李珍 楊洋 孟美英 肖斌

中圖分類號 R926 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號 1001-0408（2019）01-0088-06

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2019.01.19

摘 要 目的：建立蒙藥圓柏的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為其質(zhì)量控制提供參考。方法：收集內(nèi)蒙古地區(qū)的圓柏藥材，共9批。觀察圓柏樣品的性狀并對其枝葉橫切面和粉末進(jìn)行顯微鑒別；采用薄層色譜（TLC）法對圓柏樣品進(jìn)行定性分析；按2015年版《中國藥典》（四部）通則方法測定圓柏樣品中水分、總灰分、酸不溶性灰分含量和醇溶性浸出物含量；采用高效液相色譜法測定圓柏樣品中槲皮苷和穗花杉雙黃酮含量。結(jié)果：圓柏小枝呈圓柱形或四菱形，刺葉長短不等，呈深綠色或黃綠色；顯微觀察發(fā)現(xiàn)，鱗葉表皮細(xì)胞排列整齊、鱗葉中部有較大空腔、海綿組織細(xì)胞較大，表皮細(xì)胞類長方形，氣孔較多，保衛(wèi)細(xì)胞較大；TLC結(jié)果顯示，在對照品（槲皮苷和蘆?。┥V相應(yīng)位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；9批樣品中水分含量為3.2%～5.6%，總灰分含量為3.4%～5.8%，酸不溶性灰分含量均不超過0.8%，醇溶性浸出物含量為28.0%～33.8%，槲皮苷含量為0.11%～0.28%，穗花杉雙黃酮含量為0.15%～0.25%。結(jié)論：初步擬定圓柏中水分含量不得超過8.0%、總灰分含量不得超過7.0%、醇溶性浸出物含量不得低于24.0%、槲皮苷含量不得低于0.11%、穗花杉雙黃酮含量不得低于0.15%，制訂的標(biāo)準(zhǔn)可用于圓柏藥材的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞 蒙藥；圓柏；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；薄層色譜鑒別；高效液相色譜法；含量測定

Study on Quality Standard of Mongolia Medicine Sabina vulgaris

LI Zhen1，YANG Yang1，MENG Meiying1，XIAO Bin2（1.Ordos Testing&Research Center of Drug and Medical Devices， Inner Mongolia Ordos 017000， China；2.Clinical Pharmacy Laboratory， Ordos Central Hospital， Inner Mongolia Ordos 017000， China）

ABSTRACT OBJECTIVE： To establish the quality standard of Sabina vulgaris， and to provide reference for its quality control. METHODS： Totally 9 batches of S. vulgaris were collected from Inner Mongolia area. The characteristics of S. vulgaris samples were observed and microscopic identification was conducted for the transverse section and powder of its branches and leaves. TLC was used for qualitative analysis of S. vulgaris. The contents of water， total ash， acid-insoluble ash and alcohol-soluble extract in S. vulgaris were determined according to the method stated in 2015 edition of Chinese Pharmacopeia （part Ⅳ）. The contents of quercetin and amentoflavone in S. vulgaris were determined by HPLC. RESULTS： The branchlets of S. vulgaris were cylindrical or rhombic， with varying length of thorns， dark green or yellowish green. The microscopic observation showed that the epidermal cells of scale leaves were arranged orderly； there were larger cavities in the middle of scale leaves， large cells in spongy tissue； epidermal cells were rectangular with more stomata and large guard cells. Results of TLC showed that the spots of the same color were found in the corresponding positions of chromatogram for substance control （dendrooside and rutin）. In the 9 batch of samples， the contents of water were 3.2%-5.6%； the contents of total ash were 3.4%-5.8%； the contents of acid-insoluble ash were lower than 0.8%； the contents of alcohol-soluble extract were 28.0%-33.8%； the contents of quercetin were 0.11%-0.28%； the contents of amentoflavone were 0.15%-0.25%. CONCLUSIONS： It is preliminarily proposed that the content of water in S. vulgaris is not more than 8.0%； the content of total ash is not more than 7.0%； the content of alcohol-soluble extract is not less than 24.0%； the content of quercetin is not less than 0.11%； the content of amentoflavone is not less than 0.15%. Established standard can be used for the quality control of S. vulgaris.

KEYWORDS Mongolia medicine； Sabina vulgaris； Quality standard； TLC identification； HPLC； Content determination

圓柏為蒙醫(yī)經(jīng)驗(yàn)用蒙藥材，蒙藥名為烏赫日-阿日查，收載于《中國植物志》第七卷和《內(nèi)蒙古植物志》第一卷，為柏科植物叉子圓柏（Sabina vulgaris Antoine）的干燥嫩枝葉，長于海拔1 100～2 800 m（青?？蛇_(dá)3 300 m）地帶的多石山坡、針葉樹或針葉樹與闊葉樹混交林內(nèi)以及砂丘上，多分布于新疆天山至阿爾泰山、寧夏賀蘭山、內(nèi)蒙古、青海東北部、甘肅祁連山北坡及古浪、景泰、靖遠(yuǎn)以及陜西北部榆林等地[1-2]，在內(nèi)蒙古自治區(qū)的阿拉善盟、錫林郭勒盟及鄂爾多斯市等地分布甚廣。內(nèi)蒙圓柏枝葉入藥，能祛風(fēng)濕、活血止痛，主治風(fēng)濕、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、皮膚瘙癢等[2]，有一定開發(fā)價(jià)值。目前尚未見國內(nèi)學(xué)者對內(nèi)蒙圓柏藥材化學(xué)成分、生理活性以及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究報(bào)道，國家標(biāo)準(zhǔn)和地方標(biāo)準(zhǔn)也均未見收載內(nèi)蒙圓柏藥材。鑒于此，筆者對蒙藥圓柏進(jìn)行了初步研究，并起草了相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為有效控制該藥材質(zhì)量提供依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

DM3000型顯微鏡（德國萊卡公司）；AL204-IC型電子天平、PB211D型電子天平（北京賽多利斯天平有限公司）；KQ-5200DE型超聲清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）； U3000型高效液相色譜（HPLC）儀，包括二極管陣列檢測器（DAD）[賽默飛世爾科技（中國）有限公司]；1260型HPLC儀，包括DAD（美國Agilent公司）。

1.2 藥品與試劑

9批圓柏藥材采自內(nèi)蒙古阿拉善盟和鄂爾多斯市（編號1～9號），其中，1、2號樣品均采摘自阿拉善盟賀蘭山（批號：20160901、20150923）、3號樣品采摘自阿左旗（批號：20170516）、4～9號樣品采摘自鄂爾多斯市（批號：分別為20170530、20170615、20170616、20170723、20170830、20170906），上述樣品由內(nèi)蒙古藥品檢驗(yàn)研究院主任蒙藥師康雙龍、內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)教授那圣桑以及內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院的主任蒙藥師沙仁高娃等鑒定，確認(rèn)為柏科植物叉子圓柏真品；蘆丁對照品、槲皮苷對照品、穗花杉雙黃酮對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：分別為100080-201610、111538-201105、111902- 201603，純度：分別為91.9%、92.7%、97.7%）；乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 性狀描述

圓柏小枝呈圓柱形或四棱形，刺葉長短不等，呈深綠色或黃綠色，直徑1～4 mm。鱗葉呈卵形，交互對生，長1～5 mm，背部的橢圓形腺體位于近基部、中下部，干后呈腺槽。球果可見，近球形、寬卵形，長6～16 mm，成熟時(shí)呈藍(lán)黑色、灰褐色或黑色，含種子1粒。種子呈卵圓形、寬倒卵形或近球形，直徑5～11 mm，兩側(cè)有棱脊或上部明顯，周圍有樹脂槽。氣微香，味微苦、澀。部分樣品示例圖見圖1。

2.2 顯微鑒別

2.2.1 橫切面顯微觀察 取圓柏藥材，用水炮制軟化后，刀片切成10～20 μm的薄片，將平整的薄片置于載玻片上，滴加水合氯醛試液1～2滴，在酒精燈上加熱透化，蓋上蓋玻片，置于顯微鏡下觀察。結(jié)果，可見鱗葉表皮細(xì)胞1列，排列整齊，外被厚角質(zhì)層；鱗葉中部有較大的類圓形或橢圓形的空腔；葉肉柵欄細(xì)胞短柱狀，海綿組織細(xì)胞較大、排列疏松；中央髓部偏小，射線明顯。圓柏藥材橫切面顯微圖見圖2（1號樣品）。

2.2.2 粉末顯微觀察 將圓柏藥材粉碎，粉末過四號或五號篩，挑取少許粉末置于載玻片上，滴加水合氯醛試液，加熱透化后，蓋上蓋玻片，置于顯微鏡下觀察。結(jié)果，可見藥材粉末呈綠色或黃綠色；表皮細(xì)胞類長方形；氣孔甚多，呈凹陷形，保衛(wèi)細(xì)胞較大；纖維細(xì)長，單個(gè)或成束，木薄壁細(xì)胞多見，呈念珠狀[3]。圓柏藥材粉末顯微圖見圖3（1號樣品）。

2.3 薄層色譜鑒別

將9批圓柏藥材粉碎，過三號篩，取5 g藥材粉末，加石油醚（60～90 ℃）100 mL加熱回流2 h，棄去石油醚液，藥渣揮干石油醚，加甲醇20 mL超聲（功率：100 W，頻率：50 kHz）處理20 min，放冷，濾過，濾液濃縮至2 mL，作為供試品溶液。另取蘆丁、槲皮苷對照品適量，分別加甲醇制成1、0.5 mg/mL的溶液，作為對照品溶液。參考2015年版《中國藥典》（四部）通則0502法[4]進(jìn)行試驗(yàn)：吸取各供試品溶液5 μL和上述2種對照品溶液1 μL或2 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上 ，以乙酸乙酯-丙酮-水-甲酸（7 ∶ 3 ∶ 1 ∶ 0.2，V/V/V/V）為展開劑展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置于紫外燈（波長365 nm）下檢視。結(jié)果表明，在供試品色譜中，與對照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。薄層色譜圖見圖4。

2.4 水分含量測定

參照2015年版《中國藥典》（四部）通則0832第四法[4]測定。結(jié)果表明，9批樣品中水分含量為3.2%～5.6%，均在6.0%以下?？紤]到不同產(chǎn)地藥材之間的差異，并且為了避免貯存過程中因水分含量過高而產(chǎn)生霉變，暫擬定圓柏藥材中水分含量不得超過8.0%。圓柏藥材中水分含量測定結(jié)果見表1。

2.5 總灰分和酸不溶性灰分含量測定

參照2015年版《中國藥典》（四部）通則2302法[4]測定。結(jié)果表明，9批樣品中總灰分含量為3.4%～5.8%，均在6.0%以下，為保證藥品的純度，初步擬定圓柏藥材中總灰分含量不得超過7.0%。因9批圓柏樣品中酸不溶性灰分含量均在0.8%以下，測得值較小，故暫不進(jìn)行限度控制。圓柏藥材中總灰分、酸不溶性灰分含量測定結(jié)果見表1。

2.6 醇溶性浸出物含量測定

參照2015年《中國藥典》（四部）通則2201項(xiàng)下醇溶性浸出物測定法——熱浸法[4]測定，用95%乙醇作溶劑。結(jié)果表明，9批樣品中醇溶性浸出物含量為28.0%～33.8%，平均值為31.6%。考慮到各地藥材質(zhì)量不同，按平均值下浮約20%計(jì)算，初步擬定圓柏藥材中醇溶性浸出物含量不得低于24.0%。

2.7 槲皮苷含量測定

2.7.1 溶液的制備 （1）供試品溶液A：取本品（1號樣品）粉末（過三號篩）約0.5 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定質(zhì)量，超聲（功率：300 W，頻率：50 kHz）處理45 min，放冷，再次稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，用濾紙濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液，即得。（2）槲皮苷對照品溶液：取槲皮苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每mL含槲皮苷46 μg的溶液，即得。

2.7.2 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱：Tnature C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-0.01 mol/L磷酸二氫鉀溶液-冰醋酸（14 ∶ 86 ∶ 1.5，V/V/V）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：254 nm；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。分別取 “2.7.1”項(xiàng)下制備的供試品溶液A和槲皮苷對照品溶液在此色譜條件下進(jìn)樣測定，記錄色譜圖。結(jié)果，各成分間分離度均不小于1.5，按槲皮苷計(jì)理論板數(shù)不低于3 000。高效液相色譜圖見圖5。

2.7.3 線性關(guān)系考察 取槲皮苷對照品適量，用甲醇制備成質(zhì)量濃度為0.230 8 mg/mL的貯備液。分別精密吸取0.2、0.4、1.0、2.0、3.0、4.0 mL貯備液，置于不同10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密吸取上述溶液10 μL注入色譜儀，按“2.7.2”項(xiàng)下色譜條件測定，以峰面積（y）為縱坐標(biāo)、進(jìn)樣量（x）為橫坐標(biāo)進(jìn)行回歸分析，得到回歸方程為：y=0.312 5x+0.115 1（r=0.999 6）。結(jié)果表明，槲皮苷檢測在46.16～923.2 ng進(jìn)樣量范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.7.4 精密度試驗(yàn) 取“2.7.1（2）”溶液，按“2.7.2”色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次進(jìn)行測定，記錄峰面積。結(jié)果顯示，槲皮苷峰面積的RSD為0.30%（n=6）。

2.7.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取供試品（1號樣品）粉末6份，各約0.5 g，精密稱定，按“2.7.1（1）”項(xiàng)下方法制備供試品溶液A，按“2.7.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定。結(jié)果，測得供試品中槲皮苷含量的RSD為0.84%（n=6）。

2.7.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品（1號樣品）按“2.7.1（1）”方法制備供試品溶液A，分別于室溫條件下放置0、5、10、18、24 h后，按“2.7.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。結(jié)果，槲皮苷峰面積的RSD為0.69%（n=5），表明供試品溶液在室溫條件下24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7.7 準(zhǔn)確度試驗(yàn) 精密稱定已知槲皮苷含量的供試品（1號樣品）粉末9份，每份約0.5 g，加入槲皮苷對照品75%、100%、125%濃度的溶液適量，每個(gè)濃度平行制備3份，按“2.7.1（1）”方法制備供試品溶液A，然后按“2.7.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定。結(jié)果表明，槲皮苷平均加樣回收率為98.27%，RSD為0.47%（n=9），表明試驗(yàn)準(zhǔn)確度較好。

2.7.8 耐用性試驗(yàn) 取藥材樣品（1號樣品）適量，各3份，按“2.7.1（1）”方法制備供試品溶液A，由2個(gè)不同試驗(yàn)人員，分別用Tnature C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱、U3000型HPLC儀和WondaCract ODS-2 C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱、1260型HPLC儀按“2.7.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。另外一組數(shù)據(jù)由復(fù)核單位提供。結(jié)果，樣品主峰的分離度均符合要求，測得3份供試品中槲皮苷含量的RSD小于2.0%（n=3）。

2.7.9 樣品中槲皮苷含量測定 分別取9批圓柏藥材適量，按照“2.7.1（1）”方法制備樣品溶液A，然后按“2.7.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定。結(jié)果表明，9批圓柏藥材中槲皮苷含量為0.11%～0.28%?？紤]各地藥材的質(zhì)量差別，建議以最低值定限，即按干燥品計(jì)算槲皮苷（C21H20O11）含量不得低于0.11%。9批圓柏藥材中槲皮苷含量測定結(jié)果見表2。

2.8 穗花杉雙黃酮含量測定

2.8.1 溶液的制備 （1）供試品溶液B：取本品（1號樣品）粉末（過三號篩）約0.5 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定質(zhì)量，靜置過夜，加熱回流30 min，放冷，再次稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。（2）穗花杉雙黃酮對照品溶液：取穗花杉雙黃酮對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每mL含穗花杉雙黃酮43 μg的溶液，即得。

2.8.2 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱：Tnature C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液（34 ∶ 66，V/V）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：337 nm；色譜柱溫度：30 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。取上述供試品溶液B、穗花杉雙黃酮對照品溶液，在此色譜條件下進(jìn)樣測定，記錄色譜圖。結(jié)果，相鄰峰間分離度不低于1.5，理論板數(shù)按穗花杉雙黃酮計(jì)不低于5 000。高效液相色譜圖見圖6。

2.8.3 線性關(guān)系考察 制備穗花杉雙黃酮對照品質(zhì)量濃度為0.152 8 mg/mL的貯備液。精密吸取0.2、0.5、1.0、1.5、2.0、3.0 mL，置于不同的10 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密吸取10 μL注入液相色譜儀，按“2.8.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，以峰面積（y）為縱坐標(biāo)、進(jìn)樣量（x）為橫坐標(biāo)進(jìn)行回歸分析，得到回歸方程為：y=4 425.06x-6 596.04（r=0.999 9）。結(jié)果表明，穗花杉雙黃酮在進(jìn)樣量為30.56～458.35 ng范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.8.4 精密度試驗(yàn) 取“2.8.1（2）”溶液，按“2.8.2”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次進(jìn)行測定，記錄峰面積。結(jié)果，穗花杉雙黃酮峰面積的RSD為0.44%（n=6）。

2.8.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取供試品（1號樣品）粉末6份，各約0.5 g，精密稱定，按“2.8.1（1）” 方法制備供試品溶液B，然后按“2.8.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定，記錄峰面積。結(jié)果，穗花杉雙黃酮含量的RSD為0.28%（n=6）。

2.8.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品（1號樣品）溶液，分別于室溫下放置0、5、10、18、24 h，然后按“2.8.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。結(jié)果顯示，穗花杉雙黃酮峰面積的RSD為0.53%（n=5），表明供試品溶液在室溫條件下24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8.7 準(zhǔn)確度試驗(yàn) 精密稱定供試品（1號樣品）共9份，各約0.5 g，加入穗花杉雙黃酮對照品75%、100%、125%濃度的溶液適量，按“2.8.1（1）”方法制備供試品溶液B，每個(gè)濃度平行制備3份，然后按“2.8.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定。結(jié)果表明，穗花杉雙黃酮的平均加樣回收率為98.83%，RSD為0.89%（n=9）。

2.8.8 耐用性試驗(yàn) 取供試品（1號樣品）適量，各3份，按“2.8.1（1）”方法制備供試品溶液B，由2個(gè)不同試驗(yàn)人員進(jìn)行試驗(yàn)，條件同“2.7.8”項(xiàng)下。結(jié)果，測得3份供試品中穗花杉雙黃酮含量的RSD小于2.0%（n=3）。

2.8.9 樣品中穗花杉雙黃酮含量測定 分別取9批圓柏藥材適量，按“2.8.1（1）”方法制備樣品溶液B，然后按“2.8.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定。結(jié)果表明，9批圓柏藥材中穗花杉雙黃酮的含量為0.15%～0.25%?？紤]各地藥材的質(zhì)量差別，建議以最低值定限，即按干燥品計(jì)算，圓柏藥材中穗花杉雙黃酮（C30H18O10）含量不得低于0.15%。9批圓柏藥材中穗花杉雙黃酮含量測定結(jié)果見表2。

3 討論

3.1 指標(biāo)成分的選擇

據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[3，5-8]，在新疆圓柏中分離得到了蘆丁、槲皮苷和山柰酚等黃酮類化合物。故筆者在前期研究中選擇蘆丁、槲皮苷和山柰酚3個(gè)成分進(jìn)行了研究，并以乙腈-0.3%磷酸梯度洗脫[9]測定其含量。結(jié)果，色譜圖中未見山柰酚成分峰，這提示蒙藥圓柏中可能不含此成分，雖然蘆丁和槲皮苷可有效分離且峰形良好，但蘆丁成分檢測的耐用性試驗(yàn)結(jié)果不符合要求，故未進(jìn)行蘆丁和山柰酚含量的測定。柏科植物中黃酮以及雙黃酮類化合物普遍存在，其中以槲皮苷、穗花杉雙黃酮等最普遍[3，5-8，10-11]。現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，柏科植物中的槲皮苷具有抗炎、抗菌、抗氧化、抗病毒等多種藥理作用，穗花杉雙黃酮具有抗腫瘤、抗炎、抗病毒、舒張血管、降血糖等作用[12]。兩者的生物藥理活性與蒙藥圓柏的抗炎、抗病毒的主治功能相符，故最終將其作為標(biāo)示性成分進(jìn)行測定并給予定量。經(jīng)測定，槲皮苷、穗花杉雙黃酮也是內(nèi)蒙圓柏中含量較高的成分。

3.2 薄層色譜條件的選擇

在前期預(yù)試驗(yàn)中，筆者參照文獻(xiàn)中的薄層鑒別方法 [13]，分別以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（10 ∶ 3 ∶ 1，V/V/V）、甲苯-乙酸乙酯-甲酸（5 ∶ 4 ∶ 1，V/V/V）、乙酸乙酯-丙酮-水-甲酸（7 ∶ 3 ∶ 1 ∶ 0.2，V/V/V/V）為展開劑進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果，以乙酸乙酯-丙酮-水-甲酸（7 ∶ 3 ∶ 1 ∶ 0.2，V/V/V/V）為展開劑時(shí)分離效果最好，主斑點(diǎn)的比移值（Rf值）適宜，但是在該文獻(xiàn)顯色條件下，蘆丁對照品和槲皮苷對照品的斑點(diǎn)模糊，且樣品圖中未出現(xiàn)與山柰酚對照品一致的斑點(diǎn)，這也再次證明了所收集的內(nèi)蒙古圓柏藥材中不含山柰酚。為此，筆者分別考察以10%硫酸乙醇溶液和3%三氯化鋁乙醇溶液為顯色劑時(shí)的效果。結(jié)果，以后者為顯色劑時(shí)顯色效果不佳，而以前者為顯色劑時(shí)，日光下對照品斑點(diǎn)清晰，置于紫外燈（波長365 nm）下觀察亮綠色的熒光斑點(diǎn)同樣清晰可見，Rf值適中，分離效果良好，故在本研究中選用10%硫酸乙醇溶液為顯色劑。另外，因樣品的提取步驟煩瑣，在薄層鑒別中筆者將脫脂步驟改為加石油醚（60～90 ℃）100 mL加熱回流2 h，結(jié)果薄層色譜中特征斑點(diǎn)清晰、分離良好，故在薄層鑒別中以此方法進(jìn)行樣品處理。

3.3 HPLC流動相的選擇

在前期預(yù)試驗(yàn)中，關(guān)于槲皮苷含量測定流動相的選擇，筆者參考文獻(xiàn)報(bào)道[3，5-8]，先以乙腈-0.3%磷酸梯度洗脫后進(jìn)行測定，但其耐用性試驗(yàn)不符合要求；接著，筆者又參考文獻(xiàn)中側(cè)柏葉含量測定方法[10]，分別以甲醇- 0.01 mol/L磷酸二氫鉀溶液-冰醋酸（14 ∶ 86 ∶ 1.5，V/V/V）、甲醇-0.1%冰醋酸0.01 mol/L磷酸二氫鉀溶液（14 ∶ 86， V/V）、甲醇-0.1%冰醋酸溶液（14 ∶ 86，V/V）等作為流動相進(jìn)行測定，但在上述流動相條件下供試品的峰形均不理想；之后，筆者又以乙腈替代甲醇并調(diào)整流動相比例，以乙腈-0.01 mol/L磷酸二氫鉀溶液-冰醋酸（14 ∶ 86 ∶ 1.5， V/V/V）為流動相進(jìn)行測定，結(jié)果各成分可有效分離，故在本研究中將此確定為流動相。在穗花杉雙黃酮含量測定流動相的選擇上，在預(yù)試驗(yàn)中筆者曾參考相關(guān)報(bào)道[12-13]，以甲醇-0.1%磷酸溶液作為流動相進(jìn)行梯度洗脫測定含量，但供試品中各成分的分離效果不太理想，故在此基礎(chǔ)上用乙腈代替甲醇并調(diào)整流動相比例，以乙腈-0.1%磷酸溶液（34 ∶ 66，V/V）為流動相進(jìn)行測定，結(jié)果在此條件下各成分的分離效果好、保留時(shí)間適中。

綜上所述，本研究所建標(biāo)準(zhǔn)可為蒙藥圓柏藥材的質(zhì)量控制提供一定參考。但是對2種指標(biāo)性成分分別進(jìn)行含量測定無疑增加了監(jiān)控質(zhì)量的難度，若能做到同時(shí)測定即可大大提高監(jiān)督效率，故本法還有待改進(jìn)。

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（收稿日期：2018-09-29 修回日期：2018-11-26）

（編輯：林 靜）