郝晨光 王冬梅 李軍濤 張秀霞 冼健安

摘?要：整理了前人研究結果，重點介紹中草藥、糖類，以及其它物質作為飼料添加劑，對養(yǎng)殖蝦類免疫機能的提升以及抗WSSV的影響效果，并加以分析。

關鍵詞：克氏原螯蝦（Procambarus clarkii）;飼料添加劑;抗病力;WSSV

我國水產養(yǎng)殖業(yè)產業(yè)規(guī)模巨大，其中蝦類養(yǎng)殖方興未艾，主要養(yǎng)殖種類有克氏原螯蝦（Procambarus clarkii）、南美白對蝦（Penaeus vannamei）、中國對蝦（Penaeus chinensis）等，蝦類味道鮮美，且營養(yǎng)價值高，深受廣大群眾喜愛。隨著養(yǎng)殖規(guī)模的擴大，蝦類養(yǎng)殖業(yè)頻受WSSV的影響而大幅減產，WSSV作為一種病毒病目前尚無良好的治療方法，只能通過預防來加以控制。蝦類作為甲殼類動物，沒有特異性免疫，那么使用飼料添加劑來提高蝦類的非特異性免疫，進而提升其抗病力是防病的重要途徑。

1?中草藥

中草藥種類豐富，材料易得，大多取自天然生長的植物，不易形成抗藥性，藥殘少，毒副作用極小，藥性溫和，且在人體以及其他動物體中有著較為成熟的經驗，在水產行業(yè)當中作為飼料添加劑有著廣闊的前景。

張磊在飼料中添加了加拿大一枝黃花、苦參、黃柏水提物，添加比例為2%，發(fā)現(xiàn)以上三種物質均能提高克氏原螯蝦非特異性免疫[1]。丁建英等在飼料中添加含有金銀花、黃芪的復方中草藥，添加比例為1%，發(fā)現(xiàn)克氏原螯蝦的非特異性免疫得到了顯著提高[2]。郝忱等在飼料中添加了中草藥復合添加劑（0.3%大黃+0.3%淫羊藿+0.2%黃芪+0.2%板藍根），發(fā)現(xiàn)克氏原螯蝦的非特異性免疫得到提高，用WSSV攻毒后，成活率比對照組提高了18.75%[3]。洪徐鵬等建議在飼料中添加0.40% ～0.80%的黃芪多糖，能夠顯著促進克氏原螯蝦的非特異性免疫以及生長[4]。此外，在南美白對蝦的研究中，湯菊芬等認為，含有金銀花、板藍根、杜仲、五味子、黃芪、山楂、生姜、金銀花、連翹、柴胡、甘草等中草藥的復合益生菌制劑，可以提高南美白對蝦的多種非特異性免疫指標[5]。江湧等認為，添加1.5 g/kg的中草藥添加劑（主要含有黃芪、甘草、白術等補益類藥物），能夠提高南美白對蝦的免疫力[6]。陳輝輝等在飼料中添加了含有葛根、黃連、金銀花、板藍根、黃芪、甘草、柴胡、當歸等物質的復方中草藥，發(fā)現(xiàn)能提高對蝦免疫和抗WSSV的能力，且添加比例以1.2%和0.8%效果最佳[7]。景亞運[8]用含有HD-3中草藥的基礎飼料投喂南美白對蝦10 d，發(fā)現(xiàn)其顯著提升了南美白對蝦免疫因子活性。進行WSSV攻毒后，服用一段時間中草藥之后，對蝦各項免疫因子的活力更加持久。此研究結果在高溫時更顯著。黃永春等研究了茯苓、黃芪、板藍根、柴胡和甘草，發(fā)現(xiàn)以上中草藥都能促進南美白對蝦的生長與抗病力，其中柴胡的抗WSSV效果最好;在體外，番石榴葉水提取物對WSSV具有殺滅作用[9]。

通過以上研究不難發(fā)現(xiàn)，相當多的中草藥對于提高水生動物的免疫力、抗病力有著顯著作用。其中出現(xiàn)最多的中草藥就是黃芪、板藍根、金銀花，中醫(yī)認為板藍根和金銀花都有清熱解毒的功效，黃芪具有清熱燥濕的功效，三者都屬于補益類中藥，在臨床中，能提高人的免疫力。有關藥理作用的深入研究目前還有待開展，今后再進行相類似的實驗，綜合考慮成本因素，可選取其它補益類中藥，如玄參、夏枯草、地骨皮、決明子等。除此之外，西藥中抗病毒的藥物也應該嘗試，比如病毒唑、鹽酸金剛乙胺、病毒靈等。

2?糖類

糖類在飼料中作為能源物質，相對廉價，蝦類對于糖類的利用效率也較低，但是在配合飼料中合理的使用糖類能夠有效降低生產成本，尤其是幾種特殊的糖類作為飼料添加劑運用到蝦類養(yǎng)殖中，對于提高蝦類的抗病力，有著很好的效果。

朱斐在飼料中分別添加殼聚糖、甲殼素、葡聚糖，發(fā)現(xiàn)三者對克氏原螯蝦的酶活力的提高均有效果，其中葡萄糖效果最好，殼聚糖次之，甲殼素再次[10]。樊冰心在飼料中添加0.75%的低分子量殼聚糖，發(fā)現(xiàn)相比對照組，克氏原螯蝦的諸多免疫指標得以提升，機體的抗氧化能力提高了[11]。丁德明認為，肽聚糖、黃芪多糖、酵母多糖、北蟲草多糖、殼聚糖、海藻多糖等，均具有明顯激活補體系統(tǒng)的作用。但是，投喂免疫多糖時間過長，會造成克氏原螯蝦的“免疫疲勞”，反而降低其免疫力[12]。楊維維在飼料中添加果寡糖后，克氏原螯蝦的生長性能、免疫功能、肝臟抗氧化能力和腸道消化能力得到了顯著提升，添加比例為0.5%[13]。洪徐鵬等，先對克氏原螯蝦進行WSSV人工攻毒，然后在飼料中添加0.8%的黃芪多糖，發(fā)現(xiàn)實驗組比只投喂基礎飼料的對照組存活率高26.67%[14]。陽會軍等在飼料中添加含有18%β-1，3-葡聚糖的“特免王”，發(fā)現(xiàn)能夠提高斑節(jié)對蝦的抗WSSV感染能力，添加比例為2.8 g/kg[15]。劉群芳等研究發(fā)現(xiàn)，β-1，3-葡聚糖與硒聯(lián)合或者β-1，3-葡聚糖、硒、維生素E聯(lián)合添加進飼料均能顯著提高南美白對蝦的非特異性免疫，抗氧化能力和抗病力[16]。李凱年對斑節(jié)對蝦投喂含有β-1，3-葡聚糖2 g/kg的飼料，對斑節(jié)對蝦進行WSSV人工攻毒后，發(fā)現(xiàn)實驗組的死亡率比未投喂葡聚糖的對照組得到了顯著下降[17]。王秀華等與陳國福等，都在南美白對蝦的飼料中添加1%的肽聚糖，結果表明其抗WSSV感染的能力得到了顯著的提升[18-19]。汪小鋒認為，β—葡聚糖和脂多糖都能提高酚氧化酶的產量，從而提高對蝦自身免疫力，顯著抑制WSSV[20]。

糖類在飼料中居于較為次要的位置，但諸多研究者發(fā)現(xiàn)，適當添加糖類，能夠促進水生生物的生長。在作為飼料添加劑時，絕大多數(shù)糖類能夠增強水生生物的免疫力，具體作用機理有待深入研究。根據(jù)前人研究推測，糖類是通過作用于蝦類消化道，進而提升其免疫力。大部分糖類能夠改善消化道菌落狀態(tài)，提升免疫因子活性。李文婷推測，WSSV最先侵染的器官便是消化器官[21]，丁正峰認為WSSV對克氏原螯蝦消化系統(tǒng)的胃、中腸、和肝胰腺等具有很強的組織嗜性[22]。糖類能夠保護消化器官，這極有可能就是在飼料中添加糖類后，感染WSSV的蝦類死亡率降低的原因。此外，如朱衛(wèi)衛(wèi)等對南美白對蝦注射溶藻弧菌肽聚糖，注射濃度為0.15 mg/ml，進行WSSV人工攻毒后與對照組相比，保護率可達56.67%[23]。李夢竹在對日本囊對蝦WSSV攻毒前注射50 μg/g的CK-70B3（九州蟲草子實體多糖）后，也得到了類似結論[24]。此外，劉樹青通過給中國對蝦注射海藻多糖和北蟲草多糖，發(fā)現(xiàn)二者均能顯著提高中國對蝦的血細胞吞噬能力等免疫功能[25]。

此外還有把南美白對蝦幼體通過在糖類水溶液中浸浴，來提高抗WSSV侵染的報道[26]。由此可見，糖類在蝦類抗WSSV中，無論是投喂、注射、浸泡，都能起到提高免疫力，預防WSSV的作用。

3?其它

朱斐研究發(fā)現(xiàn)[10]，經過BIW（WSSV制劑）投喂后，克氏原螯蝦類產生了類似于特異性免疫的反應，在進行WSSV攻毒后，存活率顯著提升。朱凜等在克氏原螯蝦幼蝦的飼料里分別添加4%烏賊膏和1%大蒜素后，發(fā)現(xiàn)其在WSSV攻毒實驗中的存活率顯著高于投喂基礎飼料的對照組[27]。何金星等在飼料中添加4%的螺旋藻，發(fā)現(xiàn)克氏原螯蝦的免疫指標得到了顯著提升。楊維維在飼料中分別添加50～75 mg/kg大黃素和1%～2%的海帶粉后發(fā)現(xiàn)，克氏原螯蝦的免疫功能和肝臟抗氧化以及腸道消化能力得到了顯著提升[28]。李旭鵬發(fā)現(xiàn)，與配合飼料和鮮蛤肉相比，喂食活鹵蟲更能增強中國明對蝦抗WSSV的能力[29]，這與胡賢德在斑節(jié)對蝦研究中的結論類似[30]。肖廣俠對中國對蝦分別投喂單胞藻、配合飼料、輪蟲和鹵蟲幼體，在進行WSSV人工攻毒后，死亡率都在90%以上，差異不顯著;此外，輪蟲和鹵蟲都會攜帶有WSSV病毒，可能是造成對蝦白斑病暴發(fā)的傳染源[31]，這與李旭鵬和胡賢德關于鹵蟲作為餌料投喂后的結論完全相反，究竟是品種差異還是實驗操作問題，還需要進行進一步驗證。耿小雪等在飼料中添加重組Fortilin蛋白投喂南美白對蝦后，發(fā)現(xiàn)南美白對蝦的免疫力和抗WSSV感染的能力顯著增強，其產生的反應與朱斐對克氏原螯蝦實驗中的結果相類似[32]。孫艷等對南美白對蝦分別投喂芽孢桿菌、滅活溶藻弧菌、溶藻弧菌及芽孢桿菌后，南美白對蝦抵抗WSSV感染的能力都得到了顯著提升， 相對保護率分別為33.7%、31.46%、41.6%，堅強芽孢桿菌活菌與溶藻弧菌配合使用也能達到類似效果[33-34]。劉文亮等在飼料中添加芽孢桿菌后對南美白對蝦進行投喂，認為其并不能顯著提高南美白對蝦WSSV攻毒的實驗組的成活率[35-36]，這與孫艷的研究結果又有很大差異，那么說明芽孢桿菌作為飼料添加劑是否能幫助南美白對蝦有效抵抗WSSV的侵染，有待研究?？赡芏咴趯δ厦腊讓ξr進行攻毒時，WSSV的含量有差別，這會影響到最終實驗結果。孫振對南美白對蝦投喂含有河流弧菌、產氣弧菌、泰安郡鹽單胞菌、脫氮胞曼氏菌等的生物絮團發(fā)現(xiàn)南美白對蝦的免疫力得到了顯著提升[37]。張玲在飼料中添加益生菌B12（耐受過WSSV中國明對蝦腸道中的一種嗜鹽性單胞菌），能夠提高中國明對蝦對白斑病毒的抗病力[38]。蘭萍等、職通瑞都發(fā)現(xiàn)在飼料中添加美人魚發(fā)光桿菌之后，能顯著提高南美白對蝦的抗病毒感染能力，以0.1%的比例添加最為合適[39-40]。鄧康裕等研究認為，在飼料中添加PHB（聚β—羥基丁酸酯），能提高南美白對蝦對于WSSV的抵抗力，延長平均存活時間，最佳添加濃度為1%[41]。劉家舉研究表明，鮮活藍蛤、芽孢桿菌能一定程度上提高南美白對蝦的免疫水平，降低WSSV的增殖速率[42]。

在蝦類養(yǎng)殖中，有著諸多可以作為飼料添加劑的物質，以上所舉例子當中，有中藥提取物、水生動物、水生植物、益生菌、蛋白質等，可見能夠提高蝦類抗病力的飼料添加劑種類豐富，來源廣泛。王曉琳等、王春迪等分別在水體中添加溶藻弧菌、蠟樣芽胞桿菌以提高南美白對蝦免疫力來抗WSSV[43-44]。還有通過在水體里添加益生菌來提高養(yǎng)殖蝦類免疫力的相關實驗。這提醒我們，在選擇飼料添加劑時，思路要開闊，要勇于試驗。

4?結束語

在蝦類WSSV的防治中，關于飼料添加劑的研究比較廣泛，但是缺乏較為深入的研究，一些實驗的可重復性不高，對于同一種物質作為飼料添加劑的結果不盡相同甚至完全相反。此外，尤其是在作用機理與分子層面對病毒增殖情況的分析方面可參考文獻還較少，大多數(shù)研究停留在對死亡率、免疫因子等表象的研究。

參考文獻：

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