馮立志，何偉平，葉小衛(wèi)，詹少鋒，黃慧婷，劉小虹，

1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，廣東 廣州 510405；2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)，廣東 廣州 510405

目前許多化療藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞缺乏靶向性，抑制或殺死腫瘤細(xì)胞的同時(shí)累及正常細(xì)胞，從而引起嚴(yán)重的副作用，其中骨髓抑制是化療后嚴(yán)重副作用之一，導(dǎo)致白細(xì)胞減少，進(jìn)一步出現(xiàn)免疫力下降，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。現(xiàn)代臨床及藥理研究提示，中醫(yī)藥可減輕化療后骨髓抑制，改善臨床癥狀，提高化療患者的生活質(zhì)量[1-3]。在前期臨床觀(guān)察中發(fā)現(xiàn)健脾補(bǔ)血方能夠有效防治化療患者白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、血小板下降，在實(shí)驗(yàn)研究的基礎(chǔ)上，我們驗(yàn)證了健脾補(bǔ)血方能下調(diào)肺癌小鼠化療后血清紅細(xì)胞生成素（EPO）濃度，同時(shí)上調(diào)血清血小板生成素（TPO）、重組集落刺激因子（GM-CSF）濃度，動(dòng)態(tài)調(diào)節(jié)機(jī)體化療后血清EPO、TPO、GM-CSF濃度的失衡狀態(tài)，從而促進(jìn)機(jī)體造血功能的恢復(fù)[4]。因此，本實(shí)驗(yàn)旨在通過(guò)研究健脾補(bǔ)血方對(duì)C57/BL6小鼠化療后血液中紅細(xì)胞（Red Blood Cell，RBC）、白細(xì)胞（White Blood Cell，WBC）、血小板（Platelet，PLT）數(shù)量的影響，以期觀(guān)察健脾補(bǔ)血方對(duì)C57/BL6小鼠血液細(xì)胞的影響，為臨床優(yōu)化選用健脾補(bǔ)血方治療骨髓抑制提供一定的理論支持和客觀(guān)依據(jù)。

1 臨床研究

1.1 研究對(duì)象

1.1.1 一般資料

廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院腫瘤中心、廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院腫瘤科，2015年1月份至2016年5月份收治的非小細(xì)胞肺癌化療患者60例。

1.1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)

符合《中國(guó)常見(jiàn)惡性腫瘤診治規(guī)范》中原發(fā)性肺癌診斷標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)組織學(xué)或細(xì)胞學(xué)確診的非小細(xì)胞肺癌患者；基因檢測(cè)無(wú)突變者，或拒絕行基因檢測(cè)者，因各種原因拒服靶向藥物者；年齡為18-75歲；Karnofsky評(píng)分≥60分，預(yù)計(jì)生存期超過(guò)3個(gè)月；各項(xiàng)檢查指標(biāo)符合化療適應(yīng)證，無(wú)嚴(yán)重的心、肝、腎及骨髓功能障礙；化療前24小時(shí)內(nèi)無(wú)明顯惡心嘔吐癥狀及使用止嘔藥物者；病人同意并愿意接受本方案治療、依從性好者。

1.1.3 排除標(biāo)準(zhǔn)

不符合納入標(biāo)準(zhǔn)；合并肝腎、心血管、造血系統(tǒng)等嚴(yán)重原發(fā)性疾病及精神病患者；入組前有明顯消化道反應(yīng)者，無(wú)法服用或拒服中藥湯劑者；入組前24小時(shí)內(nèi)使用造血細(xì)胞集落刺激因子者；妊娠或哺乳期婦女；主要研究者或研究者判斷不適宜該項(xiàng)臨床試驗(yàn)的患者。

1.1.4 脫落標(biāo)準(zhǔn)

出現(xiàn)嚴(yán)重不良事件，根據(jù)醫(yī)生判斷應(yīng)停止試驗(yàn)者；試驗(yàn)過(guò)程中，患者發(fā)生其他嚴(yán)重并發(fā)癥，影響療效評(píng)價(jià)和安全性判斷者；受試者依從性差（試驗(yàn)用藥依從性＜80%）；各種原因的中途破盲病例。

1.2 治療方案

治療組：化療+自擬健脾補(bǔ)血方口服

對(duì)照組：?jiǎn)渭兓?/p>

根據(jù)兼證加減：惡心嘔吐甚者：偏寒者，加旋覆花10 g（包煎）、干姜8 g；偏熱者，加竹茹10 g、黃芩15 g。腹脹便秘者：加枳實(shí)15 g，火麻仁30 g。腹瀉者：加茯苓30 g，肉豆蔻10 g?？人钥┨瞪跽撸浩?，加紫菀15 g，桔梗15 g；偏熱者，加黃芩15 g，魚(yú)腥草30 g。

中藥服法：每日1劑，水煎至200ml，飯后溫服。于化療前1天開(kāi)始，連服21天。

1.3 兩組均采用GP或TP、DP方案化療

化療方案：GP：吉西他濱+順鉑；TP：紫杉醇+順鉑；DP：多西他賽+順鉑

化療藥物用法用量：吉西他濱：1 000 mg/m2，靜脈滴注1天、8天；紫杉醇：175 mg/m2靜脈滴注1天；多西他賽：75 mg/m2靜脈滴注1天；順鉑：30 mg/m2靜脈滴注，每天一次，共3天。

1.4 兩組化療期間均配合一般對(duì)癥治療

1.止嘔：鹽酸昂丹司瓊注射液4 mg IV每天兩次（化療前、后）。

2.護(hù)胃：奧美拉唑鈉40mg靜脈滴注，每日一次。

1.5 造血細(xì)胞集落刺激因子的使用及輸血

當(dāng)中性粒細(xì)胞＜1.0×109/L，予欣粒升（300 μg，皮下注射，隔日一次），當(dāng)中性粒細(xì)胞絕對(duì)值連續(xù)兩次＞10×109/L后停藥。當(dāng)血紅蛋白＜80 g/L，予益比奧（100 00 U，皮下注射，每日一次），當(dāng)血紅蛋白＞80 g/L或紅細(xì)胞壓積＞40%后停藥；當(dāng)血紅蛋白＜80 g/L伴明顯乏力、氣短、心動(dòng)過(guò)速等貧血癥狀時(shí)，應(yīng)予輸注紅細(xì)胞。當(dāng)血小板＜50×109/L，予巨和粒（50 μg/kg，皮下注射，每日一次），當(dāng)血小板＞50×109/L后停藥；當(dāng)血小板＜50×109/L且有出血傾向時(shí)，應(yīng)輸注血小板。

1.6 觀(guān)察指標(biāo)及時(shí)點(diǎn)

《白細(xì)胞減少癥癥狀分級(jí)量化表》：連續(xù)觀(guān)察21天。血分析（WBC、NEU、RBC、HGB、PLT）：化療前1周、第8天、第21天。

1.7 療效評(píng)價(jià)

血分析（WBC、NEU、RBC、HGB、PLT）評(píng)價(jià)參照《WHO臨床試驗(yàn)常見(jiàn)毒副反應(yīng)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)》。

白細(xì)胞：0度≥4.0×109/L，Ⅰ度3.0～3.9×109/L，Ⅱ度2.0～2.9×109/L，Ⅲ度1.0～1.9×109/L，Ⅳ度＜1.0×109/L；粒細(xì)胞：0度≥2.0×109/L，Ⅰ度1.5～1.9×109/L，Ⅱ度1.0～1.4×109/L，Ⅲ度0.5～0.9×109/L，Ⅳ度＜0.5×109/L；血紅蛋白：0度≥110 g/L，Ⅰ度95～109g/L，Ⅱ度80～94 g/L，Ⅲ度65～79 g/L，Ⅳ度＜65 g/L；血小板：0度≥100×109/L，Ⅰ度75～99×109/L，Ⅱ度50～74×109/L，Ⅲ度25～49×109/L，Ⅳ度＜25×109/L。

2 實(shí)驗(yàn)研究

2.1 材料動(dòng)物選用C57/BL6小鼠36只，雌性，體質(zhì)量18～22 g。動(dòng)物購(gòu)自廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，合格證號(hào)：SCXK（粵）2013-0034。

2.2 藥品及試劑環(huán)磷酰胺，江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司；小鼠集落刺激因子，美國(guó)R&D公司；健脾補(bǔ)血方包括五指毛桃30 g，黃芪30 g，黨參20 g，白術(shù)15 g，當(dāng)歸6 g，熟地黃10 g，陳皮10 g，法半夏10 g，廣藿香10 g（后下），生姜6 g，大棗10 g，炙甘草10 g，諸藥相合，具有六君子湯合八珍湯之義，共奏健脾補(bǔ)血之效。飲片購(gòu)自廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，將健脾補(bǔ)血方飲片加10倍的雙蒸水浸泡30 min后，煮至沸騰后加入廣藿香，再煮30 min，過(guò)濾，提取濾液A；濾渣再加5倍的雙蒸水，煮沸騰后再煮30 min，過(guò)濾，提取濾液B，棄去殘?jiān)?。后將濾液A、B混合，過(guò)濾，以100℃水浴加熱濾液，并濃縮至2.5 g/mL，1.25 g/mL，0.625 g/mL三個(gè)濃度，分裝，置于4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

2.3 儀器全自動(dòng)血液分析儀，型號(hào)：KX-21，SYSMEX公司。

2.4 方法

2.4.1 骨髓抑制模型的建立及動(dòng)物分組 將C57/BL6小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)7天后，隨機(jī)分成正常組、模型組、陽(yáng)性藥物組、健脾補(bǔ)血方高、中、低劑量組，每組6只。除正常組外，其余各組均腹腔注射環(huán)磷酰胺（200 mg/kg）[5]，復(fù)制小鼠骨髓抑制模型。

2.4.2 給藥 完成化療后給藥，健脾補(bǔ)血方高、中、低劑量組分別給予健脾補(bǔ)血方（25 g/kg，12.5 g/kg，6.25 g/kg，分別相當(dāng)于健脾補(bǔ)血方生藥量）。以上中藥劑量根據(jù)每日成人用量換算得出[6]，12.5 g/kg為中劑量組，相當(dāng)于成人臨床的等效劑量，25 g/kg為高劑量組，6.25 g/kg為低劑量組。給藥體積為10 mL/kg，連續(xù)7 d。陽(yáng)性藥物組予皮下注射小鼠集落刺激因子0.1 ml，正常組與模型組給予等容積的生理鹽水，禁食24 h后采血檢測(cè)。

2.4.3 指標(biāo)檢測(cè) 眼眶取血約0.5 ml，收集于肝素管中，-4℃保存?zhèn)錅y(cè)。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件，多組間比較用單因素方差分析方法，兩兩比較用LSD檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 健脾補(bǔ)血方對(duì)患者白細(xì)胞減少癥狀的影響

臨床上，白細(xì)胞下降多發(fā)生于化療后第7～14天，多數(shù)于第7～10天后開(kāi)始回升，至第21天基本恢復(fù)正常水平。本研究采用《白細(xì)胞減少癥癥狀分級(jí)量化表》，連續(xù)觀(guān)察患者化療后白細(xì)胞減少癥狀21天，其癥狀積分變化與白細(xì)胞下降趨勢(shì)基本一致（如圖1示）。

結(jié)果如表1、圖1示，D2（化療第1天），兩組積分比較，差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；之后兩組積分逐漸上升，對(duì)照組上升幅度大于治療組（P＜0.05）。D8（化療第7天），兩組積分達(dá)到最高值，對(duì)照組積分明顯高于治療組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）；之后兩組積分逐漸下降，治療組下降幅度大于對(duì)照組（P＜0.05）。至D15（化療第14天），兩組積分比較仍有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）；至D21（化療第20天），患者白細(xì)胞基本恢復(fù)正常，癥狀基本消失，兩組積分比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。

表1 《白細(xì)胞減少癥癥狀分級(jí)量化表》積分的比較（分，±s）Table 1 Comparisons of Scores of Leukopenia Symptom Classification Quantitative Table（Scores，±s）

表1 《白細(xì)胞減少癥癥狀分級(jí)量化表》積分的比較（分，±s）Table 1 Comparisons of Scores of Leukopenia Symptom Classification Quantitative Table（Scores，±s）

注：采用重復(fù)測(cè)量方差分析，比較兩組不同時(shí)點(diǎn)積分變化情況（D2、D8、D15、D21）。結(jié)果示：資料不滿(mǎn)足Mauchly球形檢驗(yàn)，不同時(shí)點(diǎn)積分有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（F=2 758.007，P＜0.05）；治療組及對(duì)照組不同時(shí)點(diǎn)積分均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（F值分別為749.260、3415.352，P＜0.05）；時(shí)間和分組因素存在交互作用，說(shuō)明隨著時(shí)間推移，組間積分變化趨勢(shì)不一致（F=93.380，P＜0.05）。采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，比較同一時(shí)點(diǎn)兩組積分。結(jié)果示：D8、D15兩組積分比較，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（t值分別為13.449、13.456，P＜0.05）；D2、D21兩組積分比較，均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（t值分別為1.499、1.892，P＞0.05）。

組別治療組對(duì)照組F P D2（化療第1天）25.73±3.75 27.30±4.32 1.499 0.139 D8（化療第7天）28.30±3.89 39.10±2.06 13.449 0.000 D15（化療第14天）5.60±4.80 24.37±5.94 13.456 0.000 D21（化療第20天）2.17±1.39 2.77±1.04 1.892 0.064 749.260 3415.352＜0.05＜0.05 t P

白細(xì)胞下降多發(fā)生于化療后第7～14天，故以D8（化療第7天）、D15（化療第14天）作為評(píng)價(jià)時(shí)點(diǎn)，對(duì)兩組《白細(xì)胞減少癥癥狀分級(jí)量化表》中的證候療效進(jìn)行比較。結(jié)果如表2、圖2示，總有效率方面，治療組為96.7%，對(duì)照組為73.3%，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；療效分布方面，兩組差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。

3.2 健脾補(bǔ)血方對(duì)患者血液分析的影響

參照《WHO臨床試驗(yàn)常見(jiàn)毒副反應(yīng)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)》，選擇4個(gè)時(shí)點(diǎn)（治療前、D8、D15、D21），觀(guān)察比較兩組白細(xì)胞（WBC）、中性粒細(xì)胞（NEU）、紅細(xì)胞（RBC）、血紅蛋白（HGB）、血小板（PLT）變化。統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果如下：

表2 《白細(xì)胞減少癥癥狀分級(jí)量化表》療效的比較（n，%）Table 2 Comparisons of the efficacy of the Quantitative Scale of Leukopenia Symptoms（n，%）

圖1 《白細(xì)胞減少癥癥狀分級(jí)量化表》積分變化趨勢(shì)Fig.1 Trend of Integral Change of Leukopenia Symptom Grading Quantitative Table

圖2 《白細(xì)胞減少癥癥狀分級(jí)量化表》療效分布Fig.2 The therapeutic effect distribution of Leukopenia Symptom Grading Quantitative Table

WBC：采用重復(fù)測(cè)量方差分析，比較兩組不同時(shí)點(diǎn)WBC變化情況（治療前、D8、D15、D21）。結(jié)果示：資料服從球形檢驗(yàn)，表明不同時(shí)點(diǎn)WBC變化無(wú)關(guān)聯(lián)關(guān)系；不同時(shí)點(diǎn)WBC有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（F=24.369，P＜0.05）；治療組及對(duì)照組不同時(shí)點(diǎn)WBC均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（F值分別為7.270、19.289，P＜0.05）；時(shí)間和分組因素?zé)o交互作用，說(shuō)明隨著時(shí)間推移，組間變化趨勢(shì)一致（F=2.162，P＜0.05）。采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，比較同一時(shí)點(diǎn)兩組WBC。結(jié)果示：D8、D15兩組WBC比較，均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（t值分別為2.361、2.957，P＜0.05）；治療前、D21兩組WBC比較，均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（t值分別為0.204、0.502，P＞0.05）。

NEU：采用重復(fù)測(cè)量方差分析，比較兩組不同時(shí)點(diǎn)NEU變化情況（治療前、D8、D15、D21）。結(jié)果示：資料服從球形檢驗(yàn)，表明不同時(shí)點(diǎn)NEU變化無(wú)關(guān)聯(lián)關(guān)系；不同時(shí)點(diǎn)NEU有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（F=16.986，P＜0.05）；治療組及對(duì)照組不同時(shí)點(diǎn)NEU均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（F值分別為4.818、15.028，P＜0.05）；時(shí)間和分組因素?zé)o交互作用，說(shuō)明隨著時(shí)間推移，組間變化趨勢(shì)一致（F=1.943，P＞0.05）。采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，比較同一時(shí)點(diǎn)兩組NEU。結(jié)果示：D8、D15兩組NEU比較，均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（t值分別為2.285、3.320，P＜ 0.05）；治療前、D21兩組NEU比較，均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（t值分別為0.593、0.152，P＞0.05）。

RBC：采用重復(fù)測(cè)量方差分析，比較兩組不同時(shí)點(diǎn)RBC變化情況（治療前、D8、D15、D21）。結(jié)果示：資料服從球形檢驗(yàn)，表明不同時(shí)間的RBC變化無(wú)關(guān)聯(lián)關(guān)系；不同時(shí)點(diǎn)RBC無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（F=0.311，P＞0.05）；治療組及對(duì)照組不同時(shí)點(diǎn)RBC均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（F值分別為0.104、0.219，P＞0.05）；時(shí)間和分組因素?zé)o交互作用，說(shuō)明隨著時(shí)間推移，組間變化趨勢(shì)一致（F=0.013，P＞0.05）。采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，比較同一時(shí)點(diǎn)兩組RBC。結(jié)果示：任一時(shí)點(diǎn)（治療前、D8、D15、D21）治療組和對(duì)照組間均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（t值分別為0.391、0.221、0.140、0.223，P＞0.05）。

HGB：采用重復(fù)測(cè)量方差分析，比較兩組不同時(shí)點(diǎn)HGB變化情況（治療前、D8、D15、D21）。結(jié)果示：資料服從球形檢驗(yàn)，表明不同時(shí)點(diǎn)HGB變化無(wú)關(guān)聯(lián)關(guān)系；不同時(shí)點(diǎn)HGB無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（F=0.743，P＞0.05）；治療組及對(duì)照組不同時(shí)點(diǎn)HGB均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（F值分別為1.777、0.095，P＞0.05）；時(shí)間和分組因素?zé)o交互作用，說(shuō)明隨著時(shí)間推移，組間變化趨勢(shì)一致（F=1.080，P＞0.05）。采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，比較同一時(shí)點(diǎn)兩組HGB。結(jié)果示：任一時(shí)點(diǎn)（治療前、D8、D15、D21）治療組和對(duì)照組間均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（t值分別為0.990、1.002、1.265、0.485，P＞0.05）。

PLT：采用重復(fù)測(cè)量方差分析，比較兩組不同時(shí)點(diǎn)PLT變化情況（治療前、D8、D15、D21）。結(jié)果示：資料服從球形檢驗(yàn)，表明不同時(shí)點(diǎn)PLT變化無(wú)關(guān)聯(lián)關(guān)系；不同時(shí)點(diǎn)PLT無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（F=22.869，P＞0.05）；治療組及對(duì)照組不同時(shí)點(diǎn)PLT均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（F值分別為6.624、20.617，P＜0.05）；時(shí)間和分組因無(wú)交互作用，說(shuō)明隨著時(shí)間推移，組間變化趨勢(shì)一致（F=2.598，P＞0.05）。采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，比較同一時(shí)點(diǎn)兩組PLT計(jì)數(shù)。結(jié)果示：D8、D15兩組PLT比較，差別均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（t值分別為2.137、4.046，P＜ 0.05）；治療前、D21兩組PLT比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（t值分別為0.208、1.336，P＞0.05）。

結(jié)果如表3示，治療前兩組外周血白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、紅細(xì)胞、血紅蛋白、血小板比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），組間具有可比性。

D8（化療第7天），兩組白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、血小板均較治療前下降，對(duì)照組下降更為明顯，與治療組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。

D15（化療第14天），兩組白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、血小板均明顯回升，而治療組計(jì)數(shù)明顯高于對(duì)照組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。

D21天（化療第20天），兩組白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、血小板均恢復(fù)至正常范圍，兩組對(duì)比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。

兩組紅細(xì)胞、血紅蛋白在觀(guān)察期間均無(wú)明顯變化；同一時(shí)點(diǎn)（D8、D15、D21）進(jìn)行組間比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意差異（P＞0.05）。

3.3 C57/BL6小鼠化療后一般狀態(tài)模型組小鼠精神狀態(tài)差，行動(dòng)遲緩，活動(dòng)較前明顯減少，皮毛干枯、蓬松、無(wú)光澤。

3.4 各組C57/BL6小鼠給藥前后體重的變化治療前各組小鼠體重大致相同，無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。給藥后各組小鼠體重有明顯變化，與正常組比較，模型組和低劑量組顯著降低（P＜0.05），陽(yáng)性藥物組和中劑量組明顯降低（P＜0.05）；與模型組比較，陽(yáng)性藥物組和健脾補(bǔ)血方高、中劑量組顯著升高（P＜0.05）；與陽(yáng)性藥物組比較，健脾補(bǔ)血方低劑量顯著降低（P＜0.05）；與高、中劑量組比較，低劑量顯著降低（P＜0.05），說(shuō)明健脾補(bǔ)血方能改善化療后導(dǎo)致體重的異常下降，其中以健脾補(bǔ)血方高、中劑量組的作用最為顯著，見(jiàn)表4。

表3 血液分析變化比較(±s)Table 3 Comparison of changes in blood analysis(±s)

表3 血液分析變化比較(±s)Table 3 Comparison of changes in blood analysis(±s)

注：采用重復(fù)測(cè)量方差分析，比較兩組不同時(shí)點(diǎn)WBC、NEU、RBC、HGB、PLT變化情況（治療前、D8、D15、D21）；采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，比較同一時(shí)點(diǎn)的組間差異，*P＜0.05。

變量WBC（109/L）t P F P＜0.05*＜0.05*治療組（30例）6.44±1.69 4.73±1.52 5.90±1.32 6.09±1.42 3.33±1.45 2.04±1.53 3.00±1.23 3.13±1.32 3.85±1.43 3.77±1.23 3.65±1.44 3.80±1.45 124.00±1.77 116.00±1.84 115.00±1.22 118.00±1.64 211.30±82.05 142.80±65.66 180.30±66.50 208.80±78.54 4.818 15.028對(duì)照組（30例）6.53±1.73 3.80±1.53 4.80±1.55 5.89±1.66 3.11±1.42 1.23±1.20 1.90±1.33 3.08±1.22 4.00±1.55 3.85±1.56 3.70±1.33 3.88±1.33 119.00±2.13 121.00±2.00 119.00±1.23 120.00±1.56 207.30±66.04 110.30±51.33 112.30±63.65 183.80±65.82 NEU（109/L）0.004＜0.05*0.204 2.361 2.957 0.502 0.593 2.285 3.320 0.152 0.391 0.221 0.140 0.223 0.990 1.002 1.265 0.485 0.208 2.137 4.046 1.336 0.104 0.219 0.839 0.020 0.004 0.618 0.556 0.026 0.002 0.880 0.697 0.826 0.889 0.825 0.326 0.321 0.211 0.630 0.836 0.037 0.000 0.187 RBC（1012/L）0.957 0.883 7.270 19.289 HGB（g/L）1.777 0.095 0.158 0.963 PLT（109/L）時(shí)點(diǎn)治療前D8 D15 D21治療前D8 D15 D21治療前D8 D15 D21治療前D8 D15 D21治療前D8 D15 D21 6.624 20.617＜0.05*＜0.05*

圖3 白細(xì)胞計(jì)數(shù)Fig 3 WBC count

圖4 中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)Fig 4 NEU count

圖5 紅細(xì)胞計(jì)數(shù)Fig 5 RBC count

圖6 血紅蛋白計(jì)量Fig 6 HGB count

圖7 血小板計(jì)數(shù)Fig 7 PLT count

3.5 健脾補(bǔ)血方對(duì)C57/BL6小鼠血液中紅細(xì)胞數(shù)的影響與正常組比較，模型組、陽(yáng)性藥物組、健脾補(bǔ)血方各劑量組均顯著下降（P均＜0.05）；與模型組比較，陽(yáng)性藥物組和健脾補(bǔ)血方高、中劑量組均顯著升高（P＜0.05）；與陽(yáng)性藥物組比較，健脾補(bǔ)血方的高劑量組顯著升高（P＜0.05），低劑量組明顯下降（P＜0.05）。與高劑量組比較，中、低劑量組明顯降低（P＜0.05），說(shuō)明健脾補(bǔ)血方能改善化療后均導(dǎo)致血液中紅細(xì)胞的異常下降，其中以高劑量組的作用最為顯著，見(jiàn)表5。

表4 各組C57/BL6小鼠給藥前后體重的變化（±s，n=6）Table 4 Change of the weight of the Jianpibuxue Decoction in C57/BL6 Mice（±s，n=6）

表4 各組C57/BL6小鼠給藥前后體重的變化（±s，n=6）Table 4 Change of the weight of the Jianpibuxue Decoction in C57/BL6 Mice（±s，n=6）

注：與正常組比較，①P＜0.05；與模型組比較，②P＜0.05；與陽(yáng)性藥物組比較，③P＜0.05；與高劑量組比較，④P＜0.05；與中劑量組比較，⑤P＜0.05。

給藥后（g）22.37±0.48 20.27±0.44①21.62± 0.56①②22.15±0.30②21.63± 0.62①②20.48 ± 0.49①③④⑤組別正常組模型組陽(yáng)性藥物組高劑量組中劑量組低劑量組劑量/g·kg-1---2 5 12.5 6.25給藥前（g）22.35±0.48 22.37±0.49 22.70±0.46 22.58±0.31 22.75±0.48 22.58±0.31

表5 健脾補(bǔ)血方對(duì)C57/BL6小鼠血液中紅細(xì)胞數(shù)的影響（±s，n=6）Table 5 Effects of the number of RBC in blood cells of the Jianpibuxue Decoction in C57/BL6 Mice（±s，n=6）

表5 健脾補(bǔ)血方對(duì)C57/BL6小鼠血液中紅細(xì)胞數(shù)的影響（±s，n=6）Table 5 Effects of the number of RBC in blood cells of the Jianpibuxue Decoction in C57/BL6 Mice（±s，n=6）

注：與正常組比較，①P＜0.05；與模型組比較，②P＜0.05；與陽(yáng)性藥物組比較，③P＜0.05；與高劑量組比較，④P＜0.05；與中劑量組比較，⑤P＜0.05。

RBC×1012/L 9.05±0.76 3.43±0.58①4.53± 0.68①②5.87 ± 0.83①②③4.83 ± 0.62①②④3.63 ± 0.48①③④⑤組別正常組模型組陽(yáng)性藥物組高劑量組中劑量組低劑量組劑量g·kg-1---2 5 12.5 6.25

3.6 健脾補(bǔ)血方對(duì)C57/BL6小鼠化療后血液中白細(xì)胞數(shù)的影響與正常組比較，模型組和健脾補(bǔ)血方各劑量組均顯著降低（P＜0.05）；與模型組比較，陽(yáng)性藥物組和健脾補(bǔ)血方高、中劑量組均顯著升高（P＜0.05）；與陽(yáng)性藥物組比較，健脾補(bǔ)血方各劑量組均明顯降低（P＜0.05），與低劑量組比較，高、中劑量組均顯著升高（P＜0.05），說(shuō)明健脾補(bǔ)血方能改善化療后血液中白細(xì)胞的數(shù)量，其中以高、中劑量組作用顯著，見(jiàn)表6。

表6 健脾補(bǔ)血方對(duì)C57/BL6小鼠血液中白細(xì)胞數(shù)的影響（±s，n=6）Table 6 Effects of the number of WBC in blood cells of the Jianpibuxue Decoction in Mice（±s，n=6）

表6 健脾補(bǔ)血方對(duì)C57/BL6小鼠血液中白細(xì)胞數(shù)的影響（±s，n=6）Table 6 Effects of the number of WBC in blood cells of the Jianpibuxue Decoction in Mice（±s，n=6）

注：與正常組比較，①P＜0.05；與模型組比較，②P＜0.05；與陽(yáng)性藥物組比較，③P＜0.05；與高劑量組比較，④P＜0.05；與中劑量組比較，⑤P＜0.05。

WBC/×109/L 7.40±1.56 2.63±0.57①6.53±1.07②5.13 ± 1.17①②③5.00 ± 1.05①②③2.63 ± 0.66①③④⑤組別正常組模型組陽(yáng)性藥物組高劑量組中劑量組低劑量組劑量/g·kg-1---2 5 12.5 6.25

3.7 健脾補(bǔ)血方對(duì)C57/BL6小鼠化療后血液中血小板數(shù)的影響與正常組比較，模型組、陽(yáng)性藥物組和健脾補(bǔ)血方各劑量組均顯著降低（P＜0.05）；與模型組比較，陽(yáng)性藥物組和健脾補(bǔ)血方高、中劑量組均顯著升高（P＜0.05）；與陽(yáng)性藥物組比較，健脾補(bǔ)血方高、中劑量組顯著升高（P＜0.05），低劑量組顯著降低（P＜0.05）；與低劑量組比較，健脾補(bǔ)血方高、中劑量組顯著升高（P＜0.05），說(shuō)明健脾補(bǔ)血方可以提高小鼠化療后血小板的數(shù)量，減輕骨髓抑制程度，其中以高、中劑量組作用非常顯著，見(jiàn)表7。

表7 健脾補(bǔ)血方對(duì)C57/BL6小鼠血液中血小板數(shù)的影響（±s，n=6）Table 7 Effects of the number of PLT in serum of the Jianpibuxue Decoction in Mice（±s，n=6）

表7 健脾補(bǔ)血方對(duì)C57/BL6小鼠血液中血小板數(shù)的影響（±s，n=6）Table 7 Effects of the number of PLT in serum of the Jianpibuxue Decoction in Mice（±s，n=6）

注：與正常組比較，①P＜0.05；與模型組比較，②P＜0.05；與陽(yáng)性藥物組比較，③P＜0.05；與高劑量組比較，④P＜0.05；與中劑量組比較，⑤P＜0.05。

PLT/×109/L 1312.67±79.42 402.83±57.53①601.00± 59.38①②1145.00 ± 71.55①②③766.50 ± 33.19①②③④414.00 ± 60.19①③④⑤組別正常組模型組陽(yáng)性藥物組高劑量組中劑量組低劑量組劑量/g·kg-1---2 5 12.5 6.25

3.8 健脾補(bǔ)血方對(duì)C57/BL6小鼠血液的中性粒細(xì)胞數(shù)的影響與正常組比較，模型組和健脾補(bǔ)血方各劑量組均顯著降低（P＜0.05）；與模型組比較，陽(yáng)性藥物組和健脾補(bǔ)血方高劑量組均顯著升高（P＜0.05）；與陽(yáng)性藥物組比較，健脾補(bǔ)血方高、中、低劑量組均明顯下降（P＜0.05）；與中、低劑量組比較，高劑量組顯著升高（P＜0.05）。說(shuō)明健脾補(bǔ)血方可以提高小鼠化療后中性粒細(xì)胞的數(shù)量，其中以高劑量組作用非常顯著，見(jiàn)表8。

表8 健脾補(bǔ)血方對(duì)C57/BL6小鼠血液的中性粒細(xì)胞數(shù)的影響（±s，n=6）Table 8 Effects of the number of PMN in serum of the Jianpibuxue Decoction in Mice（±s，n=6）

表8 健脾補(bǔ)血方對(duì)C57/BL6小鼠血液的中性粒細(xì)胞數(shù)的影響（±s，n=6）Table 8 Effects of the number of PMN in serum of the Jianpibuxue Decoction in Mice（±s，n=6）

注：與正常組比較，①P＜0.05；與模型組比較，②P＜0.05；與陽(yáng)性藥物組比較，③P＜0.05；與高劑量組比較，④P＜0.05；與中劑量組比較，⑤P＜0.05。

PMN/×109/L 3.70±0.78 1.32±0.29①3.27±0.54②2.57 ± 0.59①②③1.83 ± 0.28①③④1.32 ± 0.33①③④組別正常組模型組陽(yáng)性藥物組高劑量組中劑量組低劑量組劑量/g·kg-1---2 5 12.5 6.25

4 討論

本臨床研究結(jié)果表1，表2，圖1，圖2顯示，治療組患者白細(xì)胞減少癥狀較對(duì)照組輕，癥狀恢復(fù)較對(duì)照組快，提示健脾補(bǔ)血方改善白細(xì)胞減少癥癥狀的療效優(yōu)于對(duì)照組。從表3，圖3-7結(jié)果提示，健脾補(bǔ)血方能有效防治化療患者白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、血小板下降，而對(duì)紅細(xì)胞、血紅蛋白作用不明顯，考慮與血細(xì)胞生存周期不同有關(guān)。粒細(xì)胞生存周期最短，約6～8小時(shí)；其次是血小板，約7～10天；紅細(xì)胞平均生存周期最長(zhǎng)，約120天。因此，化療后骨髓抑制以白細(xì)胞、粒細(xì)胞及血小板的下降較為多見(jiàn)，而紅細(xì)胞受化療藥物的影響較小，下降不明顯。因此，臨床觀(guān)察健脾補(bǔ)血方具有改善化療患者白細(xì)胞下降的不良反應(yīng)。

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示，與正常組相比，模型組、陽(yáng)性藥物組和中藥各劑量組的體重、白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板、中性粒細(xì)胞均明顯下降，提示環(huán)磷酰胺對(duì)外周血細(xì)胞具有明顯的破壞性。相關(guān)研究表明，乙酰苯肼和環(huán)磷酰胺聯(lián)合給藥不僅可以造成血細(xì)胞的大量破壞，同時(shí)可能對(duì)骨髓造血功能有明顯的抑制作用[7]。經(jīng)環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)后，模型組小鼠血液細(xì)胞中紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板、中性粒細(xì)胞均顯著降低，采用小鼠集落刺激因子作為陽(yáng)性藥物和健脾補(bǔ)血方高、中、低劑量組干預(yù)后，對(duì)其產(chǎn)生明顯的調(diào)節(jié)作用。首先從表4可知，與模型組比較，陽(yáng)性藥物組和健脾補(bǔ)血方高、中、低劑量組的體重均有不同程度的上升，以高、中劑量組的作用最為顯著，提示集落刺激因子與健脾補(bǔ)血方能明顯改善環(huán)磷酰胺引起的營(yíng)養(yǎng)不良，減少體重下降的發(fā)生，對(duì)機(jī)體產(chǎn)生保護(hù)作用，減少環(huán)磷酰胺對(duì)機(jī)體的損傷。

同時(shí)，健脾補(bǔ)血方對(duì)C57/BL6小鼠外周血細(xì)胞中的紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板、中性粒細(xì)胞數(shù)量同樣起著重要的調(diào)節(jié)作用。從表5，表6，表7，表8可知，與模型組比較，陽(yáng)性藥物組和健脾補(bǔ)血方高、中、低劑量組血細(xì)胞中的紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板、中性粒細(xì)胞數(shù)有不同程度的升高，與健脾補(bǔ)血方各劑量組比較，高、中劑量組的改善作用較為顯著。提示小鼠集落刺激因子和健脾補(bǔ)血方能夠上調(diào)外周血細(xì)胞數(shù)，改善環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)后的骨髓抑制，說(shuō)明健脾補(bǔ)血方具有調(diào)節(jié)血細(xì)胞數(shù)量的作用，對(duì)機(jī)體具有一定的保護(hù)作用，減少化療后骨髓抑制的作用。

我們前期研究發(fā)現(xiàn)[4]，健脾補(bǔ)血方能下調(diào)肺癌小鼠化療后血清EPO濃度，同時(shí)上調(diào)血清TPO、GM-CSF濃度，動(dòng)態(tài)調(diào)節(jié)機(jī)體化療后血清EPO、TPO、GM-CSF濃度的失衡狀態(tài)。其中以中劑量組的作用最為突出，提示健脾補(bǔ)血方具有改善化療后骨髓抑制的作用，對(duì)機(jī)體產(chǎn)生一定的保護(hù)作用。其作用機(jī)制可能與調(diào)節(jié)血清EPO、TPO、GM-CSF的濃度有關(guān)，從而促進(jìn)機(jī)體造血功能的恢復(fù)。相關(guān)研究提示，中藥能下調(diào)血清中造血因子異常升高的水平，達(dá)到自穩(wěn)狀態(tài)，從而促進(jìn)骨髓抑制小鼠造血功能的恢復(fù)[8]。

本實(shí)驗(yàn)研究的自擬健脾補(bǔ)血方中含黃芪、五指毛桃、黨參、當(dāng)歸、大棗等12味中藥，均具有刺激造血機(jī)能，增加外周血細(xì)胞數(shù)，減輕化療后骨髓抑制，保護(hù)骨髓造血功能的作用。近代藥理研究顯示，黃芪多糖能改善外周血象，提高化療后小鼠的骨髓細(xì)胞數(shù)，提示黃芪多糖能修復(fù)環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的骨髓抑制[9，10]。黃芪多糖、黨參皂甙可扶正固本，減輕化療后骨髓抑制，能刺激造血機(jī)能，增強(qiáng)粒系造血。當(dāng)歸多糖能增加外周血紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血紅蛋白及骨髓有核細(xì)胞數(shù)[10]。研究提示，大棗含多種氨基酸對(duì)骨髓造血功能有保護(hù)作用，對(duì)白細(xì)胞、血小板數(shù)、網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)和巨核細(xì)胞數(shù)下降有明顯的回升作用[11]。其中大棗多糖能夠升高骨髓中紅系比例，促進(jìn)骨髓有核增生，具有促進(jìn)造血的功能。中藥藥理研究表明，中醫(yī)藥具有刺激造血機(jī)能，提升外周血細(xì)胞數(shù)，保護(hù)骨髓造血功能，改善骨髓抑制[12，13]。因此，本方具有健脾生髓功能，減少環(huán)磷酰胺對(duì)骨髓生血的破壞作用。

綜合上述，通過(guò)臨床觀(guān)察和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)觀(guān)察健脾補(bǔ)血方對(duì)肺癌化療患者的癥狀評(píng)分及對(duì)C57/BL6小鼠化療后的體重和外周血細(xì)胞中紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板、中性粒細(xì)胞數(shù)的影響，驗(yàn)證了健脾補(bǔ)血方能改善腫瘤患者化療后白細(xì)胞下降的癥狀及血液細(xì)胞的減少；而且健脾補(bǔ)血方能上調(diào)環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的血液細(xì)胞下降，動(dòng)態(tài)調(diào)節(jié)機(jī)體化療后血液細(xì)胞中紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板、中性粒細(xì)胞數(shù)的失衡狀態(tài)。其中以高、中劑量組的作用最為突出，進(jìn)一步提示健脾補(bǔ)血方具有改善化療后骨髓抑制的作用，對(duì)機(jī)體產(chǎn)生一定的保護(hù)作用。其作用機(jī)制可能與刺激骨髓造血干細(xì)胞的增殖分化，調(diào)節(jié)外周血細(xì)胞數(shù)，從而促進(jìn)機(jī)體造血功能恢復(fù)有關(guān)。因此，本研究為健脾補(bǔ)血方進(jìn)一步探索改善骨髓抑制可能的作用機(jī)制和臨床推廣應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。