頓佳穎　鄭鵬　李佳佳　馬遙　李春花

中圖分類(lèi)號(hào) R284.2 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2019）16-2210-06

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2019.16.10

摘 要 目的：優(yōu)化經(jīng)典名方桃核承氣湯的水提取工藝。方法：在單因素考察的基礎(chǔ)上，結(jié)合響應(yīng)面法與信息熵理論，對(duì)浸泡時(shí)間、料液比、提取總時(shí)間進(jìn)行考察，以桃核承氣湯中苦杏仁苷、大黃酸、桂皮醛、甘草酸的含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用信息熵理論對(duì)各評(píng)價(jià)指標(biāo)賦予權(quán)重系數(shù)，并計(jì)算綜合評(píng)分。通過(guò)Design-Expert 10軟件分析各因素間的交互作用，得出優(yōu)化的水提取工藝，并對(duì)該優(yōu)化工藝進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)。結(jié)果：根據(jù)信息熵理論將大黃酸、苦杏仁苷、甘草酸、桂皮醛的權(quán)重系數(shù)確定為0.097 6、0.363 2、0.173 5、0.365 7;交互作用分析結(jié)果顯示，料液比對(duì)綜合評(píng)分影響較大。桃核承氣湯水提取工藝最佳工藝條件為浸泡時(shí)間60 min、料液比1 ∶ 10（g/mL）、提取總時(shí)間130 min（提取3次，每次分別提取65、33、32 min）;驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果顯示，各指標(biāo)成分含量及綜合評(píng)分RSD均小于3%。結(jié)論：優(yōu)化所得的水提取工藝穩(wěn)定、可行，可為桃核承氣湯的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞 桃核承氣湯;響應(yīng)面法;信息熵理論;綜合評(píng)分;水提取工藝;工藝優(yōu)化

Optimization of Water Extraction Technology of Taohe Chengqi Decoction by Response Surface Methodology Combined with Information Entropy Theory

DUN Jiaying1，ZHENG Peng1，LI Jiajia2，MA Yao1，LI Chunhua1，3（1. Teaching and Research Section of Pharmacy， College of Pharmacy， Hebei University of Traditional Chinese Medicine， Shijiazhuang 050090， China; 2. Dept. of Pharmacy， Shijiazhuang Forth Hospital， Shijiazhuang 050011， China; 3. Hebei Higher Education Institute Applied Technology Research Center on TCM Formula Preparation， Shijiazhuang 050090， China）

ABSTRACT? ?OBJECTIVE： To optimize the water extraction technology of classic formula Taohe chengqi decoction. METHODS： Based on single factor test， combined with response surface methodology and information entropy theory， the soaking time， solid-liquid ratio and extraction time were investigated. Using the contents of rhein， amygdalin， cinnamaldehyde and glycyrrhizic acid in Taohe chengqi decoction as indexes， information entropy theory was used to assign weight coefficients to each evaluation index and calculate the comprehensive score. Through Design-Expert 10 software， the interactions of each factor were analyzed. Water extraction technology was optimized， and validation test was also performed. RESULTS： According to information entropy theory， the weight coefficients of rhein， amygdalin， glycyrrhizic acid and cinnamaldehyde were located at 0.097 6， 0.363 2， 0.173 5 and 0.365 7. The results of interaction analysis showed that the material-liquid ratio had a greater impact on the comprehensive score. The optimal water extraction technology of Taohe chengqi decoction were determined as that soaking time was 60 min; the ratio of material to liquid was 1 ∶ 10 （g/mL）; total extraction time was 130 min （extracting for 3 times， lasting for 65， 33， 32 min each time）. The results of verification test showed that RSD of content of each index component and the comprehensive score was less than 3%. CONCLUSIONS： The optimal water extraction technology is proved to be stable and feasible， which can provide the basis for the further development and utilization of Taohe chengqi decoction.

KEYWORDS? ?Taohe chengqi decoction; Response surface methodology;Information entropy theory; Comprehensive score; Water extraction technology; Technology optimization

桃核承氣湯原方出自張仲景《傷寒論》辨太陽(yáng)病脈證并治太陽(yáng)病證篇，其由桃仁、大黃、桂枝、芒硝、炙甘草5味藥材組成，主要功用為瀉熱逐瘀，主治下焦蓄血證[1]。方中桃仁與大黃合用，瘀熱并治共為君藥;桂枝溫通經(jīng)脈，芒硝瀉熱軟堅(jiān)，共為臣藥;炙甘草護(hù)胃安中為佐，并緩諸藥之峻烈[2]。桃核承氣湯組方精簡(jiǎn)，臨床上應(yīng)用廣泛，在國(guó)家中醫(yī)藥管理局發(fā)布的《古代經(jīng)典名方目錄（第一批）》中位于100首經(jīng)典方劑之首[3]?，F(xiàn)代醫(yī)藥學(xué)研究表明，該方多用于治療急性腦出血、急性腦卒中、腦梗死急性期、多發(fā)性腦梗塞、腦出血術(shù)后并發(fā)癥、糖尿病并發(fā)腦梗死、肝性腦病、高脂血癥、高半胱氨酸血癥等;其原方或加減方亦可用于治療慢性肺源性心臟病、老年癡呆、精神分裂癥、焦慮癥、阿爾茨海默病等由瘀熱互結(jié)所致疾病[4]。

目前，《古代經(jīng)典名方目錄（第一批）》中詳細(xì)記載了桃核承氣湯的方名、出處、處方、制法及用法[3]，但由于古今制劑方式的更迭變化和現(xiàn)代市場(chǎng)應(yīng)用的需要，對(duì)其現(xiàn)代提取工藝的優(yōu)化已成為該方劑進(jìn)一步開(kāi)發(fā)應(yīng)用亟待解決的關(guān)鍵問(wèn)題。現(xiàn)代藥理研究表明，桃仁、大黃、桂枝、甘草的主要活性成分分別為苦杏仁苷、大黃酸、桂皮醛、甘草酸[5-8]?；诖?，本課題組以上述4種成分含量為指標(biāo)，在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，采用響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)[9]進(jìn)一步優(yōu)化工藝，根據(jù)信息熵理論[10-12]對(duì)該方中4種主要指標(biāo)性成分的含量賦予權(quán)重系數(shù)并計(jì)算綜合評(píng)分，同時(shí)對(duì)各因素的交互作用進(jìn)行分析，最終確定該方的最佳水提取工藝，為桃核承氣湯以及相關(guān)經(jīng)典名方的現(xiàn)代工藝研究提供參考。

1 材料

1.1 儀器

e2695型高效液相色譜（HPLC）儀，包括2489型紫外-可見(jiàn)光檢測(cè)器（美國(guó)Waters公司）;TG328B型電子分析天平（上海精科儀器廠）;KQ-100E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;RE-52型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）;SAS 67120型超純水系統(tǒng)（法國(guó)Millipore公司）。

1.2 藥品與試劑

大黃酸對(duì)照品（批號(hào)：MUST-11032801，純度：98%）、甘草酸對(duì)照品（批號(hào)：MUST-17032205，純度：99.55%）均購(gòu)自成都曼斯特生物科技有限公司;苦杏仁苷對(duì)照品（成都草源康生物科技有限公司，批號(hào)：Z1709131，純度：98%）;桂皮醛對(duì)照品（上海源葉生物科技有限公司，批號(hào)：H02M6Q1，純度：98%）;乙腈、甲醇為色譜純，磷酸為分析純，水為自制超純水。

1.3 藥材

各藥材飲片均購(gòu)于河北省石家莊市樂(lè)仁堂藥店。經(jīng)河北中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院侯芳潔副教授鑒定，桃仁為薔薇科植物桃[Prunus persica（L.）Batsch]的干燥成熟種子，大黃為蓼科植物掌葉大黃（Rheum palmatum L.）的干燥根及根莖，桂枝為樟科植物肉桂（Cinnamomum cassia Presl）的干燥嫩枝，甘草為豆科植物甘草（Glycyrrhiza uralensis Fisch.）的干燥根及根莖，芒硝為硫酸鹽類(lèi)礦物芒硝族芒硝經(jīng)加工精制而成的結(jié)晶體。

2 方法與結(jié)果

2.1 桃核承氣湯水提液制備

按原方處方比例[1]稱(chēng)取桃仁1.5 g、大黃6 g、桂枝3 g、炙甘草3 g、芒硝3 g;前4味藥混合后，按一定料液比加入水浸泡，在首次煎煮前補(bǔ)足飲片吸水量，煎煮3次，濾過(guò);合并濾液，加入芒硝后繼續(xù)煎煮約1 min使其充分溶解;采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器在70 ℃減壓濃縮上述濾液至50 mL，即得桃核承氣湯水提液，備用。

2.2 HPLC法測(cè)定4種指標(biāo)性成分的含量

2.2.1 大黃酸、甘草酸含量測(cè)定色譜條件 色譜柱：Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）;流動(dòng)相：乙腈（A）-0.1%磷酸水溶液（B），梯度洗脫（0～20 min，10%A→40%A;20～30 min，40%A→50%A;30～70 min，50%A→10%A）;流速：1.0 mL/min;進(jìn)樣量：10 μL;柱溫：30 ℃;檢測(cè)波長(zhǎng)：250 nm。

2.2.2 苦杏仁苷、桂皮醛含量測(cè)定色譜條件 色譜柱：Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）;流動(dòng)相：乙腈（A）-水（B），梯度洗脫（0～10 min，10%A;10～20 min，10%A→20%A;20～30 min，20%A;30～60 min，20%A→45%A;60～70 min，45%A→10%A）;流速：1.0 mL/min;進(jìn)樣量：10 μL;柱溫：30 ℃;檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm（苦杏仁苷）、290 nm（桂皮醛）。

2.2.3 混合對(duì)照品溶液制備 稱(chēng)取大黃酸、苦杏仁苷、甘草酸、桂皮醛對(duì)照品各適量，精密稱(chēng)定，分別置于5 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，制成上述成分質(zhì)量濃度分別為1 340、160、880、290 μg/mL的單一對(duì)照品貯備液。精密吸取上述各貯備液適量，置于同一10 mL量瓶中，加甲醇稀釋并定容至刻度，搖勻，制成上述成分質(zhì)量濃度分別為340、120、220、70 μg/mL的混合對(duì)照品溶液。

2.2.4 供試品溶液制備 精密吸取“2.1”項(xiàng)下桃核承氣湯水提液樣品1 mL，置于5 mL量瓶中，加甲醇稀釋并定容至刻度，搖勻，靜置，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.5 專(zhuān)屬性試驗(yàn) 取“2.2.3”項(xiàng)下單一對(duì)照品貯備液、“2.2.4”項(xiàng)下供試品溶液，分別按“2.2.1”“2.2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，色譜見(jiàn)圖1。結(jié)果顯示，在上述色譜條件下，理論板數(shù)以苦杏仁苷峰計(jì)不低于3 000，4種待測(cè)成分之間及其與雜質(zhì)峰之間的分離度均大于1.5，能實(shí)現(xiàn)基線(xiàn)分離，且互不干擾，表明本方法專(zhuān)屬性均良好。

2.2.6 線(xiàn)性關(guān)系考察 分別稱(chēng)取大黃酸、苦杏仁苷、甘草酸、桂皮醛對(duì)照品適量，以甲醇配制成系列線(xiàn)性梯度溶液，按“2.2.1” “2.2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣不同體積進(jìn)行測(cè)定。以待測(cè)成分進(jìn)樣量（x，μg）為橫坐標(biāo)、峰面積（y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線(xiàn)性回歸，結(jié)果表明上述成分在相應(yīng)進(jìn)樣量范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好。回歸方程與線(xiàn)性范圍詳見(jiàn)表1。

2.2.7 精密度試驗(yàn) 精密吸取“2.2.3”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液適量，按“2.2.1” “2.2.2”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄峰面積。結(jié)果，大黃酸、苦杏仁苷、甘草酸、桂皮醛峰面積的RSD分別為0.79%、0.77%、0.92%、0.87%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液（水提液制備日期：20180615）適量，分別于室溫下放置0、2、4、6、8、12 h時(shí)，按“2.2.1” “2.2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果，大黃酸、苦杏仁苷、甘草酸、桂皮醛峰面積的RSD分別為1.32%、2.12%、1.66%、2.84%（n=6），表明供試品溶液在室溫下放置12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.9 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批水提液樣品（制備日期：20180615）適量，平行6份，按“2.2.4”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.2.1” “2.2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并按標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)法計(jì)算4種成分的含量。結(jié)果，大黃酸、苦杏仁苷、甘草酸、桂皮醛含量的RSD分別為2.23%、1.44%、0.85%、1.59%（n=6），表明該方法重復(fù)性良好。

2.2.10 加樣回收率試驗(yàn) 精密量取已知含量的水提液樣品1 mL，平行6份，分別均加入“2.2.3”項(xiàng)下大黃酸、苦杏仁苷、甘草酸、桂皮醛單一對(duì)照品貯備液適量，按“2.2.4”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.2.1” “2.2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，按標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)法計(jì)算含量并計(jì)算加樣回收率，結(jié)果表明方法準(zhǔn)確度良好，詳見(jiàn)表2。

2.3 桃核承氣湯水提取工藝的單因素考察

2.3.1 浸泡時(shí)間 按“2.1”項(xiàng)下處方比例稱(chēng)取各藥材，平行5份，固定料液比1 ∶ 10（g/mL）、提取總時(shí)間90 min，設(shè)置浸泡時(shí)間分別為0、20、40、60、80 min，按“2.1”項(xiàng)下方法進(jìn)行提取。取所得水提液樣品，按“2.2.4” 項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.2.1”“2.2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以直接提?。唇輹r(shí)間為0 min）條件下所測(cè)得各成分的峰面積為基準(zhǔn)，計(jì)算不同浸泡時(shí)間條件下測(cè)得的各成分峰面積比值（以表示含量高低，下同）[10]，繪制折線(xiàn)圖，見(jiàn)圖2A。由圖2A可知，大黃酸含量在浸泡時(shí)間為0～60 min的條件下呈上升趨勢(shì)，在60～80 min的條件下呈下降趨勢(shì);苦杏仁苷、甘草酸、桂皮醛含量在浸泡時(shí)間為0～40 min的條件下呈上升趨勢(shì)，在40～80 min的條件下呈下降趨勢(shì)。因此，本研究選擇浸泡時(shí)間為20、40、60 min進(jìn)行后續(xù)工藝優(yōu)化。

2.3.2 料液比 按“2.1”項(xiàng)下處方比例稱(chēng)取各藥材，平行5份，固定浸泡40 min、提取總時(shí)間90 min，設(shè)置料液比分別為1 ∶ 6、1 ∶ 8、1 ∶ 10、1 ∶ 12、1 ∶ 14（g/mL），按“2.1”項(xiàng)下方法進(jìn)行提取。取所得水提液樣品，按“2.2.4”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.2.1”“2.2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以料液比1 ∶ 6（g/mL）的條件下所測(cè)得各成分的峰面積為基準(zhǔn)，計(jì)算不同料液比條件下測(cè)得的各成分峰面積比值[10]，繪制折線(xiàn)圖，見(jiàn)圖2B。由圖2B可知，在料液比為1 ∶ 6～1 ∶ 14（g/mL）的條件下，大黃酸含量均呈上升趨勢(shì)，甘草酸、桂皮醛含量呈下降趨勢(shì);苦杏仁苷含量在料液比為1 ∶ 6～1 ∶ 8（g/mL）的條件下呈上升趨勢(shì)，在1 ∶ 8～1 ∶ 14（g/mL）的條件下呈下降趨勢(shì)。因此，本研究選擇料液比為1 ∶ 6、1 ∶ 8、1 ∶ 10（g/mL）進(jìn)行后續(xù)工藝優(yōu)化。

2.3.3 提取總時(shí)間 按“2.1”項(xiàng)下處方比例稱(chēng)取各藥材，平行5份，固定浸泡40 min、料液比1 ∶ 10（g/mL），設(shè)置提取總時(shí)間分別為30、60、90、120、150 min，按“2.1”項(xiàng)下方法進(jìn)行提取。取所得水提液樣品，按“2.2.4” 項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.2.1”“2.2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以提取總時(shí)間30 min條件下所測(cè)得各成分的峰面積為基準(zhǔn)，計(jì)算不同條件下各成分峰面積比值[10]，繪制折線(xiàn)圖，見(jiàn)圖2C。由圖2C可知，大黃酸、苦杏仁苷含量在總提取時(shí)間為30～120 min的條件下，隨提取時(shí)間的增加而相應(yīng)升高，在120 min以上時(shí)則隨提取時(shí)間的增加而呈下降趨勢(shì);甘草酸含量在總提取時(shí)間為30～90 min的條件下隨提取時(shí)間的增加而呈上升趨勢(shì)，在90～150 min的條件下則隨提取時(shí)間的增加而呈下降趨勢(shì);桂皮醛含量在總提取時(shí)間為30～150 min的條件下均呈上升趨勢(shì)。因此，本研究選擇提取時(shí)間為90、120、150 min進(jìn)行后續(xù)工藝優(yōu)化。

2.3.4 提取次數(shù) 本研究在前期預(yù)試驗(yàn)中固定浸泡時(shí)間60 min、料液比1 ∶ 10（g/mL）、提取總時(shí)間120 min，對(duì)提取次數(shù)進(jìn)行考察。結(jié)果顯示，提取3次時(shí)，各目標(biāo)成分整體含量較高，故將提取次數(shù)確定為3次，并按常規(guī)提取工藝慣例，以2 ∶ 1 ∶ 1的比例分配各次提取時(shí)間。

2.4 桃核承氣湯水提取工藝優(yōu)化

在單因素考察的基礎(chǔ)上，結(jié)合響應(yīng)面法與信息熵理論對(duì)該方水提取工藝進(jìn)一步優(yōu)化。

2.4.1 響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì) 根據(jù)響應(yīng)面試驗(yàn)組合設(shè)計(jì)原理[13]，以浸泡時(shí)間（A）、料液比（B）、提取總時(shí)間（C）為考察因素，以4種成分含量計(jì)算所得綜合評(píng)分（M）為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用3因素3水平響應(yīng)面試驗(yàn)進(jìn)行設(shè)計(jì)。因素和水平見(jiàn)表3，響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果見(jiàn)表4。

2.4.2 綜合評(píng)分的計(jì)算 以響應(yīng)面試驗(yàn)測(cè)得的大黃酸、苦杏仁苷、甘草酸、桂皮醛含量為指標(biāo)，采用信息熵法對(duì)各指標(biāo)進(jìn)行賦值并計(jì)算M，根據(jù)文獻(xiàn)[14-15]建立原始評(píng)價(jià)指標(biāo)的矩陣（X）如下：

根據(jù)公式Pij=Xij/∑Xij計(jì)算Pij（i、j分別表示矩陣的行、列），將原始評(píng)價(jià)指標(biāo)矩陣（X）轉(zhuǎn)化為概率矩陣（P）如下：

根據(jù)公式Hi=-（[∑][i=1][n]PijlnPij）/lnn，計(jì)算各指標(biāo)的信息熵（Hi），結(jié)果Hi=[0.992 4 0.971 5 0.986 4 0.901 4]，再根據(jù)公式Wi=（1-Hi）/[[∑][i=1][m]（1-Hi）]計(jì)算第i項(xiàng)指標(biāo)的權(quán)重系數(shù)（Wi），結(jié)果Wi=[0.097 6 0.363 2 0.173 5 0.365 7]，分別對(duì)應(yīng)大黃酸、苦杏仁苷、甘草酸、桂皮醛。

對(duì)于m行n列的概率矩陣，其綜合評(píng)分計(jì)算公式為：Mm=P1mW1+P2mW2+P3mW3+……+PnmWn。因大黃酸、苦杏仁苷、甘草酸、桂皮醛的權(quán)重系數(shù)分別為0.097 6、0.363 2、0.173 5、0.365 7，因此對(duì)概率矩陣中數(shù)據(jù)進(jìn)行加權(quán)處理，得M=大黃酸含量×0.097 6+苦杏仁苷含量×0.363 2+甘草酸含量×0.173 5+桂皮醛含量×0.365 7，結(jié)果見(jiàn)表4。

2.4.3 模型擬合與方差分析 通過(guò) Design-Expert10軟件分析試驗(yàn)結(jié)果，以綜合評(píng)分（M）為響應(yīng)值，得到其對(duì)浸泡時(shí)間（A）、料液比（B）、提取總時(shí)間（C）的二次多項(xiàng)式回歸擬合方程：M=0.053-5.238×10-3A+0.020B-6.750×10-4C+0.012AB+7.100×10-3AC-1.350×10-3BC+0.012A2-4.275×10-4B2-7.453×10-3C2，方差分析結(jié)果見(jiàn)表5。由表5可知，建立的回歸方程模型P=0.032 2<0.05，表明此方程模型具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性;失擬項(xiàng)P=0.420 6>0.05，表明失擬項(xiàng)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。由此表明，本回歸方程模擬度較好、試驗(yàn)誤差較小，所建方程模型具有參考性，可用于桃核承氣湯水提取工藝的理論預(yù)測(cè)。各因素對(duì)該水提取工藝的影響程度大小排序依次為B>A>C，即料液比>浸泡時(shí)間>提取總時(shí)間，其中僅料液比的影響具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

2.4.4 各因素間交互影響分析 對(duì)表4中試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行響應(yīng)面分析，固定其中某個(gè)因素水平，就另外2個(gè)因素間兩兩交互作用對(duì)綜合評(píng)分的影響進(jìn)行分析，同時(shí)采用Design-Expert 10軟件作圖，可得任意2個(gè)因素間交互作用的三維曲面圖，曲面坡度越大，則表明該因素對(duì)綜合評(píng)分影響越大，詳見(jiàn)圖3。由圖3可知，料液比與提取時(shí)間交互作用較顯著，且料液比對(duì)綜合評(píng)分的影響較大，隨著料液比的增大，綜合評(píng)分隨之增加。

通過(guò)Design-Expert10軟件分析，得桃核承氣湯最佳水提取工藝條件為：浸泡時(shí)間59.58 min，料液比1 ∶ 10.11（g/mL），提取總時(shí)間130.25 min;綜合評(píng)分為0.095 2。考慮到可操作性，并結(jié)合單因素試驗(yàn)結(jié)果，最終將優(yōu)化工藝確定為浸泡時(shí)間60 min、料液比1 ∶ 10（g/mL）、提取總時(shí)間130 min（提取3次，每次分別提取65、33、32 min）。

2.4.5 驗(yàn)證試驗(yàn) 按“2.4.4”項(xiàng)下所得優(yōu)化工藝進(jìn)行3次水提取驗(yàn)證試驗(yàn)。結(jié)果顯示，各指標(biāo)成分含量及綜合評(píng)分的RSD均小于3%，表明優(yōu)化的水提取工藝穩(wěn)定可行，詳見(jiàn)表6。

3 討論

3.1 對(duì)佐藥“炙甘草”的考證

桃核承氣湯原方出自東漢時(shí)期張仲景的論著《傷寒論》，但書(shū)中對(duì)桃核承氣湯組成藥物“炙甘草”的具體制法并未明確描述，所以其具體炮制方法一直備受爭(zhēng)議。唐宋以前并無(wú)蜜炙甘草的明確記載，直至宋代《太平惠民和劑局方》中才出現(xiàn)了蜜炙甘草的記載。經(jīng)考證，《傷寒論》中的“炙甘草”應(yīng)為炒甘草，即“炙”寓意為直火加熱[16]。因此，本課題組對(duì)甘草的不同炮制品進(jìn)行了預(yù)試驗(yàn)，測(cè)定桃核承氣湯中甘草酸含量，結(jié)果顯示炙甘草中的甘草酸含量明顯高于生甘草與蜜炙甘草中的甘草酸含量，進(jìn)一步驗(yàn)證了《傷寒論》中炙甘草應(yīng)為炒甘草而非蜜炙甘草。

3.2 芒硝加入方式的選擇

芒硝屬于無(wú)機(jī)鹽類(lèi)，主要成分為硫酸鈉，另含硫酸鎂、氯化鈉等物質(zhì)，臨床在調(diào)配含芒硝的處方時(shí)，通常會(huì)有沖服、后下、溶化等腳注[17]。據(jù)《傷寒論》記載，桃核承氣湯的原方用法為“上藥四味，以水七升，煮取二升半，去滓，內(nèi)芒硝，更上火，微沸，下火，先食，溫服五合，每天三服，當(dāng)微利” [1]。因此，本研究在水提取工藝中選擇的芒硝加入方式與古代醫(yī)籍記載一致，即在過(guò)濾后的藥液中加入芒硝并上火微沸。后期本課題組還擬將桃核承氣湯開(kāi)發(fā)成顆粒劑、口服液等制劑，并將進(jìn)一步考察芒硝的加入方式及其對(duì)復(fù)方的影響。

3.3 工藝優(yōu)化中指標(biāo)成分的選擇

中藥復(fù)方制劑通常由多味藥物組成，成分復(fù)雜，其治療效果是由多種活性成分協(xié)同發(fā)揮作用的結(jié)果，因此要對(duì)其提取工藝進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，就要全面選取其主要有效成分進(jìn)行綜合評(píng)分研究。經(jīng)現(xiàn)代藥理研究表明，桃仁具有抗凝血、抗炎、抗氧化、抗腫瘤及增強(qiáng)免疫力等作用，主要活性成分為苦杏仁苷[5];大黃具有抗病毒、抗腫瘤、止血及增強(qiáng)免疫力等作用，主要活性成分為大黃酸[6];桂枝具有解熱鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、抗驚厥、擴(kuò)血管等作用，主要活性成分為桂皮醛[7];甘草具有抗心律失常、抗炎、鎮(zhèn)痛、增強(qiáng)免疫力等作用，主要活性成分為甘草酸[8]。因此，本研究選取桃核承氣湯中大黃酸、苦杏仁苷、甘草酸、桂皮醛為指標(biāo)對(duì)提取工藝進(jìn)行綜合評(píng)分，既可兼顧指標(biāo)間的協(xié)同作用，又符合中醫(yī)用藥的整體觀念。

3.4 信息熵理論的應(yīng)用

信息熵源于C.E.香農(nóng)熱力學(xué)，其中熱熵用來(lái)呈現(xiàn)分子狀態(tài)的混亂水平，香農(nóng)以信息熵來(lái)描述信源的不確定度，不確定度越高，則所包含的信息就越多[18]。桃核承氣湯組方精簡(jiǎn)，有效成分明確，可對(duì)多個(gè)指標(biāo)性成分進(jìn)行含量測(cè)定。以往研究對(duì)多個(gè)檢測(cè)指標(biāo)通常按方劑“君、臣、佐、使”原則賦予權(quán)重系數(shù)，然后采用加權(quán)法計(jì)算綜合評(píng)分[9，19-20]。該賦權(quán)法雖計(jì)算方法簡(jiǎn)單，但主觀性較大、嚴(yán)謹(jǐn)性不足。因此，本課題組在處理響應(yīng)面試驗(yàn)數(shù)據(jù)的過(guò)程中，運(yùn)用信息熵理論對(duì)指標(biāo)性成分賦予權(quán)重系數(shù)，能更客觀、清楚地反映出各成分在不同提取條件下的變化規(guī)律[12]，同時(shí)也可避免指標(biāo)數(shù)據(jù)間的相互影響，還在一定程度上減少了主觀因素對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的干擾，提高試驗(yàn)結(jié)果的嚴(yán)謹(jǐn)性與科學(xué)性[11-12]。

綜上所述，本研究?jī)?yōu)化所得的水提取工藝穩(wěn)定、可行，可為桃核承氣湯的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供基礎(chǔ)。

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（收稿日期：2019-03-12 修回日期：2019-07-04）

（編輯：段思怡）