孫永旭,董宏標(biāo),王文豪,曹明,段亞飛,李華,劉青松,張家松,4,*

1.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所,農(nóng)業(yè)農(nóng)村部南海漁業(yè)資源開(kāi)發(fā)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣州 510300

2.上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院,上海 201306

3.廣東省漁業(yè)種質(zhì)保護(hù)中心,廣州 511453

4.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所深圳試驗(yàn)基地,深圳 518121

0 前言

大口黑鱸(Micropterus salmoides)屬于鱸形目(Perciformes)、太陽(yáng)魚科(Centrarchidae)、黑鱸屬(Micropterus),又稱加州鱸,因其生長(zhǎng)速度快、抗逆性強(qiáng)、市場(chǎng)潛力大等優(yōu)點(diǎn),已在廣東、江蘇、浙江等地大規(guī)模養(yǎng)殖,成為中國(guó)南方地區(qū)淡水人工養(yǎng)殖的主養(yǎng)高檔品種之一[1]。據(jù)統(tǒng)計(jì),2016年我國(guó)大口黑鱸養(yǎng)殖產(chǎn)量達(dá)37 萬(wàn)噸[2]。而在魚類生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中,幼魚階段正值其免疫力薄弱、組織器官發(fā)育及增產(chǎn)增重的關(guān)鍵時(shí)期,過(guò)度的環(huán)境應(yīng)激不僅會(huì)導(dǎo)致魚類免疫力下降,生長(zhǎng)速度減慢,甚至?xí)斐婶~類死亡。

在自然界中,季節(jié)更替[3]、洋流運(yùn)動(dòng)[4]、及全球變暖效應(yīng)[5]等均會(huì)導(dǎo)致水體溫度的改變。溫度是影響魚類生長(zhǎng)發(fā)育的重要環(huán)境因素之一,在魚類生長(zhǎng)、繁殖、新陳代謝及滲透調(diào)節(jié)等方面均有顯著影響[6]。生物對(duì)不同生態(tài)因子都有一個(gè)由最高耐受點(diǎn)和最低耐受點(diǎn)構(gòu)成的耐受范圍,這個(gè)范圍被稱為生態(tài)幅[7]。當(dāng)外界溫度處于魚類溫度生態(tài)幅之外時(shí),將對(duì)魚體造成脅迫,使得機(jī)體氧自由基(Reactive oxygen species,ROS)代謝紊亂,并在組織器官內(nèi)大量積累,過(guò)多的ROS 會(huì)攻擊生物膜,生成脂質(zhì)過(guò)氧化物(lipid peroxidation,LPO),并最終分解為丙二醛(malondialdehyde,MDA)[8]。谷胱甘肽(glutathione,GSH)一方面作為抗氧化酶(GPX)的底物來(lái)清除過(guò)多的ROS,另一方面可直接和部分ROS反應(yīng),參與ROS的代謝過(guò)程[9]。此外,ROS 的積累常常還伴隨著機(jī)體免疫防御機(jī)制的紊亂[10]。熱休克蛋白(heat shock proteins,HSPs)和金屬硫蛋白(metallothionein,MT)廣泛存在于人體、動(dòng)植物和微生物體內(nèi),在機(jī)體應(yīng)激時(shí)大量合成,是機(jī)體應(yīng)激時(shí)大量合成的保護(hù)蛋白[11-12]。因此,機(jī)體應(yīng)激脅迫常常表現(xiàn)出抗氧化酶和免疫相關(guān)蛋白等指標(biāo)的變化[13-14]。如Madeira 等[11]研究發(fā)現(xiàn),高溫脅迫誘導(dǎo)多種水生動(dòng)物熱休克蛋白70(HSP70)的表達(dá);低溫脅迫使得黃姑魚(Nibea albiflora)抗氧化酶活性和HSP70 蛋白含量顯著升高[15];高溫脅迫同樣誘導(dǎo)金魚抗氧化酶活性的升高[16]。目前,國(guó)內(nèi)外關(guān)于急性溫度脅迫對(duì)草魚[17],銀鯧[18]等魚類生理機(jī)能的影響已見(jiàn)相關(guān)報(bào)道,而關(guān)于長(zhǎng)期馴養(yǎng)溫度對(duì)魚類生理機(jī)能的影響研究較少。本實(shí)驗(yàn)探究了大口黑鱸幼魚在不同馴養(yǎng)溫度下肌肉、肝臟、鰓和腸道組織中抗氧化能力及免疫相關(guān)蛋白的變化,以期為研究大口黑鱸幼魚對(duì)環(huán)境溫度的適應(yīng)機(jī)制和健康養(yǎng)殖提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

實(shí)驗(yàn)用大口黑鱸幼魚購(gòu)自廣東省珠海市白蕉鎮(zhèn)某養(yǎng)殖場(chǎng),先在室內(nèi)圓形養(yǎng)殖池中(直徑:4.5 m,高0.8 m)暫養(yǎng)2 周。暫養(yǎng)期間每天08:00 飽食投喂一次(海皇鱸魚專用配合飼料),并及時(shí)撈出殘餌。每天16:00 底部吸污排水,換水量為15%左右。暫養(yǎng)期間養(yǎng)殖用水為曝氣24 h 后的自來(lái)水,水溫(29±1) ℃,pH 7.5±0.2,溶氧≥6.0 mg·L-1,自然光周期。

1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

暫養(yǎng)結(jié)束后隨機(jī)選取規(guī)格相近、體表無(wú)傷的大口黑鱸幼魚72 尾,體質(zhì)量均值為(110±5) g。實(shí)驗(yàn)設(shè)置21 ℃、25 ℃、29 ℃和33 4℃ 個(gè)溫度梯度組,每組3 個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)6 尾。實(shí)驗(yàn)魚養(yǎng)殖于100L 圓形PVC 養(yǎng)殖桶,室溫(29±0.5) ℃穩(wěn)定3 d 后,用冷水機(jī)(中國(guó),海利HC-150A)和自動(dòng)控溫加熱系統(tǒng)(中國(guó),威諾WN-15E)以1 ℃·d-1的速率將各組溫度降/升溫到預(yù)定溫度,并保持不變,實(shí)驗(yàn)周期為2 周[13-14]。日常換水之前將曝氣后的自來(lái)水預(yù)冷或預(yù)熱到與養(yǎng)殖桶水溫一致。養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)期間其他日常管理同暫養(yǎng)期間一致。

1.3 樣品采集與分析

取樣前24 h 停止喂食。于每個(gè)實(shí)驗(yàn)組隨機(jī)抽取6 尾,200 mg·L-1MS-222 迅速麻醉,冰盤上解剖,取其肌肉、肝臟、鰓和腸道組織,在預(yù)冷的生理鹽水中漂洗后,濾紙拭干,放入提前標(biāo)記好的1.5 mL 無(wú)菌離心管中,-80 ℃冰箱保存。

樣品測(cè)定前在4 ℃冰箱中解凍,用預(yù)冷的生理鹽水洗滌,濾紙吸去表面水分,稱重后按照質(zhì)量體積比加入9 倍預(yù)冷生理鹽水,冰水浴中均質(zhì)機(jī)勻漿,勻漿液經(jīng)低溫離心(4 ℃,3500 r·min-1,10 min)后,取上清液于預(yù)冷的無(wú)菌離心管中,-20 ℃保存。超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、過(guò)氧化氫酶(catalase,CAT)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、微量還原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)、總抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)、熱休克蛋白70(heat shock protein70,HSP70)和金屬硫蛋白(metallothionein,MT)均采用試劑盒法(購(gòu)自南京建成生物工程研究所)測(cè)定,并進(jìn)行結(jié)果分析。

組織中每毫克蛋白在0.24 mL 反應(yīng)液中,抑制率達(dá)50%時(shí)所對(duì)應(yīng)的酶量定為一個(gè)SOD 活力單位(U)。組織中每毫克蛋白在每秒鐘分解1 μmol 的H2O2的量為一個(gè)CAT 活力單位(U)。MDA 含量測(cè)定采用TBA 法。GSH 測(cè)定采用微量酶標(biāo)法。T-AOC測(cè)定采用FRAP 法。HSP70 和MT 均采用干粉法測(cè)定。總蛋白測(cè)定采用考馬斯亮藍(lán)法。

1.4 數(shù)據(jù)處理分析

應(yīng)用SPSS 20.0 和origin 9.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析和作圖。采用單因素方差分析(one-way ANOVA),LSD 多重比較檢驗(yàn),P＜0.05 為顯著水平,結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差(Mean±SE)表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 溫度對(duì)大口黑鱸幼魚抗氧化能力的影響

2.1.1 溫度對(duì)大口黑鱸幼魚SOD 活性的影響

如圖1所示,在同一溫度組中,各組織中SOD活性存在較大差異,由高到低分別為鰓、腸、肝臟和肌肉。不同溫度組之間,實(shí)驗(yàn)魚肌肉中SOD 活性在25 ℃時(shí)最低但與其他組差異不顯著(P＞0.05)。肝臟中SOD 活性隨溫度升高而先降低后升高,29 ℃和25 ℃組顯著(P＜0.05)低于21 ℃和33 ℃組。鰓和腸組織中SOD 活性同樣隨溫度升高呈倒拋物線趨勢(shì),在29℃組中其活性顯著低于其他三組(P＜0.05)。

2.1.2 溫度對(duì)大口黑鱸幼魚CAT 活性的影響

如圖2所示。在同一溫度組中,肌肉和腸中CAT活性較低,而肝臟和鰓中CAT 活性較高。不同溫度組之間,實(shí)驗(yàn)魚肌肉中CAT 活性隨著溫度升高而變化,在25 ℃時(shí)最低,但與其他組相比,差異不顯著(P＞0.05)。肝臟中CAT 活性隨溫度升高同樣呈現(xiàn)波動(dòng)性,在水溫為29 ℃時(shí)最低,且顯著低于其他溫度組。鰓和腸組織中CAT 活性隨溫度升高而呈現(xiàn)先降低后升高的趨勢(shì),分別在29 ℃和25 ℃時(shí)達(dá)到最低,其中,29 ℃組鰓中CAT 活性顯著(P＜0.05)低于其他三個(gè)溫度組,25 ℃組腸組織中CAT 活性與29 ℃組差異不顯著(P＞0.05),但與低溫組(21 )℃和高溫組(33 )℃差異顯著(P＜0.05)。

2.1.3 溫度對(duì)大口黑鱸幼魚MDA 含量的影響

如圖3所示:同一溫度組中,組織中MDA 含量由高到低分別為鰓、腸、肌肉和肝臟。不同溫度組間,肌肉和腸組織中MDA 含量隨溫度升高呈波動(dòng)性變化,最高出現(xiàn)在21 ℃組,且顯著高于其他溫度組(P＜0.05)。 肝臟中MDA 含量在21 ℃組反而最低,顯著低于25 ℃和33 ℃組(P＜0.05)。四個(gè)溫度組實(shí)驗(yàn)魚的鰓組織中MDA 含量較高但差異不顯著(P＞ 0.05)。

2.1.4 溫度對(duì)大口黑鱸幼魚GSH 含量的影響

如圖4所示:同一溫度組中,肌肉中GSH 含量較低,肝臟、鰓和腸組織中GSH 含量較高。不同溫度組間,肌肉和腸組織中GSH 顯著低于其他組(P＜0.05)。肝臟中GSH 含量隨溫度變化而波動(dòng),在29 ℃組最低,33 ℃組最高。鰓和腸組織中GSH 含量隨溫度升高而先降低后升高,分別在25 ℃和29 ℃組最低,但兩組之間差異不顯著(P＞0.05)。

圖3 溫度對(duì)MDA 含量的影響 Figure3 Effects of temperature on MDA content

圖4 溫度對(duì)GSH 含量的影響 Figure4 Effects of temperature on CAT content

2.1.5 溫度對(duì)大口黑鱸幼魚T-AOC 的影響

如圖5所示,同一溫度組中,各組織中T-AOC存在差異,肌肉組織中T-AOC 最低,肝臟組織中最高。不同溫度組間,肌肉中T-AOC 隨著溫度升高而先降低后升高,最低出現(xiàn)在29 ℃組,顯著(P＜0.05)低于其他溫度組。肝臟中T-AOC 隨溫度升高而上下波動(dòng),同樣在29 ℃最低,與21 ℃和33 ℃組之間差異不顯著(P＞0.05)。鰓組織中T-AOC 隨溫度升高變化不大。腸組織中T-AOC 隨溫度升高而呈先降低后升高的趨勢(shì),在25 ℃組最低,與29 ℃組之間差異不顯著(P＞0.05)。

2.2 溫度對(duì)大口黑鱸幼魚免疫相關(guān)蛋白表達(dá)含量的影響

2.2.1 溫度對(duì)大口黑鱸幼魚HSP70 表達(dá)的影響

如圖6所示,同一溫度組中,肌肉組織中HSP70 含量較高,鰓中較低。不同溫度組間,肌肉中HSP70 含量隨著溫度升高呈逐漸升高的趨勢(shì),最低出現(xiàn)在21 ℃組,且該組顯著低于(P＜0.05)其他溫度組。肝臟中HSP70 含量隨溫度升高而先升高后降低,在29 ℃組最高,但與其他三組之間差異不顯著(P＞0.05)。鰓組織中HSP70 含量隨溫度升高變化不大,在33 ℃組最高。腸組織中T-AOC 隨溫度升高而呈先升高后降低的趨勢(shì),在25 ℃組最高,21 ℃組最低,兩組間差異顯著(P＜0.05)。

2.2.2 溫度對(duì)大口黑鱸幼魚MT 表達(dá)的影響

圖5 溫度對(duì)T-AOC 的影響 Figure5 Effects of temperature on T-AOC

圖6 溫度對(duì)HSP70 含量的影響 Figure6 Effects of temperature on HSP70 content

圖7 溫度對(duì)MT 含量的影響 Figure7 Effects of temperature on MT content

如圖7所示,同一溫度組中,肝臟中MT 含量較高,鰓中含量較低。不同溫度組間,肌肉和肝臟中MT含量隨著溫度升高呈先升高后降低的趨勢(shì),最高出 現(xiàn)在29 ℃組,但各組之間差異不顯著(P＞0.05)。鰓和腸組織中MT 含量隨溫度升高呈現(xiàn)波動(dòng)性變化,最高均出現(xiàn)在33 ℃組,且與其他三組之間差異顯著(P＜0.05)。

3 討論

3.1 溫度對(duì)大口黑鱸幼魚不同組織抗氧化能力的影響

溫度是影響魚類生長(zhǎng)發(fā)育的重要環(huán)境因素之一。不適的溫度會(huì)引起魚體的應(yīng)激反應(yīng),而應(yīng)激反應(yīng)常常與ROS 的過(guò)量積累有關(guān)[21]。正常情況下,機(jī)體ROS 的產(chǎn)生與分解處于動(dòng)態(tài)平衡中;但當(dāng)受到外界脅迫刺激時(shí),這種動(dòng)態(tài)平衡即被打破,ROS 迅速積累,當(dāng)其積累超過(guò)魚體承受范圍時(shí)會(huì)導(dǎo)致機(jī)體的氧化應(yīng)激損傷[22],引起組織器官結(jié)構(gòu)與功能上的變化,進(jìn)而體現(xiàn)為抗病能力、生長(zhǎng)速率等生產(chǎn)指標(biāo)的降低。如長(zhǎng)期低氧應(yīng)激下,黃顙魚對(duì)嗜水氣單胞菌的抗病力顯著下降[23]。高密度應(yīng)激下,魚類的能量輸送偏向于生理功能調(diào)節(jié),進(jìn)而降低了生長(zhǎng)速率[24]。生物體在長(zhǎng)期進(jìn)化過(guò)程中形成了一套完整的抗氧化系統(tǒng)來(lái)清除過(guò)多的ROS,避免一定程度上的氧化應(yīng)激損傷,這套系統(tǒng)分為酶類抗氧化劑(SOD 和CAT 等)和非酶類抗氧化劑(GSH 和維生素C 等)[25-26]。研究表明,SOD 主要作用是將生物自身代謝或外界脅迫下產(chǎn)生的ROS轉(zhuǎn)化為過(guò)氧化氫,而CAT作為過(guò)氧化氫的清除劑,將過(guò)氧化氫還原成氧分子和水[27]。

由于生物抗氧化系統(tǒng)的響應(yīng)機(jī)制因物種、組織器官等而異,因此,隨著溫度變化,其抗氧化酶活性也呈現(xiàn)不同的變化趨勢(shì)。由最適溫度開(kāi)始,軍曹魚(Rachycentron canadum)[28]和吉富羅非魚(Oreochromis niloticus)幼魚[29]SOD 和CAT 活性隨溫度降低而升高;褐牙鲆(Paralichthys olivaceus)[30]、小黃魚(Larimichthys polyactis)[31]和大菱鲆(Scophthalmus maximus)[32]SOD 活性隨溫度升高而降低;金魚(Carassius auratus)[33]SOD 活性高溫脅迫溫度升高而升高,并且肝臟和腎臟中SOD 活性較高。在本實(shí)驗(yàn)中,不同溫度對(duì)大口黑鱸幼魚造成的脅迫效應(yīng)不盡相同。整體而言,隨著溫度從21 ℃到33 ℃上升,大口黑鱸幼魚肝臟、鰓和腸道中SOD 和CAT活性隨溫度上升而呈先降低后升高的趨勢(shì),且基本均在29 ℃時(shí)活性最低。研究指出,大口黑鱸最佳生長(zhǎng)水溫為28.1—28.6 ℃[34],這與本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果相似。其抗氧化酶活性變化趨勢(shì)與軍曹魚[28]、吉富羅非魚[29]和金魚[33]等研究類似,推測(cè)在低溫或高溫脅迫下,大口黑鱸幼魚體內(nèi)自由基代謝平衡被打破使得ROS 積累,進(jìn)而誘導(dǎo)抗氧化酶活性的增強(qiáng)。而在比較低溫和高溫脅迫應(yīng)激發(fā)現(xiàn),25 ℃溫度組中SOD活性較為接近適溫組,而在33 ℃組中SOD 呈較高活性,表明相較于低溫脅迫,高溫對(duì)大口黑鱸幼魚機(jī)體造成了更大損傷。高溫會(huì)降低水體溶氧[35],加速機(jī)體代謝[36-37],代謝和呼吸旺盛加劇水體溶氧消化和水質(zhì)惡化,間接影響魚體脅迫,進(jìn)而導(dǎo)致在本實(shí)驗(yàn)中,高溫表現(xiàn)出對(duì)實(shí)驗(yàn)魚具有較高的氧化應(yīng)激損傷影響。在對(duì)不同組織中SOD 和CAT 活性進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn),四個(gè)組織中抗氧化酶活性存在較大差異:鰓,腸和肝臟中其酶活性較高且波動(dòng)較大,而肌肉中較低且波動(dòng)平穩(wěn)。這表明長(zhǎng)期溫度脅迫下,實(shí)驗(yàn)魚鰓、腸和肝臟組織是主要響應(yīng)靶器官,也是機(jī)體ROS 積累與代謝的主要場(chǎng)所。

當(dāng)機(jī)體因外界脅迫積累大量ROS而無(wú)法及時(shí)清除時(shí),過(guò)多的ROS 會(huì)攻擊生物膜,生成脂質(zhì)過(guò)氧化物(LPO),并最終分解為MDA[8]。MDA 可改變生物膜流通性,對(duì)其造成損傷。因此,組織中的MDA 水平往往是機(jī)體脂質(zhì)過(guò)氧化程度的體現(xiàn),其側(cè)面反映了細(xì)胞損傷的程度[38]。而GSH 一方面作為抗氧化酶(GPX)的底物來(lái)清除多余的ROS,另一方面可以直接和部分ROS 反應(yīng),參與ROS 的代謝過(guò)程[9],其含量的多少與機(jī)體抗氧化能力密切相關(guān)。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,長(zhǎng)期溫度脅迫下大口黑鱸幼魚鰓和腸中積累了大量MDA 和GSH,而肌肉中含量較低,這與SOD 和CAT 活性在肌肉中較低有一定一致性,推測(cè)溫度脅迫對(duì)實(shí)驗(yàn)魚肌肉組織的影響較小。整體來(lái)看,升溫或降溫均對(duì)大口黑鱸幼魚組織器官產(chǎn)生一定氧化脅迫損傷。在相同的溫度應(yīng)激程度(4 )℃下比較,25 ℃組中MDA 含量整體低于33 ℃組。這與南方鲇(Silurus meridionalis)幼魚[39]和虹鱒(Salmo gairdneri)[40]的研究結(jié)果相反,推測(cè)升溫或降溫的脅迫效應(yīng)因魚種而異。本實(shí)驗(yàn)表明大口黑鱸對(duì)升溫具有更高的敏感性,在長(zhǎng)期高溫應(yīng)激脅迫時(shí),機(jī)體損傷程度更大。

T-AOC 是反映機(jī)體抗氧化能力的綜合指標(biāo)。研究表明,魚體抗氧化能力與水溫之間有較高的相關(guān)性[41]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,隨著溫度升高,大口黑鱸幼魚肌肉和腸組織中T-AOC 呈先降低后升高的趨勢(shì),在21 ℃和33 ℃時(shí)最高,表明長(zhǎng)期溫度脅迫影響,對(duì)機(jī)體造成了一定程度的氧化應(yīng)激損傷,進(jìn)而表現(xiàn)為T-AOC 的升高。在肝組織中,T-AOC 在一般低溫組(25 )℃最高,顯著高于(P＞0.05)其他三組,推測(cè)適度的溫度脅迫誘導(dǎo)抗氧化酶活性的增強(qiáng),但過(guò)度的溫度脅迫對(duì)肝臟造成了一定不可逆損傷,抑制了機(jī)體免疫相關(guān)酶的活性,進(jìn)而表現(xiàn)為T-AOC 的降低。

3.2 溫度對(duì)大口黑鱸幼魚不同組織免疫相關(guān)蛋白含量的影響

魚類為變溫動(dòng)物,外界溫度變化會(huì)影響魚類在分子和生理方面的變化,熱休克蛋白(HSPs)作為機(jī)體應(yīng)激時(shí)大量合成的內(nèi)源性保護(hù)蛋白,其表達(dá)量常與抗氧化酶(SOD、CAT 等)一起作為衡量機(jī)體應(yīng)激程度的指標(biāo)[11]。已有研究指出,低溫脅迫誘導(dǎo)了黃姑魚(Nibea albiflora)[42]、東方藍(lán)鰭鮪(Thunnus orientalis)[43]和金槍魚(Salmo salar)[44]等HSP70 蛋白的表達(dá)。在本實(shí)驗(yàn)中,與常溫組(29 )℃相比,其他溫度組HSP70 含量在肝臟和腸組織中反而有所降低,這與上述多數(shù)研究結(jié)果不符,可能因?yàn)榧毙悦{迫誘導(dǎo)HSP70 蛋白合成以提高機(jī)體耐受性,但機(jī)體對(duì)長(zhǎng)期溫度脅迫具有適應(yīng)過(guò)程,如長(zhǎng)期熱應(yīng)激脅迫對(duì)鯉魚鰓組織中HSP70 的誘導(dǎo)效應(yīng)不明顯,而急性脅迫可誘導(dǎo)該組織中HSP70 的大量表達(dá)[45]。HSP70 的表達(dá)同樣具有一定的時(shí)序性,研究發(fā)現(xiàn)隨著脅迫時(shí)間的延長(zhǎng),其含量呈先升高后降低的趨勢(shì)[42,46],并推測(cè)機(jī)體在受到脅迫刺激后建立了新的平衡。此外,Delaney 等[47]研究表明,中等強(qiáng)度增溫可顯著誘導(dǎo)鯉魚血清中HSP70表達(dá),而高強(qiáng)度熱脅迫下,HSP70表達(dá)反而低于正常水平,這可能是因?yàn)闄C(jī)體對(duì)無(wú)法抵抗過(guò)高程度應(yīng)激所造成的脅迫損傷,進(jìn)而表現(xiàn)為免疫相關(guān)蛋白表達(dá)水平的降低。因此,本實(shí)驗(yàn)中長(zhǎng)期脅迫下各個(gè)溫度組中HSP70 表達(dá)量的降低很可能是這方面的原因?qū)е?而較低的HSP70 表達(dá)量是否表明機(jī)體對(duì)后續(xù)可能的應(yīng)激抵御力降低,并在一定程度上表現(xiàn)為機(jī)體自身免疫力的降低,還需要進(jìn)一步的研究。

MT 是一類金屬結(jié)合蛋白,廣泛存在于人體、動(dòng)植物和微生物體內(nèi),同樣在機(jī)體受到脅迫應(yīng)激時(shí)大量合成[12]。研究發(fā)現(xiàn),脅迫應(yīng)激會(huì)導(dǎo)致MT 在魚類中顯示組織特異性的應(yīng)答機(jī)制[48]。本實(shí)驗(yàn)同樣發(fā)現(xiàn)不同組織中MT 的含量呈現(xiàn)組織差異性:肌肉和肝臟中MT 含量整體較高,而鰓和腸中MT 含量整體較低。不同溫度組之間MT 含量差異不大,僅在高溫組(33 )℃時(shí),其MT 含量整體較其他組有較大差異,并且各個(gè)溫度組之間肝臟中MT 含量差異不顯著(P＞0.05)。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果與Silvestre[49]和周彥峰[50]等的研究相符,在脅迫時(shí)間持續(xù)增加以后,MT 含量由一開(kāi)始的升高轉(zhuǎn)而降低,表明實(shí)驗(yàn)魚對(duì)長(zhǎng)期脅迫具有一定的適應(yīng)性過(guò)程,以抵抗應(yīng)激對(duì)機(jī)體所造成的損傷。

4 結(jié)論

本研究初步表明,長(zhǎng)期溫度脅迫對(duì)大口黑鱸肝臟、鰓、腸和肌肉均造成一定應(yīng)激損傷,其中鰓、腸和肝臟組織是主要響應(yīng)靶器官,也是機(jī)體ROS 積累與代謝的主要場(chǎng)所。升溫或降溫均對(duì)大口黑鱸幼魚組織器官產(chǎn)生一定氧化脅迫損傷。大口黑鱸對(duì)升溫具有更高的敏感性,相較于低溫脅迫,高溫對(duì)大口黑鱸幼魚機(jī)體造成了更大損傷。而大口黑鱸魚對(duì)長(zhǎng)期脅迫具有一定的適應(yīng)性過(guò)程,以抵抗應(yīng)激對(duì)機(jī)體所造成的損傷。