李 爽,郝 帥,王 靜,閆 燕,趙 磊,吳婷婷,王成濤

(北京工商大學(xué)食品學(xué)院,北京食品營養(yǎng)與人類健康高精尖創(chuàng)新中心, 北京市食品添加劑工程技術(shù)研究中心,北京 100048)

肺癌是全球發(fā)病率較高的一類惡性腫瘤,在腫瘤引起的死亡中占據(jù)首位,尤其在歐美一些發(fā)達(dá)國家男性惡性腫瘤中,肺癌的發(fā)生率更是長年維持在較高的水平[1]。在我國,肺癌也是發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤之一。隨著工業(yè)化速度加快、環(huán)境污染加重、人口老齡化加劇,包括肺癌在內(nèi)的腫瘤負(fù)擔(dān)日益加重[2]。由于傳統(tǒng)的腫瘤治療手段例如化學(xué)療法、放射性療法均存在潛在的健康風(fēng)險,尋找一種具有抗癌功效的安全性天然物質(zhì)已經(jīng)成為研究熱點(diǎn),其中藻藍(lán)蛋白近年來越來越受到研究人員的關(guān)注。

藻藍(lán)蛋白(C-phycocyanin,C-PC)源于螺旋藻、藍(lán)藻等海洋生物,是一種具有抗氧化、抗炎和抗腫瘤活性的色素蛋白復(fù)合物[3],由開鏈四吡咯化合物和脫輔蛋白通過硫鏈鍵結(jié)合形成,在藻體中擔(dān)任能量的傳遞和貯存功能[4-5]。在2014年我國發(fā)布的《GB2760-2014食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》中,已經(jīng)明確了藻藍(lán)蛋白可以作為天然食品著色劑運(yùn)用于飲料、糖果、糕點(diǎn)等多種食品行業(yè)中。除此之外,藻藍(lán)蛋白還具有非常優(yōu)良的生物學(xué)活性,包括抗炎、抗氧化、保肝、抗腫瘤等。因此,對藻藍(lán)蛋白功能特性的探索已經(jīng)成為目前研究的熱點(diǎn)之一[6]。

藻藍(lán)蛋白的抗腫瘤功能在結(jié)腸癌[7]、乳腺癌[8-9]、胰腺癌[10-11]、宮頸癌[12]、卵巢癌[13]、喉癌[14]、白血病[15]、肝癌[16]等細(xì)胞系中已得到驗(yàn)證,但對于其在肺癌中的報(bào)道并不多。肺癌病理分型按組織學(xué)可分為非小細(xì)胞肺癌(non-small cell carcinoma,NSCLC)和小細(xì)胞肺癌(Small cell carcinoma,SCLC)兩大類。非小細(xì)胞肺癌約占臨床診斷的85%,且轉(zhuǎn)移率高、治愈率極低。因此,探究藻藍(lán)蛋白對非小細(xì)胞肺癌的抗癌功能和潛在機(jī)制有著重要意義。Li[17]、Bingula[18]等人研究了藻藍(lán)蛋白和其他功能物質(zhì)協(xié)同作用肺癌A549細(xì)胞并探究了其對細(xì)胞增殖凋亡的影響。本研究團(tuán)隊(duì)前期也證實(shí)了藻藍(lán)蛋白能夠顯著抑制A549細(xì)胞的體外增殖和遷移能力[19]。為了更加深入和全面地了解藻藍(lán)蛋白在多種非小細(xì)胞肺癌中的功能,本研究以一株典型肺癌細(xì)胞系H1299為模型,對藻藍(lán)蛋白處理后的H1299細(xì)胞進(jìn)行了體外增殖、遷移、細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期等方面的研究,以期為進(jìn)一步開發(fā)功能食品奠定理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

人類非小細(xì)胞肺癌H1299細(xì)胞系 由本實(shí)驗(yàn)室自主保存;純品藻藍(lán)蛋白 由內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)惠贈;1%青霉素-鏈霉素、吉姆薩染液 美國Corning公司;DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、96孔板、6孔板 美國Gibco公司;特級胎牛血清 天津康源生物技術(shù)公司;AnnexinV/7-AAD染色試劑盒、脫脂奶粉 美國BD公司;RT-PCR相關(guān)試劑 天根生物技術(shù)有限公司;兔抗Bax單克隆抗體、兔抗Bad單克隆抗體、兔抗Bcl-2單克隆抗體、小鼠抗Bcl-xL單克隆抗體、小鼠抗β-Actin單克隆抗體 美國Cell Signaling Technology公司;RIPA細(xì)胞裂解液、PMSF蛋白酶抑制劑、雜交袋 北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限公司;Western Blot化學(xué)發(fā)光液、聚偏二氟乙烯(PVDF)膜 美國Millipore公司。

BioSpectrum型化學(xué)發(fā)光成像儀 美國UVP公司;超凈工作臺 上海博訊醫(yī)療生物儀器股份有限公司;渦旋振蕩器 德國IKA公司;BSLTEP-A-224S型數(shù)字電子天平 Sartorius公司;CFX96Touch型熒光定量PCR檢測系統(tǒng) 美國Bio-Rad公司;SpectraMaxi3型連續(xù)波長多功能酶標(biāo)儀 美國MD公司;FACSJAZZ型流式細(xì)胞儀 美國BD公司;Galaxy 170S恒溫CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱 德國Heraeus公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng) 人類肺癌H1299細(xì)胞采用10%胎牛血清、1%青霉素-鏈霉素DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)。細(xì)胞培養(yǎng)箱環(huán)境為37 ℃、5% CO2。使細(xì)胞貼壁生長,每隔2～3 d傳代,確保實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞處于對數(shù)生長期。

1.2.2 MTT法測定細(xì)胞活力 收集處于對數(shù)生長期的細(xì)胞,胰酶消化,以每孔5000個細(xì)胞量鋪于96孔板中,放置37 ℃恒溫恒濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12 h,分別加入終濃度為0、0.6、1.2、2.4、4.8、9.6 μmol/L(質(zhì)量濃度分別為0、20、40、80、160、320 mg/L)的純品藻藍(lán)蛋白,繼續(xù)放置培養(yǎng)箱分別培養(yǎng)48、72 h后,加入10 μL MTT溶液(儲備液濃度為5 mg/mL)孵育4 h,加入100 μL SDS-HCl 裂解液(10% SDS-濃HCl 裂解液)繼續(xù)孵育12 h,檢測570 nm波長處吸光度A,統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)并根據(jù)下式計(jì)算藻藍(lán)蛋白作用細(xì)胞48、72 h的細(xì)胞存活率R,其中0 μmol/L藻藍(lán)蛋白添加孔設(shè)置為對照組,存活率計(jì)算公式如下:

細(xì)胞存活率R(%)=[(A實(shí)驗(yàn)組-A對照組)/A對照組]×100

1.2.3 細(xì)胞生長曲線測定 將處于對數(shù)生長期的細(xì)胞接種于96孔板(5×104/孔)12～16 h,細(xì)胞貼壁生長后分別添加終濃度為0、4.8 μmol/L藻藍(lán)蛋白處理,并加入10 μL的MTT(儲備液濃度為5 mg/mL),4～6 h后加入100 μL的SDS-HCl裂解液(10% SDS-0.01N HCl 裂解液),12 h后測量570 nm波長處吸光度,其中0 μmol/L藻藍(lán)蛋白添加孔設(shè)置為對照組。連續(xù)測定7 d,以時間為橫坐標(biāo),吸光度值為縱坐標(biāo)繪制細(xì)胞生長曲線。

1.2.4 克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞集落形成能力 取對數(shù)期細(xì)胞接種于6孔板(2×102/孔),置于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h待細(xì)胞完全貼壁,隨后分別采用濃度為0、2.4和4.8 μmol/L的藻藍(lán)蛋白處理細(xì)胞。培養(yǎng)2～3周,當(dāng)6孔板中形成大約50個克隆數(shù)時終止培養(yǎng),并用吉姆薩染液染色計(jì)算克隆數(shù)。其中0 μmol/L藻藍(lán)蛋白處理組為對照組。

1.2.5 流式細(xì)胞術(shù)測定H1299細(xì)胞周期分布及其相關(guān)基因檢測 取對數(shù)生長期細(xì)胞接種在T25的培養(yǎng)瓶中37 ℃過夜培養(yǎng)12～16 h。第2 d給細(xì)胞換液,加入藻藍(lán)蛋白使其終濃度分別為0、2.4和4.8 μmol/L,置于37 ℃、5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h。胰酶消化1000 r/min室溫離心10 min收集細(xì)胞沉淀,PBS洗兩次,用200 μL PBS重懸細(xì)胞,用1 mL注射器將細(xì)胞均勻緩慢的打到4 ℃預(yù)冷的70%乙醇中,盡量使細(xì)胞單個分散,4 ℃固定24 h以上。收集固定的細(xì)胞,用4 ℃預(yù)冷的PBS洗細(xì)胞兩次,洗凈殘留的70%乙醇然后用500 μL PBS重懸細(xì)胞并轉(zhuǎn)移到1.5 mL離心管中,在每個樣品中添加終濃度為50 μg/mL的RNA酶,37 ℃消化40 min,之后加入碘化丙啶(PI)4 ℃避光染色30 min上機(jī)檢測各個細(xì)胞周期時相的變化情況。其中0 μmol/L藻藍(lán)蛋白處理組為對照組。

1.2.6 流式細(xì)胞儀檢測肺癌H1299細(xì)胞的早期、晚期凋亡 取生長狀態(tài)良好的細(xì)胞接種在T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)24 h,分別加入0、2.4和4.8 μmol/L的藻藍(lán)蛋白處理72 h,胰酶消化后在室溫1000 r/min心10 min,用100 μL雙染孵育液將洗干凈的細(xì)胞沉淀重懸,加入5 μL AnnexinV-FITC染液,再加入5 μL 7-AAD染液,冰上20 min避光染色。充分混勻后上機(jī)檢測細(xì)胞的凋亡情況,統(tǒng)計(jì)早期凋亡、晚期凋亡的細(xì)胞比例。其中0 μmol/L藻藍(lán)蛋白處理組為對照組。

1.2.7 劃痕修復(fù)實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞的遷移率 將對數(shù)期細(xì)胞接種于培養(yǎng)皿中,底部預(yù)先用記號筆畫出三條平行線作為參考坐標(biāo),37 ℃、5% CO2培養(yǎng)至幾乎100%匯合度。用吸頭快速垂直于培養(yǎng)皿底部劃出一道直線,用培養(yǎng)基輕輕沖洗除去細(xì)胞碎片,加入含有0、2.4和4.8 μmol/L藻藍(lán)蛋白的新鮮培養(yǎng)基培養(yǎng)。分別在0、24和48 h在固定的劃痕位置進(jìn)行拍照,測量劃痕區(qū)的寬度H并計(jì)算細(xì)胞的遷移率I,其中0 μmol/L藻藍(lán)蛋白處理組為對照組,遷移率計(jì)算公式如下:

I(%)=[(H實(shí)驗(yàn)組-H對照組)/H對照組]×100

1.2.8 qRT-PCR檢測細(xì)胞周期、凋亡相關(guān)基因表達(dá) 將H1299細(xì)胞接種在60 mm的培養(yǎng)皿中,37℃恒溫恒濕培養(yǎng)箱過夜12 h使細(xì)胞貼壁生長,第2 d加入藻藍(lán)蛋白處理48 h,收集細(xì)胞。利用TRIZOL法提取細(xì)胞總RNA并使用NanoDrop測定 RNA 濃度,利用反轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行 cDNA 合成。熒光定量PCR采用三步法。所使用的擴(kuò)增引物序列如表1所示。

表1 用于qRT-PCR分析的引物序列Table 1 Primer sequences used for qRT-PCR

1.2.9 Western blot檢測蛋白表達(dá) 將對數(shù)期細(xì)胞接種在培養(yǎng)皿中,培養(yǎng)24 h使細(xì)胞貼壁生長,第2 d加入藻藍(lán)蛋白處理48 h,收集細(xì)胞。利用RIPA裂解液提取細(xì)胞全蛋白,利用Bradford法測定蛋白濃度。取50 μg等質(zhì)量蛋白上樣,通過12%的SDS-PAGE對蛋白進(jìn)行分離,濃縮膠采用80 V電壓,30 min電泳條件,分離膠采用120 v,1.5 h電泳條件,直至溴酚藍(lán)跑至分離膠前沿時停止,取出分離膠進(jìn)行轉(zhuǎn)膜,350 mA 恒流轉(zhuǎn)膜1.5 h,對目的蛋白條帶切割,室溫條件下采用5%的脫脂奶粉封閉1.5 h,加入一抗(稀釋比例為1∶1000)4 ℃孵育12～16 h,隨后37 ℃孵育二抗(稀釋比例為1∶5000)1 h,最后對蛋白條帶孵育發(fā)光液,收集化學(xué)發(fā)光信號進(jìn)行曝光得到結(jié)果。

1.3 數(shù)據(jù)處理

柱狀圖和折線圖中的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±Standard deviation)表示,采用SPSS 11.0 軟件進(jìn)行單因素方差分析,其中p<0.05為顯著性差異(*);p<0.01為極顯著差異(**)。

2 結(jié)果與分析

2.1 藻藍(lán)蛋白對H1299細(xì)胞生長的影響

2.1.1 H1299細(xì)胞存活率和生長曲線的測定 圖1顯示,用不同劑量藻藍(lán)蛋白分別處理肺癌H1299細(xì)胞48和72 h,細(xì)胞存活率均出現(xiàn)了顯著或極顯著降低(p<0.05或p<0.01);同時,在同一作用時間下,隨著藻藍(lán)蛋白濃度的提高,細(xì)胞存活率也顯著下降(p<0.05或p<0.01)。在MTT法檢測細(xì)胞存活力實(shí)驗(yàn)中,由于需要觀察不同濃度梯度下的存活率,選擇了多個濃度進(jìn)行試驗(yàn)(0、0.6、1.2、2.4、4.8、9.6 μmol/L),而生長曲線是對存活率的進(jìn)一步驗(yàn)證,因此挑選了一個具有代表性的濃度(4.8 μmol/L)進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步檢測藻藍(lán)蛋白對H1299細(xì)胞生長的影響。由圖2可知,實(shí)驗(yàn)組從第3 d開始生長受到顯著抑制,第4 d以后受到極顯著抑制,細(xì)胞數(shù)量極顯著低于對照組(p<0.01)。以上結(jié)果表明,藻藍(lán)蛋白對肺癌H1299細(xì)胞的生長在一定程度上有抑制作用。

圖1 藻藍(lán)蛋白對肺癌H1299細(xì)胞活力的影響Fig.1 Effect of C-phycocyanin on the viability of lung cancer H1299 cells注:* 與對照組相比差異顯著(p<0.05);** 與對照組相比差異極顯著(p<0.01)；A:48 h;B:72 h；圖2～圖4同。

圖2 藻藍(lán)蛋白對肺癌H1299細(xì)胞生長的影響Fig.2 Effects of C-phycocyanin on the proliferation of lung cancer H1299 cells

2.1.2 藻藍(lán)蛋白對H1299細(xì)胞集落形成能力的影響 細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞集落實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)中我們均統(tǒng)一調(diào)整成了三個具有代表性的濃度(0、2.4、4.8 μmol/L)進(jìn)行實(shí)驗(yàn),從圖3可知,隨著藻藍(lán)蛋白濃度的增加,細(xì)胞集落個數(shù)越來越少,與對照組相比出現(xiàn)顯著性差異(p<0.05)。由此可知,藻藍(lán)蛋白對H1299細(xì)胞集落形成能力有顯著抑制作用。

圖3 藻藍(lán)蛋白對H1299細(xì)胞集落形成能力的影響Fig.3 Effect of C-phycocyanin on colony forming ability of lung cancer H1299 cells

2.1.3 H1299細(xì)胞的周期分布及其相關(guān)基因的檢測 采用流式細(xì)胞術(shù)研究了藻藍(lán)蛋白處理對細(xì)胞周期的影響。由圖4可知,與對照組相比,藻藍(lán)蛋白處理組G1期細(xì)胞數(shù)量極顯著減少(p<0.01),S期細(xì)胞數(shù)量極顯著增加(p<0.01),表明細(xì)胞周期阻滯在了S期。隨后利用熒光定量PCR進(jìn)一步檢測了周期相關(guān)基因的表達(dá)。周期蛋白家族和周期蛋白依賴激酶(cyclin-dependent kinase,Cdk)家族在周期運(yùn)轉(zhuǎn)調(diào)控中起重要作用。Cdk與周期蛋白結(jié)合形成異源二聚體的復(fù)合物,具有蛋白激酶活性[20]。CyclinA與CDK2結(jié)合共同調(diào)控細(xì)胞S期向G2期的轉(zhuǎn)換,同時周期抑制因子P21、P27作用于CDKs,使細(xì)胞阻滯在S期[21]。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示0、2.4、4.8 μmol/L濃度的藻藍(lán)蛋白使H1299細(xì)胞周期阻滯在S期,為了進(jìn)一步驗(yàn)證藻藍(lán)蛋白對周期基因的調(diào)控,我們進(jìn)一步選取阻滯效果最好的4.8 μmol/L濃度藻藍(lán)蛋白作用的細(xì)胞進(jìn)行定量PCR的檢測。圖5結(jié)果顯示,與對照組相比,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞中p27、cdk2顯著下調(diào)(p<0.05),cyclinA極顯著下調(diào)(p<0.01),同時周期抑制因子p21極顯著上調(diào)(p<0.01),這些基因的改變可能使得細(xì)胞無法正常進(jìn)入G2期,這與細(xì)胞周期的結(jié)果是一致的。

圖5 藻藍(lán)蛋白影響肺癌H1299細(xì)胞周期相關(guān)基因表達(dá)Fig.5 Effect of C-phycocyanin on the expression of cell cycle related genes in H1299 cells

2.2 藻藍(lán)蛋白對H1299細(xì)胞凋亡的影響

采用流式細(xì)胞術(shù)對藻藍(lán)蛋白處理后的H1299細(xì)胞的凋亡程度進(jìn)行了檢測。細(xì)胞在凋亡啟動早期階段時,細(xì)胞中的磷脂酰絲氨酸會由細(xì)胞內(nèi)向細(xì)胞外發(fā)生翻轉(zhuǎn),能夠與Annexin-V特異性地結(jié)合,但細(xì)胞膜并沒有發(fā)生破裂,因此FITC熒光出現(xiàn)陽性信號,7-AAD出現(xiàn)陰性信號;而細(xì)胞在晚期凋亡時,細(xì)胞膜發(fā)生裂解,7-AAD能夠進(jìn)入細(xì)胞與DNA結(jié)合,因此FITC和7-AAD均出現(xiàn)陽性信號。由圖6可知,與對照組相比,2.4 μmol/L藻藍(lán)蛋白濃度處理的細(xì)胞早期凋亡比例(2.01%±0.36%)和晚期凋亡比例(4.53%±0.21%)均出現(xiàn)顯著或極顯著增加(p<0.05或p<0.01);隨著處理濃度的增加,4.8 μmol/L藻藍(lán)蛋白處理后,早期(2.55%±0.32%)和晚期(11.3%±0.16%)凋亡細(xì)胞的比例也出現(xiàn)顯著或極顯著增多(p<0.05或p<0.01)。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明藻藍(lán)蛋白對肺癌H1299細(xì)胞有促凋亡作用。

圖6 藻藍(lán)蛋白對肺癌H1299細(xì)胞凋亡的影響Fig.6 Effect of phycocyanin on the apoptosis of lung cancer H1299 cells

流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示0、2.4、4.8 μmol/L濃度的藻藍(lán)蛋白使H1299細(xì)胞出現(xiàn)濃度依賴性凋亡,為了進(jìn)一步驗(yàn)證藻藍(lán)蛋白對促、抑凋亡基因和蛋白的調(diào)控,我們進(jìn)一步選取凋亡效果最好的4.8 μmol/L濃度藻藍(lán)蛋白作用的細(xì)胞進(jìn)行定量PCR和Western Blot的檢測。采用4.8 μmol/L藻藍(lán)蛋白濃度處理細(xì)胞后,對凋亡相關(guān)基因和蛋白分別進(jìn)行了定量PCR和Western Blot檢測。圖7和圖8結(jié)果顯示，藻藍(lán)蛋白處理后，促凋亡基因bcl-w、bad、bax以及bid的轉(zhuǎn)錄和蛋白水平顯著上調(diào)(p<0.05)，bak、bim極顯著上調(diào)(p<0.01)，抑凋亡基因bcl-xL則出現(xiàn)顯著下調(diào)(p<0.05)，bcl-2極顯著下調(diào)(p<0.01)。此結(jié)果與流式細(xì)胞術(shù)的凋亡實(shí)驗(yàn)相一致。

圖7 藻藍(lán)蛋白影響肺癌H1299細(xì)胞凋亡相關(guān)基因的表達(dá)Fig.7 Effect of phycocyanin on the expression of apoptosis-related genes in lung cancer H1299 cells

圖8 藻藍(lán)蛋白影響肺癌H1299細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)Fig.8 Effect of C-phycocyanin on the expression of apoptosis-related proteins in H1299 cells

2.3 藻藍(lán)蛋白對H1299體外遷移能力的影響

采用體外劃痕修復(fù)實(shí)驗(yàn)研究了藻藍(lán)蛋白對肺癌H1299細(xì)胞體外遷移的影響。由圖9可知,隨著處理濃度的增加,細(xì)胞遷移率逐漸降低。藻藍(lán)蛋白作用48 h時,2.4和4.8 μmol/L處理量下的細(xì)胞遷移率分別為56.3%±2.35%與33.5%±1.22%。此結(jié)果表明,藻藍(lán)蛋白能夠顯著抑制H1299細(xì)胞的體遷移能力。

圖9 藻藍(lán)蛋白對肺癌H1299體外遷移能力的影響Fig.9 Effect of C-phycocyanin on the in vitro migration of lung cancer H1299 cells

隨后利用Western Blot檢測了4.8 μmol/L藻藍(lán)蛋白處理后的H1299細(xì)胞內(nèi)基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2和MMP-9的水平?；|(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)是細(xì)胞遷移過程中重要的蛋白酶,是調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)生長的重要系統(tǒng),細(xì)胞外基質(zhì)主要成分是血管,血管形成是腫瘤轉(zhuǎn)移的重要因素,MMP-2,MMP-9均屬明膠酶類,是能夠降解IV型膠原的主要基質(zhì)水解酶,其中MMP-9是MMPs系統(tǒng)中最大的酶、MMP-2能降解I型膠原纖維,均與細(xì)胞遷移密切相關(guān),并在惡性腫瘤中都有過度的表達(dá)[22-25]。結(jié)果顯示,藻藍(lán)蛋白處理后,細(xì)胞中MMP-2、MMP-9蛋白水平的表達(dá)均有所下調(diào)(圖10)。結(jié)果與體外劃痕修復(fù)實(shí)驗(yàn)一致。

3 結(jié)論

本論文以非小細(xì)胞肺癌H1299細(xì)胞模型為基礎(chǔ),系統(tǒng)研究了藻藍(lán)蛋白對H1299細(xì)胞增殖、凋亡和遷移的影響。研究表明藻藍(lán)蛋白能夠通過影響細(xì)胞周期基因cyclinA,cdk2和p21的表達(dá)使細(xì)胞阻滯在S期,進(jìn)而降低細(xì)胞活力,抑制細(xì)胞的生長和克隆形成能力;同時,藻藍(lán)蛋白能夠通過調(diào)控凋亡相關(guān)基因和蛋白的表達(dá)誘導(dǎo)H1299細(xì)胞發(fā)生凋亡;此外,藻藍(lán)蛋白也能通過降低MMP-2和MMP-9蛋白的表達(dá)水平而抑制H1299細(xì)胞的體外遷移能力。本研究充分證實(shí)了藻藍(lán)蛋白對非小細(xì)胞H1299細(xì)胞的抑制作用,為開發(fā)新型的具有抗肺癌功能的功能食品以及肺癌的治療提供了重要的理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。