王建蘭,袁彥玲,鄭 水,莫麗濱,張玉梅,張煥芬

(1.云南省人口和計(jì)劃生育科學(xué)技術(shù)研究所 生殖醫(yī)學(xué)治療中心，云南 昆明 650021；2.云南省德宏州梁河縣婦幼保健計(jì)劃生育服務(wù)中心, 云南 德宏 679200)

雌激素受體分為α和β受體2個(gè)亞型.雌激素受體基因的多態(tài)性在不同種族間存在差異.雌激素受體的基因多態(tài)性被證實(shí)與多種疾病存在關(guān)聯(lián).

雌激素α受體和育齡期生育相關(guān)疾病如：妊娠期糖尿病[1]、產(chǎn)后抑郁[2]、妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積綜合癥[3]、圍生期抑郁[4]、助孕過(guò)程中卵巢反應(yīng)性[5]、排卵功能障礙[6]等相關(guān)聯(lián).

雌激素受體與育齡期某些常見(jiàn)自身免疫疾病，如Graves病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等相關(guān)聯(lián)；并被證實(shí)與女性退性行疾病膝骨關(guān)節(jié)炎、骨質(zhì)疏松癥、女性盆底功能障礙性疾病發(fā)生相關(guān)聯(lián).

本研究檢測(cè)分析了云南梁河傣族育齡婦女ERα基因 rs2234693(PvuⅡ)、rs9340799(XbaⅠ) 位點(diǎn)的基因型頻率和等位基因頻率的分布特征，通過(guò)分析梁河傣族育齡人群ERα基因多態(tài)性的分布特征及與其他種族不同，以期為進(jìn)一步研究該人群ERα基因多態(tài)性與女性育齡期疾病及女性退性行疾病的相關(guān)性提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù).

1 資料與方法

1.1 對(duì)象

來(lái)自云南梁河縣勐養(yǎng)、平山、小廠、大廠、河西、遮島6個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)的自愿參加該項(xiàng)研究的164位傣族育齡婦女.所有研究對(duì)象在抽血前均簽署知情同意書(shū).她們最大年齡33歲，最小年齡16歲，平均年齡(25.27±3.29)歲.

1.2 方法

抽取所有調(diào)查檢測(cè)對(duì)象靜脈血 5 mL.采用血液基因組 DNA 提取試劑盒嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)提取DNA.將DNA溶液置于4 ℃保存?zhèn)溆?引物序列為:正向:5′-CTGCCACCCTATCTGTATCTTTTCCTATTCTCC-3′,反向: 5′-TCTTTCTCTGCCACCCTGGCGTCGATTATCTGA-3′. PCR 反應(yīng)體系包括10 μL TakaraTaqMix，0. 5 μL 正向引物，0. 5 μL 反向引物，2 μL DNA 模板，用 ddH2O 補(bǔ)足至20 μL.各檢測(cè)基因的PCR條件均為: 94 ℃預(yù)變性4 min，然后 94 ℃ 30 s，56 ℃ 30 s，72 ℃ 45 s，共 30 個(gè)循環(huán)，最后 72 ℃延伸 5 min. PCR擴(kuò)增產(chǎn)物由限制性內(nèi)切酶于37 ℃電熱恒溫水浴箱中進(jìn)行酶切反應(yīng).酶切反應(yīng)結(jié)束后應(yīng)用1%瓊脂糖凝膠電泳40 min，電泳完畢后置于紫外線凝膠分析系統(tǒng)下分析其基因型.

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

所有統(tǒng)計(jì)分析均在 SPSS 18.0 軟件包上完成.基因型頻率和等位基因頻率分布使用Hardy-Weinberg平衡來(lái)檢驗(yàn)是否達(dá)到遺傳平衡，判斷是否具有人群代表性.不同種族間ER基因型頻率和等位基因頻率分布用χ2檢驗(yàn), 以P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.

2 結(jié)果

2．1 位點(diǎn)檢測(cè)結(jié)果的Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)

對(duì)164例云南梁河傣族育齡女性樣本rs2234693(PvuⅡ)、rs9340799(XbaⅠ) 位點(diǎn)檢測(cè)結(jié)果經(jīng)Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)，rs2234693(PvuⅡ) H - W檢驗(yàn)χ2值為0.865，P值為0.649； rs9340799(XbaⅠ) H - W檢驗(yàn)χ2值為5.51，P值為0.06.表明位點(diǎn)基因型頻率分布的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，rs2234693(PvuⅡ)、rs9340799(XbaⅠ)位點(diǎn)基因型和等位基因頻率分布均符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律，達(dá)到遺傳平衡，具有群體代表性.

2．2 用直接計(jì)數(shù)法計(jì)算出基因型及等位基因的檢出頻率

ERα基因rs2234693(PvuⅡ)位點(diǎn)、rs9340799(XbaⅠ) 位點(diǎn)經(jīng)酶切后分別有 3 種基因型：CT、TT、CC和AA、、AG、GG.在云南梁河傣族育齡女性人群中，ERα基因rs2234693(PvuⅡ)位點(diǎn)基因型以CT最多(70例，42.7%)，其次為T(mén)T(66例，40.2%)，CC最少(28例，17.1%)；其C型等位基因頻率為38.4%，T型等位基因頻率為61.6%(見(jiàn)表1).rs9340799(XbaⅠ) 位點(diǎn)基因型以AA最多(109，66.5%)，其次為AG(40例，24.4%)，GG最少(15例，9.1%)；其A型等位基因頻率為78.7%，G型等位基因頻率為21.3%(見(jiàn)表2).

表1 云南梁河傣族育齡婦女ERα 基因 rs2234693(PvuⅡ)多態(tài)性分布頻率與不同種族人群的結(jié)果比較

表2 云南梁河傣族育齡婦女ERα基因 rs9340799A/G 多態(tài)性分布頻率與不同種族人群的結(jié)果比較

3 討論

傣族為云南特有的少數(shù)民族,其育齡婦女人群雌激素受體基因多態(tài)性少見(jiàn)報(bào)道.本研究檢測(cè)云南梁河傣族育齡婦女人群的ERα基因 rs2234693(PvuⅡ)、rs9340799(XbaⅠ) 位點(diǎn)的基因型頻率和等位基因頻率的分布特征，分析該人群ERα基因多態(tài)性的分布特征及與其他種族差異，以期為進(jìn)一步研究該人群ERα基因多態(tài)性與女性育齡期疾病及女性退性行疾病相關(guān)性提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，亦為提升少數(shù)民族婦女生殖健康的相關(guān)工作提供借鑒.

本研究通過(guò)對(duì)164例云南梁河傣族育齡婦女ERα基因rs2234693(PvuⅡ)、rs9340799(XbaⅠ) 位點(diǎn)多態(tài)性的檢測(cè)，并把檢測(cè)結(jié)果與通過(guò)查閱文獻(xiàn)收集到其他民族女性和其他人群的ERα基因多態(tài)性分布頻率進(jìn)行比較有以下發(fā)現(xiàn)：

rs2234693位點(diǎn)基因型分布頻率與云南白族育齡婦女[7]、新疆墨玉維吾爾族婦女[8]、寧夏回族婦女[9]、寧波漢族婦女[10]比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，基因型分布頻率均為以CT型最多，CC型最少；與巴巴多斯的加勒比海人群、非洲人群、英格蘭和蘇格蘭人群比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),這些地區(qū)人群基因型分布頻率均以CT型最多、TT型最少[11]；與中國(guó)南方漢族和中國(guó)傣族、美國(guó)人群、東亞人群、南亞人群比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)[11](表1).

ERα基因rs2234693位點(diǎn)等位基因頻率與云南白族育齡婦女[7]、新疆墨玉維吾爾族婦女[8]、寧夏回族婦女[9]、寧波漢族婦女[10]比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，都是T型等位基因出現(xiàn)頻率較高(P>0.05) ;與非洲人群、巴巴多斯的加勒比海人群、英格蘭和蘇格蘭人群比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，這些地區(qū)人群都是C型等位基因出現(xiàn)頻率較高[11]；與中國(guó)南方漢族和中國(guó)傣族、美國(guó)人群、東亞人群、南亞人群比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)[11](表1).

云南梁河傣族育齡婦女ERα基因rs9340799位點(diǎn)基因型分布頻率與新疆墨玉維吾爾族婦女[8]、寧波漢族婦女[10]比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與云南白族育齡婦女[7]、寧夏回族婦女[9]比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);與中國(guó)南方漢族、非洲人群、美國(guó)人群、巴巴多斯的加勒比海人群、南亞人群、英格蘭和蘇格蘭人群比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)[12];與東亞人群、中國(guó)傣族比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)[12](表2).

云南梁河傣族育齡婦女ERα基因rs9340799位點(diǎn)等位基因頻率與文獻(xiàn)報(bào)道的新疆墨玉維吾爾族婦女[8]比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，與云南白族育齡婦女[7]、寧夏回族婦女[9]、寧波漢族婦女[10]比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05 );與美國(guó)人群、巴巴多斯的加勒比海人群、南亞人群、英格蘭和蘇格蘭人群比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)[11]；與中國(guó)南方漢族人群、中國(guó)傣族、非洲人群、東亞人群比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)[12](表2).

本研究屬首次對(duì)梁河傣族育齡婦女的ER基因多態(tài)性進(jìn)行研究，由于該地區(qū)其他少數(shù)民族育齡婦女人群和該民族其他地區(qū)育齡婦女人群ERα基因rs2234693(PvuⅡ)、rs9340799(XbaⅠ) 位點(diǎn)多態(tài)性未見(jiàn)報(bào)道，因此本研究得出的ERα基因rs2234693(PvuⅡ)、rs9340799(XbaⅠ) 位點(diǎn)多態(tài)性結(jié)果無(wú)法與不同地區(qū)同一民族的育齡婦女和同一地區(qū)不同民族的育齡婦女結(jié)果相比較.

4 結(jié)語(yǔ)

隨著社會(huì)的不斷發(fā)展，人民生活水平在不斷提高，優(yōu)生優(yōu)育及生殖健康的理念越來(lái)越被廣泛認(rèn)可和接受.但由于相關(guān)基礎(chǔ)研究工作的相對(duì)滯后，還不能很好的支持和指導(dǎo)這些科學(xué)理念的推廣和貫徹.因此，相關(guān)基礎(chǔ)研究是必須且應(yīng)加大力度的，尤其針對(duì)云南落后地區(qū)的少數(shù)民族的相關(guān)研究，更是必要和迫切.云南梁河傣族育齡婦女ERα基因的相關(guān)研究工作，是本研究小組針對(duì)云南特色世居少數(shù)民族育齡婦女進(jìn)行的系列基礎(chǔ)調(diào)查研究工作之一，目的是對(duì)云南落后地區(qū)少數(shù)民族育齡婦女進(jìn)行相關(guān)生殖資料的研究積累，希望能對(duì)相關(guān)科學(xué)理念的推廣和貫徹有一定的支持和幫助.