莫紫梅，陳寧周，寧 芯，王 警，王海波，韋柳敏

(1.廣西-東盟食品藥品安全檢驗檢測中心，南寧 530021； 2.玉林師范學院 化學與食品科學學院，廣西 玉林 537000； 3.廣西油情米意科技有限公司，廣西 柳州 545007)

黃曲霉菌及其代謝產(chǎn)物黃曲霉毒素(AFT)可誘發(fā)肝癌、乳腺癌等，嚴重威脅人類的健康，還會對糧食作物、水產(chǎn)、畜牧、養(yǎng)殖業(yè)等造成巨大的經(jīng)濟損失[1-2]?；ㄉ褪俏覈鴤鹘y(tǒng)的食用油脂，由于其營養(yǎng)價值高，含有多種不飽和脂肪酸和多酚類物質(zhì)[3]，常用于家庭烹飪中。有些食用油小作坊在原料采購、運輸、保存到生產(chǎn)環(huán)節(jié)，由于缺乏相應的技術水平或者安全意識，生產(chǎn)的花生油存在黃曲霉毒素污染的情況不容忽視。因此，探索一種有效降解黃曲霉毒素的方法，成為迫切需要解決的問題。

目前，黃曲霉毒素的脫毒方法主要有物理法[4-14]、化學法和生物法。傳統(tǒng)食用油精煉工藝中采用化學堿液處理法去除食用油中黃曲霉毒素，但會對油脂色、香、味及營養(yǎng)成分造成不同程度的破壞和影響，而且易帶來二次污染。紫外照射技術作為一種綠色、高效的物理處理手段，在現(xiàn)代食品加工中得到越來越多的關注，其原理是由于黃曲霉毒素對紫外光的敏感性，紫外光波長短，能量大，容易破壞物質(zhì)的化學結構，能夠發(fā)生復雜的光化學反應[2，4-5]。目前，對紫外光降解黃曲霉毒素B1(AFB1)的研究主要是在純?nèi)軇w系、有機溶劑-水體系、花生油等體系中的實驗室的純理論基礎的研究，且報道的主要是單純的紫外燈或紫外光[15-17]，在實際運用過程中，會使油溫明顯上升，可能會導致食物營養(yǎng)成分的變化，故傳統(tǒng)的黃曲霉毒素降解機基本都采用水冷系統(tǒng)進行降溫[4，18]。本文中所采用的黃曲霉毒素降解機，其主要優(yōu)點是采用紫外LED冷光技術，經(jīng)過其處理的花生油溫度無明顯變化，故沒有水冷系統(tǒng)。本文利用紫外LED冷光技術處理不同AFB1含量的花生油，研究紫外LED冷光照射時間、紫外LED冷光照射強度對花生油中AFB1的降解效果，以及對花生油酸價、過氧化值的影響，以探究黃曲霉毒素降解機的降解效果及推廣應用價值。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 原料與試劑

花生油：樣品1至樣品10，由廣西油情米意科技有限公司提供。

甲醇：色譜純，默克股份有限公司。超純水(電阻率為18.2 MΩ·cm)。黃曲霉毒素免疫親和柱：3CC，Romer LABS有限公司。黃曲霉毒素B1標準溶液(C17H12O6，CAS號：1162-65-8)：2 μg/mL，Romer LABS有限公司提供。

1.1.2 儀器與設備

A10Milli-Q超純水機，美國Millipore公司；XS205DU Mettler Toledo電子天平，瑞士梅特勒-托利多公司；X3R高速冷凍離心機，Thermo Fisher公司；Heidolph Multi Reax渦旋振蕩儀，德國Heidolph儀器設備有限公司；DV-B紫外強度光照計，北京師范大學光電儀器廠。

第六代黃曲霉毒素降解機(見圖1)：整體柜采用耐腐蝕、耐氧化、防生銹的不銹鋼材料制造，包括進油系統(tǒng)、紫外LED冷光燈照射脫毒系統(tǒng)、出油系統(tǒng)、配電控制柜，具有功率小、油溫上升少的特點，廣西油情米意科技有限公司提供。

圖1 黃曲霉毒素降解機整體結構

1.2 試驗方法

1.2.1 花生油中AFB1含量的測定

1.2.1.1 樣品處理

稱取1 g花生油(精確至0.01 g)于50 mL 離心管中，加入20 mL 70%甲醇-水溶液，置于渦旋振蕩儀中振蕩20 min，于10 000 r/min下離心10 min。準確移取4 mL 上清液，加入23 mL 1% TritonX-100的PBS，混勻。將上述樣液移至50 mL注射器筒中，調(diào)節(jié)下滴速度，控制樣液以1～3 mL/min的速度穩(wěn)定下滴。待樣液滴完后，往注射器筒內(nèi)每次加入10 mL水，以穩(wěn)定流速淋洗免疫親和柱，洗滌2次，待水滴完后，用真空泵抽干親和柱。脫離真空系統(tǒng)，在親和柱下部放置10 mL刻度試管，取下50 mL的注射器筒，吸取1 mL甲醇洗脫親和柱，控制1～3 mL/min的速度下滴，洗滌2次，再用真空泵抽干親和柱，收集全部洗脫液至試管中。在50℃下用氮氣緩緩地將洗脫液吹至近干，用初始流動相定容至1.0 mL，渦旋30 s溶解殘留物，0.22 μm濾膜過濾，收集濾液于進樣瓶中以備進樣。

1.2.1.2 標準溶液的配制

標準使用溶液：吸取AFB1標準溶液0.50 mL于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，質(zhì)量濃度約為100 ng/mL。溶液轉(zhuǎn)移至試劑瓶中后，在-20℃下避光保存，備用。

標準系列工作溶液：精取標準使用溶液，用甲醇稀釋至質(zhì)量濃度分別為0.1、0.5、1.0、2.5、5.0、10.0、20.0 ng/mL 的標準系列工作溶液。

1.2.1.3 色譜條件

AFB1含量測定參照GB 5009.22—2016。

液相色譜條件：Agilent Zorbax SB-C18色譜柱(5 μm，250 mm×4.6 mm)；甲醇-乙腈-水(體積比35∶10∶55)等度洗脫，流速0.8 mL/min；采用柱后光化學衍生法檢測，熒光檢測器檢測(λ激發(fā)=360 nm，λ發(fā)射=440 nm)；進樣量20 μL；柱溫35℃。

1.2.2 紫外LED冷光照射時間對花生油中AFB1降解效果的考察

將AFB1含量不同的花生油置于25 mL玻璃比色管中，緊貼黃曲霉毒素降解機紫外燈(照射強度3 500 μW/cm2)，分別照射10、30、45、60、90、120、180、300、480、600、900、1 200 s，停止照射，取照射后的花生油，檢測其AFB1含量。

1.2.3 紫外LED冷光照射強度對花生油中AFB1降解效果的考察

將AFB1含量不同的花生油置于25 mL玻璃比色管中，調(diào)節(jié)比色管與紫外燈之間的距離，調(diào)節(jié)紫外光強度(波長254 nm)(見表1)，同時放置紫外光照計測定紫外光的強度，強度分別為3 500、1 850、1 550、1 250、750、450 μW/cm2，紫外燈照射60 s后停止照射，取照射后的花生油，檢測其AFB1含量。

表1 距離與紫外光強度的關系

1.2.4 花生油酸價、過氧化值的測定

酸價,按照 GB 5009.229—2016《食品安全國家標準 食品中酸價的測定》；過氧化值，按照 GB 5009.227—2016《食品安全國家標準 食品中過氧化值的測定》。

1.2.5 AFB1降解率的計算

降解率=(紫外處理前花生油中AFB1含量-紫外處理后花生油中AFB1含量)/紫外處理前花生油中AFB1含量×100%

2 結果與分析

2.1 標準曲線及樣品含量

按照1.2.1.2制得的標準系列工作溶液，在1.2.1.3條件下各進樣3次，以AFB1質(zhì)量濃度(X)為橫坐標，其對應的峰面積平均值(Y)為縱坐標，進行線性回歸，線性回歸方程為Y=2.399×105X-3 463，相關系數(shù)r=0.999 9，表明AFB1在相關的檢測范圍內(nèi)，其質(zhì)量濃度與峰面積有良好的線性關系。各樣品按照1.2.1.1 樣品處理及1.2.1.3色譜條件測定，其AFB1初始含量見表2。

表2 各樣品中AFB1的含量(n=3) μg/kg

2.2 紫外LED冷光照射時間對花生油中AFB1降解的影響(見表3)

表3 不同紫外LED照射時間下(強度3 500 μW/cm2)各樣品的AFB1降解率

由表3可知，不同AFB1含量的花生油在紫外LED冷光照射不同的時間后，其AFB1含量均有所降低。除樣品3，其余9個樣品經(jīng)紫外LED冷光照射120 s，降解率都達到95%以上，且隨著照射時間延長，其降解程度趨于平穩(wěn)，說明樣品中AFB1含量在650 μg/kg以下的花生油，經(jīng)紫外LED冷光照射120 s后，其殘留的AFB1含量均能達到國家標準要求的花生油中AFB1含量不超過20 μg/kg的要求。而樣品3中AFB1含量很高，達1 292.9 μg/kg，經(jīng)紫外LED冷光照射120 s，其AFB1含量仍有450μg/kg，降解率僅為65.2%，需要延長照射時間，當樣品3經(jīng)紫外LED冷光照射600 s后，其AFB1的降解率可達91.2%，而達到國家標準要求的花生油中AFB1含量不超過20 μg/kg的要求，則需要照射1 200 s。由此可見，對于AFB1初始含量不同的花生油，需要不同的照射時間。

2.3 紫外LED冷光照射強度對花生油中AFB1降解的影響(見表4)

表4 不同紫外LED照射強度下(照射時間60 s)各樣品的AFB1降解率

由表4可知，不同AFB1含量的花生油在不同紫外LED冷光照射強度下照射相同時間(60 s)，其AFB1均有不同程度的降解,且隨著照射強度的降低，降解率亦隨之下降。樣品3中由于AFB1初始含量較高，在照射強度3 500～450 μW/cm2范圍內(nèi)，其降解率較低。

2.4 紫外LED冷光照射對花生油酸價和過氧化值的影響(見表5～表8)

表5 不同紫外照射時間下花生油酸價的變化

表6 不同紫外照射時間下花生油過氧化值的變化

表7 不同紫外照射強度下花生油酸價的變化

表8 不同紫外照射強度下花生油過氧化值的變化

由表5～表6可知，花生油經(jīng)紫外光照射不同時間后，花生油的酸價、過氧化值在10～1 200 s的紫外光照射后，較未處理樣品的酸價、過氧化值均變化不大。這與王洪健等[7]的研究結果一致，即新鮮花生油經(jīng)紫外照射20、40 min后，酸價沒有變化，過氧化值也沒有明顯的上升現(xiàn)象。由表7～表8可知，花生油經(jīng)不同紫外強度照射后，酸價沒有明顯變化，過氧化值亦沒有明顯變化。

3 結 論

研究表明，黃曲霉毒素降解機(紫外LED冷光技術)處理花生油能顯著降低花生油中的黃曲霉毒素B1(AFB1)的含量。當花生油中AFB1含量小于等于650 μg/kg時，花生油經(jīng)黃曲霉毒素降解機(紫外LED冷光技術)處理120 s，其AFB1降解率可達95%以上，若花生油中AFB1含量大于650 μg/kg時，需要適當延長照射時間，當照射時間為1 200 s時，其AFB1降解率(樣品3)可達98.6%。研究發(fā)現(xiàn)，花生油經(jīng)紫外LED冷光照射不同時間及強度下，對花生油酸價、過氧化值的影響并不明顯。在試驗過程中發(fā)現(xiàn)花生油經(jīng)1 200 s照射處理，其溫度較照射之前有略微上升，上升約5℃，而照射時間300 s以下時，油溫沒有變化。

在今后工作中，需進一步研究紫外LED冷光技術處理的花生油的安全性以及儲藏期品質(zhì)指標的跟蹤測定。