趙麗麗，蘭新財(cái)，葉志惠，歐 彬

（浙江金大康動(dòng)物保健品有限公司，浙江金華321016）

桉油為桃金娘種植物藍(lán)桉Eucalptus globulus Labill、 樟科植物樟Cinnamomum camphora（L.）Presl. 或上述兩科同屬其他植物經(jīng)蒸餾得到的揮發(fā)油[1]，系中國(guó)獸藥典（2015年版）法定藥材，桉油中主要含桉油精（C10H18O），桉油的主要成分是桉油精，桉油精具有抗菌、殺蟲(chóng)、疏風(fēng)解熱、祛濕解毒作用，同時(shí)對(duì)多種藥物具有良好的透皮滲透作用[2]，其含量≥70%（g/g），還含有檸檬烯、α-蒎烯等成分。 樟科植物樟所蒸餾的揮發(fā)油主要成分也是桉油精， 但還含有黃樟素等毒性成分，桃金娘種植物藍(lán)桉所蒸餾的揮發(fā)油不含黃樟素等毒性成分[3]。 本試驗(yàn)所用桉油栓中主要成分藍(lán)桉油系從藍(lán)桉葉莖葉提取的有效成分，本品具有明顯的清熱解毒、抗菌消炎作用，主要用于預(yù)防和治療母畜的急、慢性子宮內(nèi)膜炎、陰道炎、胎衣滯留等。 本文主要對(duì)桉油栓對(duì)豚鼠的皮膚致敏性進(jìn)行試驗(yàn)觀察，以期為臨床安全用藥提供依據(jù)。

1 試驗(yàn)材料

1.1 藥物及試劑

桉油栓，批號(hào)：20170710，規(guī)格8g/ 支，由浙江金大康動(dòng)物保健品有限公司提供。 賦形劑空白栓劑，批號(hào)：20170710，規(guī)格8g/支，由浙江金大康動(dòng)物保健品有限公司提供。 2,4- 二硝基氯代苯，配制1%為致敏濃度，0.1%為激發(fā)濃度。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康白色豚鼠，體重250-300g，雌雄各半，由南京南京市江寧區(qū)青龍山動(dòng)物繁殖場(chǎng)提供，試驗(yàn)期間提供全價(jià)顆粒料及新鮮蔬菜， 自由采食、飲水。

2 試驗(yàn)方法

2.1 受試動(dòng)物準(zhǔn)備

給藥前24h 將豚鼠背部?jī)蓚?cè)用脫毛器去毛暴露皮膚，去毛面積為3cm×3cm，試驗(yàn)時(shí)將皮膚破損的動(dòng)物剔除。

2.2 分組及處理

取40 只豚鼠隨機(jī)分三組， 各組數(shù)量及處理如下：

表1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

（1）致敏接觸：空白對(duì)照組與藥物試驗(yàn)組分別取0.2g 加熱溶解，陽(yáng)性對(duì)照組取0.2ml 1%2,4-二硝基氯代苯均勻涂于豚鼠左側(cè)脫毛區(qū)，用一層油紙及兩層紗布覆蓋，作用6h 后，除去覆蓋物；第7d、第14d 以同樣的方法處理。

（2）激發(fā)接觸：于末次給受試物致敏后14d，分別取0.1g 賦形劑與桉油栓，0.1%2,4- 二硝基氯代苯均勻涂于豚鼠右側(cè)脫毛區(qū)，用一層油紙及兩層紗布覆蓋，作用6h，用生理鹽水洗去涂抹物，即刻觀察激發(fā)接觸后0h、6h、24h、48h、72h 皮膚過(guò)敏反應(yīng)情況[3-6]。

2.3 觀察指標(biāo)

致敏后1h 和24h 及激發(fā)后24h 和48h 觀察皮膚紅斑、水腫和其他異常反應(yīng)，按下表對(duì)紅斑和水腫進(jìn)行評(píng)分。

表2 皮膚過(guò)敏反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

皮膚過(guò)敏反應(yīng)最高分為8 分

皮膚從反應(yīng)平均分= （紅斑形成總分+ 水腫形成總分）/動(dòng)物數(shù)

2.4 結(jié)果評(píng)價(jià)

計(jì)算過(guò)敏反應(yīng)發(fā)生率，根據(jù)表3 判斷過(guò)敏反應(yīng)發(fā)生的程度。

表3 皮膚過(guò)敏反應(yīng)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

致敏率=出現(xiàn)紅斑或紅腫的動(dòng)物數(shù)/該組動(dòng)物總數(shù)

3 結(jié)果

表4 桉油栓對(duì)皮膚的致敏性評(píng)價(jià)

試驗(yàn)結(jié)果表明，空白對(duì)照組、藥物試驗(yàn)組在致敏后0h、6h、24h、48h、72h 的反應(yīng)平均分皆為0， 而2,4- 二硝基氯代苯陽(yáng)性對(duì)照組則為2.1、2.5、4.9、5.2、3.9，出現(xiàn)明顯紅斑、水腫過(guò)敏癥狀；各組均未出現(xiàn)哮喘、站立不穩(wěn)或休克等嚴(yán)重全身性過(guò)敏反應(yīng)。 空白對(duì)照組及藥物試驗(yàn)組的致敏率均為0。

4 結(jié)論

皮膚過(guò)敏性試驗(yàn)是指經(jīng)皮膚給受試物后，產(chǎn)生免疫學(xué)傳遞的皮膚反應(yīng)。 按抗原與抗體或細(xì)胞反應(yīng)的方式和補(bǔ)體是否參加等，將過(guò)敏反應(yīng)分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ四型。 其中Ⅰ型過(guò)敏反應(yīng)是了解得最多的一種過(guò)敏反應(yīng)，目前采用的過(guò)敏試驗(yàn)方法多數(shù)是根據(jù)Ⅰ型過(guò)敏反應(yīng)發(fā)病機(jī)制的不同環(huán)節(jié)而設(shè)計(jì)建立的[7]。 試驗(yàn)中主要觀察動(dòng)物的皮膚初始接觸受試物后， 再進(jìn)行受試物的激發(fā)接觸，觀察是否產(chǎn)生全身或局部過(guò)敏反應(yīng)。

本文根據(jù)《中藥、天然藥物免疫毒性（過(guò)敏性、光過(guò)敏反應(yīng)）研究的技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求，采取主動(dòng)皮膚過(guò)敏試驗(yàn)方法，在經(jīng)過(guò)三次的致敏反應(yīng)后，最后進(jìn)行激發(fā)反應(yīng)，結(jié)果顯示陽(yáng)性對(duì)照組出現(xiàn)紅斑及水腫的過(guò)敏癥狀，表明試驗(yàn)所采用的試劑及方法符合要求；而空白對(duì)照組和藥物試驗(yàn)組未出現(xiàn)紅斑和水腫等過(guò)敏反應(yīng)癥狀。 本試驗(yàn)結(jié)果表明桉油栓不引起皮膚接觸性變態(tài)反應(yīng)。