袁琳琳 趙小亮 曾 紅*

（1新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)塔里木盆地生物資源保護(hù)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，新疆阿拉爾843300）（2塔里木大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，新疆阿拉爾843300）

白色念珠菌（Canidia albicans）一種條件治病真菌，當(dāng)機(jī)體免疫功能下降時(shí)，白色念珠菌將大量繁殖入侵機(jī)體細(xì)胞導(dǎo)致疾病發(fā)生［1］。菌群與上皮細(xì)胞表面的受體結(jié)合并分泌出胞外多糖或蛋白，形成的膜狀物，即生物膜。與浮游細(xì)胞相比，生物膜將自身包裹在自發(fā)粘附的多糖和蛋白質(zhì)層中，使白色念珠菌粘附到表面，可防治藥物的殺菌作用［2］，具有抵抗更高水平的抗真菌劑的能力，并且可以產(chǎn)生對(duì)常用治療的耐受性［3］。生物膜的形成是白色念珠菌產(chǎn)生耐藥性的主要原因之一［4］。因此，篩選生物膜抑制劑的研究方向具有很大意義。

目前，治療白色念珠菌感染的藥物主要包括多烯，唑類，棘白菌素幾類［5-7］，其中每一類通過特定的方式達(dá)到相應(yīng)的抗菌效果。但是每一類都有相應(yīng)的缺點(diǎn)，不能完全根治。為了克服病原菌的耐藥性從微生物源次生代謝產(chǎn)物中尋找能抑制白色念珠菌生物膜形成的活性物質(zhì)顯得尤為重要。

放線菌能夠產(chǎn)生豐富的代謝產(chǎn)物，是挖掘生物活性物質(zhì)的天然寶庫。但是放線菌次生代謝產(chǎn)物的開發(fā)與利用只占總體的1%，還有99%未開發(fā)利用，對(duì)我們來說是很大的資源，尤其是鏈霉菌，受到特別關(guān)注。在這耐藥性增加的時(shí)代，微生物源代謝產(chǎn)物抑制生物膜的生長，而不殺死宿主細(xì)胞，可能為新藥的研發(fā)候選材料?；谇捌陬A(yù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)放線菌TRM43355發(fā)酵液對(duì)白色念珠菌ATCC 64550的生物膜具有較好抑制作用，于是針對(duì)菌株TRM43355次級(jí)代謝產(chǎn)物進(jìn)行深入研究。本實(shí)驗(yàn)以白色念珠菌為靶標(biāo)病原菌，以放線菌TRM43355為研究材料，放線菌TRM43355發(fā)酵液中粗蛋白通過硫酸銨鹽析法獲得粗蛋白，采用微孔板半定量法檢測(cè)活性物質(zhì)對(duì)白色念珠菌生物膜形成的影響，確定其抑制白色念珠菌生物膜形成的活性物質(zhì)。初步探索活性蛋白抑制白色念珠菌生物膜形成的最小生物膜清除濃度（MBEC）并研究不同理化因素（pH、溫度、金屬離子、有機(jī)溶劑）對(duì)蛋白活性的影響。

綜上所述，白色念珠菌作為目前比較常見的致病菌，對(duì)抑制其生物膜形成的物質(zhì)研究較廣，本實(shí)驗(yàn)從放線菌次級(jí)代謝產(chǎn)物中提取抑制白色念珠菌生物膜的蛋白并探索其環(huán)境條件，為抗真菌藥物的治療和抗膜劑新藥的研發(fā)奠定了理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

高速冷凍離心機(jī)，高壓滅菌鍋，電子天平，96孔板，恒溫振蕩儀，酶標(biāo)儀

1.1.2 菌株來源

致病菌株：白色念珠菌ATCC 64550（Canidia albicansATCC 64550），購于美國典型培養(yǎng)物保藏中心ATCC。拮抗菌株：放線菌菌株TRM43355分離于新疆阿拉爾市塔克拉瑪干沙漠的流動(dòng)風(fēng)沙。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基及試劑

高氏一號(hào)培養(yǎng)基（1 L）；AM6培養(yǎng)基（1 L）；YPD培養(yǎng)基；SDB培養(yǎng)基，培養(yǎng)見《微生物實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)》。

試劑：(NH4)2SO3；CuSO4·5H2O；FeSO4·7H2O；Mn-SO4·H2O；ZnSO4·7H2O；CH3OH。

1.2 方法

1.2.1 放線菌TRM43355的分類學(xué)鑒定

根據(jù)張仁文［8］等報(bào)道的用酶解法提取鏈霉菌基因組總DNA并進(jìn)行16S rRNA基因的PCR擴(kuò)增，并委托上海生物工程有限公司測(cè)序。使用EzTaxon數(shù)據(jù)庫與來自最密切相關(guān)的鏈霉菌屬物種的序列進(jìn)行多重比對(duì)，以及序列相似性的計(jì)算。通過MEGA軟件中鄰接法（Neighbor-Joining，NJ）構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹［9-10］，明確其分類學(xué)地位。

1.2.2 菌株TRM43355發(fā)酵液的制備

將放線菌菌株TRM43355接種于高氏一號(hào)固體培養(yǎng)基于37℃培養(yǎng)5-7 d。將單菌落接種于AM6液體發(fā)酵培養(yǎng)基，每瓶150 mL，37℃，180 r/min振蕩培養(yǎng)7-10 d。發(fā)酵液用紗布過濾，除去大顆粒的菌體，再用50 mL離心管，10000 r/min離心10 min，以備后續(xù)使用。

1.2.3 菌株TRM43355發(fā)酵液粗提物制備

將發(fā)酵液分別通過D-101大孔樹脂吸附［8］，分別用30%、50%、70%、95%甲醇洗脫，收集不同階段組分，膏狀50℃烘干備用。稱取適量浸膏用5%DMSO溶解，過0.22μm無菌微孔濾膜，-20℃待用。

1.2.4 菌株TRM43355發(fā)酵液粗蛋白提取

將放線菌菌株TRM43355的發(fā)酵液用紗布過濾后，10000 r/min離心10 min，收集上清，再按70%的濃度加入飽和硫酸銨［11］，置于攪拌30 min，4℃靜置過夜，10000 r/min低溫高速離心15 min，收集沉淀。用少量PBS（磷酸鹽緩沖液）溶解沉淀，用MW8000-10000的透析袋4℃透析48 h。奈氏試劑檢測(cè)透析液中的NH4+是否殘留。將無殘留PBS溶解的粗蛋白溶液冷凍抽干，存放-20℃?zhèn)溆谩?/p>

1.3 活性檢測(cè)

1.3.1 不同蛋白濃度對(duì)白色念珠菌生物膜形成能力的影響

采用微孔板半定量方法［12］檢測(cè)蛋白對(duì)念珠菌生物膜形成能力的影響。用PBS配制蛋白母液濃度為2 mg/mL，經(jīng)過0.22μm微孔濾膜過濾，置于96孔板中，進(jìn)行倍性稀釋，獲得蛋白濃度為1000～3.91μg/mL［13-14］檢測(cè)不同蛋白濃度對(duì)白色念珠菌生物膜形成能力的影響。

1.3.2 菌株TRM43355發(fā)酵液產(chǎn)物和粗蛋白對(duì)白色念珠菌生物膜形成能力的影響

取100μL的菌株TRM43355發(fā)酵液分段產(chǎn)物溶液（30%、50%、70%、95%不同甲醇相組分浸膏）和100μL的菌液（將培養(yǎng)72 h白色念珠菌菌液按1：10稀釋，菌液濃度為1.205×107CFU/mL）加至96孔板中，混勻，4個(gè)孔為一組平行實(shí)驗(yàn)。37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)72 h后用酶標(biāo)儀檢測(cè)生物生長量，蒸餾水沖洗三次，洗去未黏附的浮游真菌，60℃烘箱1 h，用0.5%結(jié)晶紫染色5 min，用蒸餾水沖洗后室溫下自然晾干，用酶標(biāo)儀測(cè)定ATCC 64550白色念珠菌生物膜形成能力，相對(duì)生物膜形成能力=（處理組OD490/空白對(duì)照OD490）×100。

1.4 粗蛋白經(jīng)過不同理化因素處理后對(duì)白色念珠菌生物膜形成能力的影響

1.4.1 粗蛋白經(jīng)過不同pH處理后對(duì)白色念珠菌生物膜形成能力的影響

為探究不同pH值對(duì)蛋白穩(wěn)定性的影響，分別用pH值為3、5、7、9、11的PBS（磷酸緩沖溶液）溶解樣品，配制最終濃度為2 mg/mL的粗蛋白溶液，0.22μm無菌微孔濾膜除菌，微孔板半定量法檢測(cè)不同pH值處理后的粗蛋白對(duì)白色念珠菌生物膜形成能力的影響。

1.4.2 粗蛋白經(jīng)過不同溫度處理后對(duì)白色念珠菌生物膜形成能力的影響

為探究溫度對(duì)蛋白穩(wěn)定性的影響，配制粗蛋白濃度為2 mg/mL，分別經(jīng)過不同溫度（30℃、40℃、60℃、80℃、100℃）處理30 min，未經(jīng)水浴處理的-20℃為未處理組。分別過0.22μm微孔濾膜，利用微孔板半定量法檢測(cè)不同溫度處理后的粗蛋白對(duì)白色念珠菌生物膜形成能力的影響。

1.4.3 粗蛋白經(jīng)過不同金屬離子處理后對(duì)白色念珠菌生物膜形成能力的影響

為進(jìn)一步探究粗蛋白的穩(wěn)定性，用不同的金屬離子處理粗蛋白，金屬離子分別為Fe2+、Zn2+、Mn2+，Cu2+未經(jīng)金屬離子處理的粗蛋白為未處理組。金屬離子配置母液濃度為5 mmol/mL，不同金屬離子溶液梯度稀釋，并加入100μL稀釋的菌懸液，混合均勻，37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)72 h。利用微孔板半定量法檢測(cè)不同金屬離子處理后的粗蛋白對(duì)白色念珠菌生物膜形成能力的影響。

1.4.4 粗蛋白經(jīng)過不同有機(jī)溶劑處理后對(duì)白色念珠菌生物膜形成能力的影響

用不同有機(jī)溶劑處理粗蛋白，探究蛋白的穩(wěn)定性，選擇的有機(jī)溶劑分別為乙酸乙酯、氯仿、石油醚、丙酮。配制濃度為2 mg/mL蛋白溶液，按1：1比例加入有機(jī)溶劑（乙酸乙酯、氯仿、石油醚、丙酮）室溫下靜置2 h，自然風(fēng)干至粉末。利用微孔板半定量法檢測(cè)不同有機(jī)溶劑處理后的粗蛋白對(duì)白色念珠菌生物膜形成能力的影響。

1.5 數(shù)據(jù)處理與分析

以上實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差形式表示以減少結(jié)果誤差，使用軟件Graphpad prism 5進(jìn)行繪圖分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌株TRM43355分類學(xué)鑒定

TRM 43355經(jīng)過16S rRNA基因序列比對(duì)分析結(jié)果表明此菌株屬于鏈霉菌屬，與數(shù)據(jù)庫中Streptomyces barkulensisRC 1831T具有最高相似性，相似度為99.06%。與其它鏈霉菌屬種親緣關(guān)系如圖1所示。

圖1 菌株TRM43355基于16S rRNA基因序列鄰接法系統(tǒng)進(jìn)化發(fā)育樹

2.2 發(fā)酵液不同組分及粗蛋白對(duì)白色念珠菌生物膜形成能力的影響

使用微孔板半定量法檢測(cè)發(fā)酵液的提取物對(duì)白色念珠菌ATCC 64550生物膜形成的影響。如圖2所示，菌株TRM 43355的粗蛋白對(duì)白色念珠菌生物膜形成具有很好的抑制效果，抑制率高達(dá)88.12%，其70%、95%甲醇洗脫分子的活性也比較顯著。后續(xù)實(shí)驗(yàn)就放線菌TRM 43355發(fā)酵液中的粗蛋白深入研究。

圖2 菌株TRM43355發(fā)酵液提取物對(duì)白色念珠菌生物膜形成能力的影響

2.3 不同濃度粗蛋白對(duì)白色念珠菌生物膜形成的影響

為了確定菌株TRM 43355發(fā)酵液中蛋白對(duì)白色念珠菌生物膜形成的最小抑膜濃度，用不同濃度蛋白，采用微孔板定量法測(cè)試活性。如圖3所示，粗蛋白濃度為2 mg/mL時(shí)對(duì)白色念珠菌生物膜形成抑制率為93%。當(dāng)?shù)鞍诐舛?.25 mg/mL、0.5 mg/mL和1 mg/mL時(shí)相對(duì)生物膜形成能力分別為96.31%、82.98%和86.89%，當(dāng)?shù)鞍诐舛葹? mg/mL、2.5 mg/mL和3 mg/mL時(shí)相對(duì)生物膜形成能力分別為6.48%、7.71%和7.75%；蛋白濃度為0.25 mg/mL、0.5 mg/mL和1 mg/mL時(shí)幾乎不能達(dá)到抑制生物膜的效果，蛋白濃度為2 mg/mL、2.5 mg/mL和3 mg/mL時(shí)抑制生物膜的效果較好，抑制率可達(dá)90%以上，因此不同的蛋白濃度對(duì)白色念珠菌生物膜形成影響較大，蛋白濃度越高生物膜形成能力越弱，抑制率越強(qiáng)；濃度為2 mg/mL的蛋白濃度為最佳，繼而后續(xù)活性測(cè)試都采用蛋白濃度為2 mg/mL。

圖3 不同濃度粗蛋白對(duì)白色念珠菌生物膜形成能力的影響

2.4 粗蛋白經(jīng)過不同理化因素處理后對(duì)白色念珠菌生物膜形成的影響

2.4.1 粗蛋白經(jīng)不同pH處理后對(duì)白色念珠菌生物膜形成的影響

實(shí)驗(yàn)為探討不同pH處理后的蛋白對(duì)白色念珠菌生物膜形成的影響，用不同pH處理蛋白，并進(jìn)行活性檢測(cè)，pH值為7時(shí)處理的蛋白為未處理組，結(jié)果如圖4所示，當(dāng)?shù)鞍譸H值為3時(shí)相對(duì)生物膜形成能力為6.57%；當(dāng)?shù)鞍譸H值為5時(shí)相對(duì)生物膜形成能力為22.9%；當(dāng)?shù)鞍譸H值為7時(shí)相對(duì)生物膜形成能力為39.79%；當(dāng)?shù)鞍譸H值為9時(shí)相對(duì)生物膜形成能力為12.74%；當(dāng)?shù)鞍譸H值為11時(shí)相對(duì)生物膜形成能力為19.58%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，通過不同pH處理的粗蛋白對(duì)白色念珠菌生物形成能力的影響并不大，pH值為3時(shí)生物膜形成能力最差，其抑制白色念珠菌生物膜的活性最好，pH值為9時(shí)次之。

圖4 pH對(duì)粗蛋白抑制白色念珠菌生物膜形成能力的影響

2.4.2 粗蛋白經(jīng)不同溫度處理后對(duì)抑制白色念珠菌生物膜形成的影響

實(shí)驗(yàn)為探討溫度對(duì)蛋白質(zhì)活性的影響，把溫度-20℃設(shè)為未處理組，處理組的溫度分別設(shè)置為：30℃、40℃、60℃、80℃和100℃，結(jié)果如圖5所示，當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)經(jīng)過-20℃處理后相對(duì)生物膜形成能力為33.3%，當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)經(jīng)過30℃處理后相對(duì)生物膜形成能力為13.39%，當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)經(jīng)過40℃處理后相對(duì)生物膜形成能力為11.07%，當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)經(jīng)過60℃處理后相對(duì)生物膜形成能力為9.88%，當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)經(jīng)過80℃處理后相對(duì)生物膜形成能力為87.89%，當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)經(jīng)過100℃處理后相對(duì)生物膜形成能力為97.43%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)經(jīng)過80℃以上高溫處理后抑制白色念珠菌生物膜形成的活性基本喪失，故此80℃以上的高溫環(huán)境蛋白失活。

圖5 溫度對(duì)粗蛋白質(zhì)抑制白色念珠菌生物膜形成能力的影響

2.4.3 粗蛋白經(jīng)不同金屬離子處理后對(duì)白色念珠菌生物膜形成的影響

本實(shí)驗(yàn)研究金屬離子對(duì)蛋白質(zhì)活性的影響，所以需先探索金屬離子本身對(duì)生物膜的影響，見圖6，由圖6-a可知，當(dāng)鐵離子濃度0.312 mmol/mL時(shí)對(duì)生物膜基本沒有影響，因此后續(xù)實(shí)驗(yàn)選擇小于或等于0.312 mmol/mL；圖6-b，可知當(dāng)鋅離子濃度為0.625 mmol/mL時(shí)幾乎沒有影響生物膜形成，故后續(xù)實(shí)驗(yàn)選用鋅離子濃度小于或等于0.625 mmol/mL；由圖6-c可知，錳離子身就對(duì)生物膜形成幾乎沒有影響；實(shí)驗(yàn)中還測(cè)試銅離子對(duì)生物膜形成的影響，但是銅離子無論濃度高低對(duì)生物膜形成有巨大影響，因此銅離子不做后續(xù)實(shí)驗(yàn)，綜上所述最終金屬離子濃度統(tǒng)一為0.312 mmol/mL。不同金屬離子處理的粗蛋白對(duì)生物膜形成能力的影響如圖6-d所示，粗蛋白經(jīng)鐵離子處理后其白色念珠菌相對(duì)生物膜形成能力14.06%；經(jīng)錳離子處理后其生物膜形成能力為9.85%；經(jīng)鋅離子離子處理后其生物膜形成能力為7.56%；未用金屬離子處理組其生物膜形成能力為39.79%。從實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)明顯發(fā)現(xiàn)Zn2+處理蛋白后抑制生物膜效果最好，抑制率高可達(dá)92.44%。

圖6 粗蛋白經(jīng)不同金屬離子處理后對(duì)白色念珠菌生物膜形成能力的影響

2.4.4粗蛋白經(jīng)不同有機(jī)溶劑處理后對(duì)白色念珠菌生物膜形成能力的影響

實(shí)驗(yàn)為探討不同有機(jī)溶劑對(duì)蛋白活性的影響，結(jié)果如圖7所示，當(dāng)?shù)鞍捉?jīng)乙酸乙酯處理后，其白色念珠菌相對(duì)生物膜形成能力為6.75%；當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)經(jīng)氯仿處理后，其白色念珠菌相對(duì)生物膜形成能力為10.86%；當(dāng)?shù)鞍捉?jīng)石油醚處理后，其白色念珠菌相對(duì)生物膜形成能力為7.91%；當(dāng)?shù)鞍捉?jīng)丙酮處理后，其白色念珠菌相對(duì)生物膜形成能力為9.05%；未處理組為39.79%。以上結(jié)果表明粗蛋白經(jīng)過有機(jī)溶劑處理過后抑制生物膜的活性都有所提高。

圖7 蛋白經(jīng)不同有機(jī)試劑處理后對(duì)白色念珠菌生物膜形成能力的影響

3 結(jié)果與討論

生物膜起到屏障保護(hù)作用，使藥物很難作用菌群，因此生物膜的形成是白色念珠菌產(chǎn)生耐藥性主要原因之一。白色念珠菌對(duì)大部分抗真菌藥物產(chǎn)生多重耐藥性，這些使得白色念珠菌感染對(duì)人類健康產(chǎn)生更大的威脅。為了發(fā)現(xiàn)和開發(fā)低毒性和高治療活性的新型抗真菌劑，專家們?cè)噲D從天然產(chǎn)物（植物，動(dòng)物，微生物）中尋找。例如植物來源的姜黃素［15］，厚樸酚［16］，和厚樸酚［17］，檸檬烯［18］等對(duì)白色念珠菌生物膜的形成具有較好的抑制作用；動(dòng)物來源的蛙皮抗菌肽-S1可抑制白色念珠菌生物膜的形成［19］；微生物來源的土壤鏈霉菌菌株98%乙醇提取物［20］，冠霉素鏈霉菌ADP4乙酸乙酯粗提取物［21］、海洋細(xì)菌枯草芽孢桿菌的5-羥甲基-2-糠醛（5HM2F）［22］、糞腸球菌細(xì)菌素 EntV［23］等對(duì)白色念珠菌的生物膜也具有較好的抑制效果。天然衍生的化學(xué)抗真菌劑是一種有吸引力的選擇，特別是那些微生物衍生的分子，由于它們對(duì)機(jī)體的刺激性小，毒性小，同時(shí)也不易使病原菌發(fā)現(xiàn)采取防護(hù)措施。目前開發(fā)的大部分抗生素都源于放線菌，它被廣泛認(rèn)為是新抗生素產(chǎn)生菌群的重要菌種，是開發(fā)價(jià)值相當(dāng)高的一類微生物。

本實(shí)驗(yàn)以一株分離于新疆塔克拉瑪干沙漠流動(dòng)風(fēng)沙的放線菌為研究對(duì)象，采用微孔板半定量法檢測(cè)該菌株發(fā)酵液不同組分及粗蛋白對(duì)白色念珠菌ATCC 64550生物膜形成的影響，活性最好得部位為粗蛋白，其抑膜率達(dá)到88.12%，因此針對(duì)菌株TRM 43355發(fā)酵液粗蛋白抑制白色念珠菌生物膜形成做如下探究。

對(duì)放線菌TRM43355發(fā)酵液粗蛋白抑制白色念珠菌生物膜形成的最小抑膜濃度［24］進(jìn)行初步探索，測(cè)得菌株TRM43355代謝產(chǎn)物蛋白對(duì)白色念珠菌生物膜的最小抑膜濃度為2 mg/mL。并探究pH、溫度、金屬離子等不同理化因素對(duì)蛋白活性的影響。探究pH對(duì)蛋白活性的影響時(shí)發(fā)現(xiàn)通過不同pH處理后粗蛋白對(duì)白色念珠菌生物膜形成能力的影響并不大。pH值為3時(shí)處理的粗蛋白生物膜形成能力最低，其抑制膜活性最高，pH值為9時(shí)次之。探究溫度對(duì)蛋白活性的影響時(shí)發(fā)現(xiàn)當(dāng)粗蛋白經(jīng)過60℃水浴處理后生物膜形成能力最低，抑膜率達(dá)到90%以上，但是當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)經(jīng)過80℃以上高溫處理后抑膜的作用基本喪失，說明80℃以上的高溫環(huán)境能使活性蛋白失活，故此可判斷該蛋白不耐高溫。探究金屬離子對(duì)蛋白活性的影響時(shí)，首先探索金屬離子本身對(duì)生物膜的影響，發(fā)現(xiàn)錳離子本身對(duì)生物膜形成沒有影響，鐵離子和鋅離子濃度在小于或等于0.312 mmol/mL時(shí)對(duì)生物膜基本沒有影響，但Cu2+任何濃度對(duì)生物膜的形成有影響，經(jīng)查閱胡學(xué)偉等Cu2+對(duì)生物膜及其胞外聚合物的影響［25］，可知Cu2+會(huì)與生物膜上的胞外多糖結(jié)合，從而抑制了生物膜生長，與本實(shí)驗(yàn)結(jié)論相近，因此不討論銅離子對(duì)蛋白的活性影響。經(jīng)過鋅離子處理的蛋白抑制生物膜活性為最佳，錳離子次之，未處理組最差，說三種明金屬離子（Fe2+，Zn2+，Mn2+）均能促進(jìn)蛋白抑膜效果。以上結(jié)果和經(jīng)有機(jī)溶劑（乙酸乙酯，氯仿，石油醚，丙酮）處理過的蛋白效果相同，至于為什么加入金屬離子和不同有機(jī)溶劑能達(dá)到促進(jìn)的效果值得進(jìn)一步的研究。本論文的研究拓展了菌株TRM43355代謝產(chǎn)物蛋白有較高的抑制白色念珠菌生物膜形成的活性，并初步探索其蛋白質(zhì)經(jīng)不同理化因素處理后的活性變化，為尋找抑制白色念珠菌生物膜形成的活性物質(zhì)提供了更多的方向。