梁慧慧 李龍 張喜利 朱俊平 文雯 毛妍 周小江 李玲 陳乃宏 劉文龍

摘要：目的? 獲得玄參藥材及飲片有機(jī)氯農(nóng)藥殘留概貌，建立玄參有機(jī)氯農(nóng)藥殘留的限量標(biāo)準(zhǔn)。方法? 采用快速氣相色譜法檢測全國范圍內(nèi)10個代表產(chǎn)地的玄參藥材及7個產(chǎn)地（30批次）玄參飲片中21種有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量，考察99%置信區(qū)間，制定玄參有機(jī)氯農(nóng)藥殘留的限量標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果? 玄參樣品中21種有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量為0.000 1～0.077 7 μg/g，其中六六六、七氯、硫丹占農(nóng)藥殘留總量的93%～96%，擬定了玄參中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留國家限量標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)論? 玄參中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留主要為六六六、七氯、硫丹，制定的玄參有機(jī)氯農(nóng)藥殘留限量標(biāo)準(zhǔn)為總有機(jī)氯≤0.700 μg/g。

關(guān)鍵詞：玄參;有機(jī)氯;農(nóng)藥殘留;限量標(biāo)準(zhǔn);行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)

中圖分類號：R284.1??? 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A??? 文章編號：1005-5304（2019）08-0071-05

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2019.08.015????? 開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識碼（OSID）：

Abstract： Objective To obtain profile of residues of organochlorine pesticides in medicinal materials and decoction pieces of Scrophulariae Radix; To establish the limit standard for the residue of organochlorine pesticides. Methods Rapid gas chromatography was used to determine the residues of 21 organochlorine pesticides in medicinal materials of Scrophulariae Radix from ten producing areas of China and 30 batches of Scrophulariae Radix Decoction Pieces from seven producing areas. The 99% confidence interval was investigated， and the limit standard for organochlorine residue of Scrophulariae Radix was established. Results The determination of residues of 21 organochlorine pesticide in samples of Scrophulariae Radix was among 0.000 1–0.077 7 μg/g， and contents of BHC， heptachlor， and endosulfan occupying 93%–96% of total pesticide residue. The national industry standard for the limit of organochlorine pesticides was established. Conclusion The residues of organochlorine in Scrophulariae Radix are mainly BHC， heptachlor， and endosulfan. The limit standard of total organochlorine for Scrophulariae Radix was no higher than 0.700 μg/g.

Keywords： Scrophulariae Radix; organochlorine residues; pesticide residues; limit standard; industry standard

隨著人們健康意識的增強(qiáng)及中藥現(xiàn)代研究逐步深入，中藥安全性相關(guān)事件如含馬兜鈴酸致癌作用[1]及被重金屬、農(nóng)藥污染而引起中毒等受到極大關(guān)注。深入研究安全性問題是中藥現(xiàn)代化的必要環(huán)節(jié)。中藥材生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（GAP）對中藥標(biāo)準(zhǔn)提出了新的要求[2]。根據(jù)“先安全再有效”的思路，首先應(yīng)對中藥的安全性特別是因重金屬、農(nóng)藥殘留等外源性物質(zhì)引起的安全問題進(jìn)行研究并制定新的限量標(biāo)準(zhǔn)[3]。據(jù)此，國家中醫(yī)藥管理局設(shè)立了國家中藥標(biāo)準(zhǔn)化項(xiàng)目，旨在推動中藥產(chǎn)業(yè)鏈的標(biāo)準(zhǔn)化建設(shè)。玄參作為傳統(tǒng)常用中藥之一被列入其中。

玄參為玄參科植物玄參Scrophularia ningpoensis Hemsl.的干燥根，有滋陰、降火、生津、解毒等功效。目前玄參在我國分布很廣，主產(chǎn)于浙江、四川、湖南、江蘇、安徽、湖北、貴州等省。玄參在種植過程中易發(fā)生蟲害病變。針對其生長過程中的特點(diǎn)以及經(jīng)常出現(xiàn)的病蟲害，藥農(nóng)大多會施以不同農(nóng)藥[4]。一些農(nóng)藥可在短期內(nèi)降解為無害物質(zhì)，但絕大多數(shù)有機(jī)氯農(nóng)藥不易降解，容易富集而引起嚴(yán)重的神經(jīng)毒性和臟器毒性，對用藥者身體造成損害，甚至危及生命[5]。目前針對有機(jī)氯農(nóng)藥殘留，2015年版《中華人民共和國藥典》（以下簡稱《中國藥典》）的限定標(biāo)準(zhǔn)在0.20～3.00 μg/g[6]，此標(biāo)準(zhǔn)對土壤中難降解、藥材中易富集的有機(jī)氯農(nóng)藥限量過高，而歐盟、美國、日本的有機(jī)氯農(nóng)藥殘留標(biāo)準(zhǔn)在0.01～0.10 μg/g之間[7]。針對以上問題，本研究采用氣相色譜法快速測定全國范圍內(nèi)代表產(chǎn)地的玄參藥材和飲片中21種有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量，并對其分布及殘留規(guī)律進(jìn)行分析，以制定適合我國的玄參有機(jī)氯農(nóng)藥殘留限量標(biāo)準(zhǔn)。

1? 儀器與試藥

氣相色譜儀（GC2010 Plus），日本島津;自動進(jìn)樣器（AOC-20I），日本島津;氮吹儀（MTN-2800W），天津奧特賽恩斯儀器有限公司;離心機(jī)（H1850R），湖南湘儀實(shí)驗(yàn)儀器開發(fā)有限公司;精密電子天平（JA3003），上海恒平科學(xué)儀器有限公司。

玄參藥材、玄參飲片由藥圣堂（湖南）制藥有限公司統(tǒng)一采購，經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥學(xué)教研室周小江教授鑒定為玄參科植物玄參Scrophularia ningpoensis Hemsl.的干燥根，藥材產(chǎn)地分別為湖南新邵、湖南廉橋、安徽亳州、貴州六盤水、河南南陽、湖南龍山、湖北來鳳、四川雅安、四川北川、浙江磐安，飲片產(chǎn)地分別為湖南龍山（2批次）、浙江磐安（16批次）、四川雅安（1批次）、安徽亳州（1批次）、河北保定（1批次）、湖北來鳳（5批次）、河南南陽（4批次）。六氯苯、總六六六（α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC）、五氯硝基苯、七氯、艾氏劑、順式環(huán)氧七氯、反式環(huán)氧七氯、反式氯丹、順式氯丹、α-硫丹、狄氏劑、異狄氏劑、β-硫丹、硫丹硫酸鹽、總滴滴涕（pp′-DDE、pp′-DDD、op′-DDT、pp′-DDT）均購于農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測所，濃度100 μg/mL。

2? 方法與結(jié)果

2.1? 混合對照品溶液的制備

精密量取21種農(nóng)藥對照品適量，配制混合對照品貯備液（濃度均為1.0 μg/mL，異辛烷為溶劑）;分別精密量取混合對照品貯備液，用異辛烷配制成濃度分別為0.01、0.02、0.05、0.10、0.20、0.50 μg/mL的對照品溶液。

2.2? 供試品溶液的制備

取玄參粉末（過3號篩）1.5 g，精密稱定，按2015年版《中華人民共和國藥典》（四部）通則2341農(nóng)藥殘留量測定法的22種有機(jī)氯類農(nóng)藥殘留測定的樣品處理方法[6]進(jìn)行處理，用異辛烷定容至1 mL。每個產(chǎn)地藥材取3批次，在相同條件下重復(fù)配制供試品溶液。

2.3? 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱為RTX-5（5%二苯基、95%二甲基聚硅氧烷為固定液的熔融石英毛細(xì)管柱，30 m×0.25 mm，0.25 μm）;柱溫為程序升溫：初始溫度70 ℃，保持1 min，以22 ℃/min升至180 ℃，保持1 min，以40 ℃/min升至220 ℃，保持2 min，以0.8 ℃/min升至224 ℃，保持1 min，以2 ℃/min升至232 ℃，保持1 min，以1 ℃/min升至235 ℃，保持1 min，最后以40 ℃/min升溫至280 ℃，保持1 min;進(jìn)樣量為1 μL。該條件下，混合對照品及玄參藥材供試品色譜圖見圖1。

2.4? 最低檢測限考察

將混合對照品溶液不斷稀釋后測定，通過儀器的最低響應(yīng)值，獲得方法的最低檢測限（S/N=3），見表1。

2.5? 線性關(guān)系考察

分別精密吸取“2.1”項(xiàng)下配制的混合對照品溶液1 μL注入氣相色譜儀，按“2.1”項(xiàng)下氣相條件進(jìn)行測定，每個質(zhì)量濃度測定3次，以平均峰高為縱坐標(biāo)，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程，結(jié)果見表1。21種有機(jī)氯農(nóng)藥的線性范圍為0.01～0.50 μg/mL，決定系數(shù)為0.999 1～0.999 9，線性關(guān)系良好。

2.6? 精密度試驗(yàn)

精密吸取（0.05 μg/mL）混合對照品溶液1 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測定，計算得混合對照品各個峰面積的RSD為0.98～2.69%，表明儀器精密度良好。

2.7? 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱定湖南新邵玄參藥材粉末（過3號篩）10份，按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.3”項(xiàng)下條件進(jìn)行測定，計算各有機(jī)氯農(nóng)藥的RSD均在2.3%～9.8%，表明方法的重復(fù)性良好。

2.8? 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液（湖南新邵），按“2.3”項(xiàng)下色譜條件，于0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣，測定六氯苯、δ-六六六、順式環(huán)氧七氯、pp′-DDE色譜峰面積的RSD分別為1.93%、2.14%、3.14%、3.71%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9? 加樣回收率試驗(yàn)

稱取湖南新邵玄參藥材粉末6份，每份1.5 g，分別加入一定量濃度為0.05 μg/mL的混合對照品溶液，按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣測定，計算回收率。結(jié)果21種有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量的平均回收率為94.99%～111.00%，RSD為1.10%～3.21%，滿足農(nóng)藥殘留量分析的要求。

2.10? 樣品測定

取“2.2”項(xiàng)下10個代表產(chǎn)地玄參藥材的3份平行供試品溶液，按“2.3”項(xiàng)下條件進(jìn)樣測定，取3批平行樣品含量的平均值，農(nóng)藥殘留測定結(jié)果見表2。同法測定7個產(chǎn)地玄參飲片農(nóng)藥殘留，結(jié)果見表3。

2.11? 農(nóng)藥殘留限量標(biāo)準(zhǔn)制定

根據(jù)有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量測定結(jié)果，考察99%置信區(qū)間，使用—x±2.58SD進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，未檢測出的農(nóng)藥殘留以最低檢測限制定標(biāo)準(zhǔn)[8]，擬定玄參中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量國家限量標(biāo)準(zhǔn)（行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)），見表4。

3? 討論

我國藥材種植施用的農(nóng)藥種類繁多，按其理化性質(zhì)可分為有機(jī)氯類、有機(jī)磷類、氨基甲酸酯類和擬蟲菊酯類等，其中有機(jī)氯農(nóng)藥因在土壤中性質(zhì)穩(wěn)定且有脂溶性，降解極為緩慢，易被藥材富集導(dǎo)致其含量超標(biāo)[9]。玄參的揮發(fā)油含量較高，易吸收脂溶性的有機(jī)氯農(nóng)藥[10]。盡管我國早已禁止有機(jī)氯農(nóng)藥的施用，但土壤中殘留的有機(jī)氯農(nóng)藥被玄參富集吸收，含量仍然較高，患者服用玄參后，有機(jī)氯農(nóng)藥將在人體內(nèi)進(jìn)一步富集，從而產(chǎn)生積累性中毒。故考察玄參中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留并制定其限量標(biāo)準(zhǔn)十分必要。

本研究通過分析10個代表產(chǎn)地玄參藥材及7個產(chǎn)地玄參飲片中有機(jī)氯農(nóng)殘分布發(fā)現(xiàn)，藥材及飲片的有機(jī)氯農(nóng)藥殘留出現(xiàn)頻次及含量最多者均為δ-六六六，占?xì)埩艨偭康?0%～75%，藥材中δ-六六六、六氯苯、順式環(huán)氧七氯、硫丹硫酸鹽的殘留量之和占?xì)埩艨偭康?6%，飲片中δ-六六六、七氯、順式環(huán)氧七氯、β-硫丹、硫丹硫酸鹽的殘留量之和占?xì)埩艨偭康?3%，其余農(nóng)藥殘留較為分散且殘留量低。由此推測，農(nóng)藥δ-六六六、七氯、硫丹的性質(zhì)穩(wěn)定，極難代謝與降解。分析其原因，這些農(nóng)藥基本上為穩(wěn)定的苯環(huán)結(jié)構(gòu)，故苯環(huán)類結(jié)構(gòu)的農(nóng)藥不適用于中藥種植。

因有機(jī)氯農(nóng)藥對瘧疾、登革熱等傳染病有很好的預(yù)防作用，能有效殺滅傳染病菌的蚊蟲，故世界上仍有少數(shù)國家和地區(qū)在大量使用這類農(nóng)藥。鑒于控制瘧疾和減少有機(jī)氯農(nóng)藥使用之間的矛盾，使開發(fā)能替代有機(jī)氯的新型農(nóng)藥成為當(dāng)務(wù)之急，但在開發(fā)新型農(nóng)藥時，要牢記有機(jī)氯農(nóng)藥的啟示，具有穩(wěn)定苯環(huán)類結(jié)構(gòu)和其他穩(wěn)定結(jié)構(gòu)農(nóng)藥成分，不利于代謝與降解，應(yīng)避免此類農(nóng)藥的使用。

本研究中，玄參藥材選取10個代表產(chǎn)地進(jìn)行考察，如湖南、浙江等玄參道地產(chǎn)區(qū)，飲片抽取7個產(chǎn)地進(jìn)行檢測，其中浙江產(chǎn)地16批次，湖南產(chǎn)地2批次，占檢測批次的60%，同時檢測了河北玄參飲片，旨在找出除代表產(chǎn)地外的其他地區(qū)玄參中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留規(guī)律，結(jié)果顯示，河北產(chǎn)玄參的有機(jī)氯農(nóng)藥殘留含量明顯高于其他產(chǎn)地。河北不是玄參道地產(chǎn)區(qū)，種植規(guī)模較小，農(nóng)民連續(xù)種植的可能性較小，而玄參本身極易富集有機(jī)氯農(nóng)藥，故河北產(chǎn)地的玄參有機(jī)氯農(nóng)藥殘留含量較高，因其數(shù)據(jù)不具代表性，故不做標(biāo)準(zhǔn)制定用[11]。其他產(chǎn)地飲片和藥材的選取整體較為一致，數(shù)據(jù)來源可靠，故采用統(tǒng)計學(xué)方法，考察99%置信區(qū)間，制定了中藥玄參有機(jī)氯農(nóng)藥殘留的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)[12]。此行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)與歐盟、美國、日本的農(nóng)藥殘留標(biāo)準(zhǔn)基本一致，充分說明重新制定玄參有機(jī)氯農(nóng)藥殘留限量標(biāo)準(zhǔn)的必要性與合理性，為進(jìn)一步提高玄參的質(zhì)量奠定了基礎(chǔ)。

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（收稿日期：2018-11-26）

（修回日期：2018-12-13;編輯：陳靜）