅

【摘要】 目的 探討痰結(jié)核菌核糖核酸（TB-RNA）檢測應(yīng)用在肺結(jié)核中的診斷價(jià)值。方法 321例活動(dòng)性肺結(jié)核患者作為試驗(yàn)組， 62例肺部其他疾病患者作為對(duì)照組。采集兩組患者痰液進(jìn)行TB-RNA檢測法、涂片鏡檢法和羅氏培養(yǎng)法檢驗(yàn)， 比較兩組患者陽性檢出率， 并觀察三種檢測方法的檢測特點(diǎn)。結(jié)果 試驗(yàn)組患者TB-RNA法陽性檢出率為85.05%， 明顯高于羅氏培養(yǎng)法的74.77%、涂片鏡檢法的28.04%， 羅氏培養(yǎng)法陽性檢出率高于涂片鏡檢法， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。對(duì)照組患者TB-RNA法陽性檢出率為0， 羅氏培養(yǎng)法陽性檢出率為3.23%， 涂片鏡檢法陽性檢出率為0， 比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。TB-RNA檢測法的特點(diǎn)是檢測周期適中（40 min）， 可鑒別活菌并能區(qū)分結(jié)核與非結(jié)核分枝桿菌。結(jié)論 痰TB-RNA檢測在肺結(jié)核中具有陽性檢出率高， 檢測周期短， 并可鑒定活菌等優(yōu)點(diǎn)， 值得推廣。

【關(guān)鍵詞】 肺結(jié)核;結(jié)核菌核糖核酸檢測;診斷

【Abstract】 Objective To discuss the diagnostic value of sputum tuberculosis ribonucleic acid （TB-RNA） detection in pulmonary tuberculosis. Methods A total of 321 patients with active pulmonary tuberculosis were taken as experimental group and 62 patients with other pulmonary diseases were taken as control group. The sputum samples of the two groups were collected for TB-RNA detection， smear microscopy and Roche culture. The positive detection rates of the two groups were compared， and the detection characteristics of the three detection methods were observed. Results The positive detection rate of TB-RNA method was 85.05% in the experimental group， which was significantly higher than that of Roche culture method （74.77%） and smear microscopy method （28.04%）. The positive detection rate of Roche culture method was higher than that of smear microscopy （28.04%）. Their difference was statistically significant （P<0.05）. The positive detection rate of TB-RNA method was 0 in control group， 3.23% in Roche culture method and 0% in smear microscopy method. Their difference was not statistically significant （P>0.05）. TB-RNA assay was characterized by moderate detection cycle （40 minutes）， and it can identify live bacteria and distinguish between tuberculosis and non-tuberculosis mycobacteria. Conclusion Sputum TB-RNA detection in tuberculosis has the advantages of high positive detection rate， short detection cycle and identification of live bacteria. So it is worthy of promotion.

【Key words】 Pulmonary tuberculosis; Detection of tuberculosis ribonucleic acid; Diagnosis

肺結(jié)核疾病較常見， 其在全球范圍內(nèi)流行感染， 根據(jù)世界衛(wèi)生組織2017年結(jié)核病疫情報(bào)告， 我國是肺結(jié)核疾病高負(fù)擔(dān)的國家。結(jié)核病作為一類慢性的傳染性疾病， 主要是結(jié)核分枝桿菌（Mtb）傳染感染[1]。肺結(jié)核主要有原發(fā)性、血行播散性、繼發(fā)性肺結(jié)核、氣管支氣管結(jié)核以及結(jié)核性胸膜炎[2]。肺結(jié)核疾病不僅給患者帶來身體不適， 如導(dǎo)致患者出現(xiàn)身體乏力、低熱、呼吸困難以及消瘦等不良癥狀， 也會(huì)影響患者的生活質(zhì)量， 由于其具有感染性會(huì)給患者在工作和社交方面帶來不便[3]。TB-RNA檢測方法是通過RNA恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)發(fā)展起來， 不同于其他檢測方法， 可快速準(zhǔn)確地判斷Mtb的存在[4]。本研究選取2016年1月～2017年12月本院治療的383例肺部疾病患者作為研究對(duì)象， 探討痰TB-RNA檢測在肺結(jié)核中的診斷價(jià)值， 現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2016年1月～2017年12月內(nèi)蒙古自治區(qū)第四醫(yī)院治療的383例肺部疾病患者作為研究對(duì)象， 其中321例活動(dòng)性肺結(jié)核患者作為試驗(yàn)組， 62例肺部其他疾病患者作為對(duì)照組。試驗(yàn)組中確診275例患者為肺結(jié)核疾病， 46例患者為臨床診斷肺結(jié)核疾病;男211例， 女110例; 年齡18～65歲， 平均年齡（41.24±12.46）歲。對(duì)照組患者中男39例， 女23例;年齡28～68歲， 平均年齡（43.31± 10.18）歲;慢性支氣管炎32例（51.61%）， 肺炎15例（24.19%）， 肺癌5例（8.06%）， 非結(jié)核分枝桿菌肺病2例（3.23%）， 結(jié)節(jié)病2例（3.23%）， 支氣管擴(kuò)張4例（6.45%）， 塵肺2例（3.23%）。兩組患者年齡、性別等一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)[5]：①活動(dòng)性肺結(jié)核研 究對(duì)象診斷依據(jù)為《肺結(jié)核診斷和治療指南》;②研究對(duì)象愿意配合治療。排除標(biāo)準(zhǔn)[6]：①患有艾滋病病毒（HIV）感染及嚴(yán)重的全身疾病;②患有精神疾病;③同時(shí)參與其他研究項(xiàng)目。

1. 3 方法 采集兩組研究對(duì)象在早餐后的痰液作為標(biāo)本， 每個(gè)標(biāo)本分3份分別通過羅氏培養(yǎng)法、涂片鏡檢法以及TB-RNA法進(jìn)行檢測， 具體方法如下。

1. 3. 1 TB-RNA檢測方法 使用SArTB試劑盒， 具體操作為：①將標(biāo)本和TB裂解稀釋緩沖液按照1∶100進(jìn)行混合稀釋， 用C5H10O3處理的無菌水制備10 mmol/L檸檬酸鈉為TB裂解稀釋緩沖液。②將稀釋的溶液采用超聲波清洗儀進(jìn)行超聲處理， 超聲條件設(shè)定為300 W、15 min。③在超聲結(jié)束后， 采用移液槍吸取2 μl加入倒30 μl擴(kuò)增檢測液（pH為8.1的40 mmol/L的Tris-Hcl緩沖液）中。④按操作說明設(shè)定恒溫?zé)晒鈾z測儀的實(shí)驗(yàn)參數(shù)， 熒光素通道為6-羧基熒光素（42℃， 1 min）， 共40個(gè)循環(huán);1 min記錄1次熒光信號(hào)， 共檢測40次。⑤反應(yīng)結(jié)束后， 在溫度42℃條件下保溫5 min（恒溫混勻儀）;同時(shí)將預(yù)熱到42℃的SAT酶液（2000 U的T7 RNA轉(zhuǎn)錄酶和2000 U的M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶）加入到反應(yīng)管中， 迅速放入恒溫?zé)晒鈾z測儀中檢測。實(shí)驗(yàn)用試劑與設(shè)備：恒溫混勻儀（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）， 恒溫?zé)晒鈾z測儀（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）， SArTB試劑盒（上海仁度生物科技有限公司）。

1. 3. 2 羅氏培養(yǎng)法 進(jìn)行菌種鑒定， 針對(duì)檢測出培養(yǎng)陽性的標(biāo)本， 確定分枝桿菌種類。

1. 3. 3 涂片鏡檢法 按《結(jié)核病診斷細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)規(guī)程》中萋-尼氏抗酸染色鏡檢的相關(guān)方法進(jìn)行操作。

1. 4 觀察指標(biāo) 比較兩組患者陽性檢出率， 并觀察三種檢測方法的檢測特點(diǎn)。

1. 5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 兩組陽性檢出率比較 試驗(yàn)組患者TB-RNA法陽性檢出率為85.05%， 明顯高于羅氏培養(yǎng)法的74.77%、涂片鏡檢法的28.04%， 羅氏培養(yǎng)法陽性檢出率高于涂片鏡檢法， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。對(duì)照組患者TB-RNA法陽性檢出率為0， 羅氏培養(yǎng)法陽性檢出率為3.23%， 涂片鏡檢法陽性檢出率為0， 比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

2. 2 三種檢測方法的檢測特點(diǎn) TB-RNA檢測法的特點(diǎn)是檢測周期適中（40 min）， 可鑒別活菌并能區(qū)分結(jié)核與非結(jié)核分枝桿菌。見表2。

3 討論

對(duì)于活動(dòng)性肺結(jié)核能夠快速判斷出病癥是控制病情發(fā)展和惡化的關(guān)鍵環(huán)節(jié)， 現(xiàn)在對(duì)于快速診斷尚未達(dá)到理想的要 求[7]。目前患者在醫(yī)院進(jìn)行診治要經(jīng)過數(shù)天后檢查才會(huì)確診肺結(jié)核疾病， 容易錯(cuò)過病癥的最佳治療期， 拖延病情[8]。由于科學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展， 近些年來分子生物學(xué)技術(shù)診斷此病發(fā)揮了很大的價(jià)值。

本研究結(jié)果顯示， 試驗(yàn)組患者TB-RNA法陽性檢出率為85.05%， 明顯高于羅氏培養(yǎng)法的74.77%、涂片鏡檢法的28.04%， 羅氏培養(yǎng)法陽性檢出率高于涂片鏡檢法， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。對(duì)照組患者TB-RNA法陽性檢出率為0， 羅氏培養(yǎng)法陽性檢出率為3.23%， 涂片鏡檢法陽性檢出率為0， 比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。再根據(jù)三種檢測方法的特點(diǎn)進(jìn)行觀察發(fā)現(xiàn)， TB-RNA檢測法的特點(diǎn)是檢測周期適中（40 min）， 可鑒別活菌并能區(qū)分結(jié)核與非結(jié)核分枝桿菌。醫(yī)院現(xiàn)在對(duì)肺結(jié)核疾病的診斷暫無快速診斷的方法， 使用TB-RNA檢測方法不僅可以減少檢測診斷的時(shí)間， 縮短臨床確診周期， 還能提高陽性檢出率， TB-RNA檢測法是將16S rRNA作為檢測靶標(biāo)， 再擴(kuò)增靶標(biāo)的片段， 將熒光探針與靶標(biāo)片段的擴(kuò)增產(chǎn)物雜交后， 釋放出熒光信號(hào)， 再實(shí)時(shí)檢測熒光信號(hào)， 因此快速準(zhǔn)確地判斷結(jié)核分枝桿菌的存在[9， 10]。

綜上所述， 痰TB-RNA法陽性檢出率較高， 檢測周期短， 為診斷肺結(jié)核提供更為快速和準(zhǔn)確的檢測手段， 值得推廣。

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[收稿日期：2018-11-06]