吳冠儀 何綠苑 林文波 黃沆 趙晨充

慢性阻塞性肺?。–OPD）是一種具有氣流阻塞特征的慢性支氣管炎和（或）肺氣腫，可進(jìn)一步發(fā)展為肺心病和呼吸衰竭，與氣道和肺臟對(duì)有毒顆?；驓怏w的慢性炎性反應(yīng)增強(qiáng)有關(guān)?，F(xiàn)代越來(lái)越多的研究發(fā)現(xiàn)COPD的慢性炎癥反應(yīng)與腸道密切相關(guān)，存在“肺-腸”軸，其中腸道菌群起到重要作用，具體機(jī)制尚不清楚［1］。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為“肺與大腸相表里”，肺病包括COPD多表現(xiàn)胃腸道癥狀，如便秘、納差等，且自古以來(lái)中醫(yī)大家多從脾胃、大腸治療多種肺部，均取得較好療效?，F(xiàn)代相關(guān)研究也發(fā)現(xiàn)肺與大腸之間存在功能相關(guān)，其中主要機(jī)制是其腸道菌群的改變［2］。本院長(zhǎng)期使用院內(nèi)保肺湯治療COPD患者，取得良好療效［3］，但其作用機(jī)制仍不明確。因此本研究將檢測(cè)保肺湯治療COPD患者前后腸道菌群及相關(guān)炎癥指標(biāo)的變化，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2017年1月至6月門(mén)診或住院符合COPD 穩(wěn)定期診斷的患者60例，隨機(jī)均分為治療組與對(duì)照組。其中男38例，女22例，平均年齡63歲。診斷標(biāo)準(zhǔn)：COPD疾病診斷按照中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸分會(huì)制定的《慢性阻塞性肺疾病的診治指南》 標(biāo)準(zhǔn)，選擇穩(wěn)定期診斷標(biāo)準(zhǔn)［4］。患者中醫(yī)證型選取辨證屬于肺脾虛證，主要臨床表型為：咳嗽，咯痰，喘息，短促無(wú)力，語(yǔ)音低微，自汗心悸，面色晄白，神疲乏力，食少便溏，舌淡苔少，脈弱。

1.2 治療方法及樣本留取 保肺湯主要組成：黨參、黃芪、茯苓各15g，丹參、赤芍各20g，地龍、白術(shù)、浙貝、半夏、款冬花、杏仁各10g。治療組患者在戒煙、氧療、利尿、擴(kuò)血管等西藥應(yīng)用基礎(chǔ)治療上，給予保肺湯1劑/d，分 2次服，療程1個(gè)月。對(duì)照組則只給予戒煙、 氧療、利尿、擴(kuò)血管等西藥應(yīng)用基礎(chǔ)治療，療程1個(gè)月。兩組分別在干預(yù)前后留取患者新鮮糞便、血清置于-80℃低溫冰箱儲(chǔ)存。

1.3 觀察指標(biāo) （1）肺功能及炎癥指標(biāo)檢測(cè)：采用肺功能儀檢測(cè)各組干預(yù)前后的FEV1%和FEV1/FVC比值，各組干預(yù)前后患者血清分別采用ELISA法檢測(cè)CRP及TNF-α。（2）腸道菌群qPCR絕對(duì)定量：各腸道菌株引物參考相關(guān)文獻(xiàn)［5］，引物序列具體見(jiàn)表1，由華大基因公司合成引物序列，建立腸桿菌、腸球菌、乳桿菌、雙歧桿菌和總菌的基因標(biāo)準(zhǔn)品及構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。收集各組干預(yù)前后患者的糞便提取其糞便DNA組，紫外分光光度計(jì)測(cè)定DNA濃度及純度，且將各樣本DNA稀釋到相同濃度備用。qPCR絕對(duì)定量采用20μl反應(yīng)體系：樣本DNA模板/標(biāo)準(zhǔn)品DNA模板1μl，上、下游引物各1μl，滅菌蒸餾水7μl，SYBR Green SuperMix 10μl，稍震蕩混勻且稍離心后進(jìn)行real-time qPCR程序。qPCR擴(kuò)增條件為：95℃預(yù)變性3min，55℃15s，進(jìn)行40個(gè)循環(huán)，每個(gè)樣本重復(fù)檢測(cè)3次。數(shù)據(jù)由qPCR儀自帶軟件分析完成，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算擴(kuò)增效率E在90%～105%之間進(jìn)行質(zhì)控，且根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線線性方程得到各樣本的拷貝數(shù)。

表1 引物序列

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS .18.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以（x±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 治療前后肺功能、CRP及TNF-α變化 見(jiàn)表2。

表2 治療前后肺功能、CRP及TNF-α變化（x±s）

2.2 治療前后腸道菌群改變情況 見(jiàn)表3。

表3 治療前后腸道菌群改變情況［log10拷貝數(shù)/g糞便，（x±s）］

3 討論

腸道菌群是遺忘的人體的巨大器官，腸道菌群在人體代謝、免疫、營(yíng)養(yǎng)等方面發(fā)揮重要作用。消化道菌群構(gòu)成和功能的改變可通過(guò)共同黏膜免疫系統(tǒng)影響呼吸道，而呼吸道菌群紊亂也通過(guò)免疫調(diào)節(jié)影響消化道，這種腸道和肺部相互影響的作用稱(chēng)為肺－腸軸（Gut-lung axis）［1］。腸肺軸理論表明健康的腸道菌群有利于肺部健康。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)COPD患者與健康對(duì)照組比較，其腸黏膜通透性顯著增加，發(fā)生潰瘍性結(jié)腸炎和克羅恩病的幾率高出3倍［6］。且相關(guān)研究證明腸道菌群紊亂在敗血癥的發(fā)病中起關(guān)鍵作用，肺泡炎癥反應(yīng)與肺內(nèi)微生物群發(fā)生改變有關(guān)，而肺內(nèi)微生物群與腸道菌群可互相轉(zhuǎn)變、遷移，TNF-α是調(diào)節(jié)肺部菌群穩(wěn)態(tài)的重要中間物質(zhì)［7］。因此，通過(guò)調(diào)節(jié)腸道菌群從而改善肺部慢性炎癥成為改善COPD的一個(gè)重要新策略。本研究經(jīng)保肺湯治療后，相較于對(duì)照組及其治療前，COPD患者慢性炎癥指標(biāo)CRP、TNF-α水平明顯降低。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為“肺與大腸相表里”，現(xiàn)代研究通過(guò)肺腸軸理論解釋?zhuān)l(fā)現(xiàn)在肺病狀態(tài)下，腸道的需氧菌如大腸桿菌、真菌顯著增多，厭氧菌如類(lèi)桿菌和雙歧桿菌顯著減少［8］。本資料結(jié)果顯示，在COPD狀態(tài)下雙歧桿菌減少，腸桿菌增加，而通過(guò)保肺湯治療后，明顯降低了腸桿菌、腸球菌數(shù)量，增加了雙歧桿菌數(shù)量?？梢?jiàn)保肺湯可能是通過(guò)調(diào)節(jié)腸道菌群，降低了慢性炎癥，從而改善COPD。