武衡 王娜 董景麗 鄭丹

摘要：目的：對(duì)中國(guó)藥典2015版收錄的HPLC法測(cè)定注射用泮托拉唑鈉有關(guān)物質(zhì)的分析方法深入探討。方法：采用賽分等液相色譜柱，戴安Ultimate3000高效液相色譜儀，VWD-3100紫外檢測(cè)器，以磷酸鹽緩沖液（0.01mol/L磷酸氫二鉀溶液用磷酸調(diào)節(jié)pH值至7.0）為流動(dòng)相A；色譜乙腈為流動(dòng)相B，梯度洗脫，流速為1.0Ml/min，柱溫40℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為289nm。結(jié)果：本方法為藥典收錄方法，但實(shí)際應(yīng)用中容易產(chǎn)生異常峰，干擾檢測(cè)結(jié)果。結(jié)論：本檢測(cè)方法專屬性強(qiáng)，樣品穩(wěn)定，在用于注射用泮托拉唑鈉有關(guān)物質(zhì)的質(zhì)量控制時(shí)需要注意的問(wèn)題。

關(guān)鍵詞：注射用泮托拉唑鈉；高效液相色譜法；有關(guān)物質(zhì)，異常峰

前言：

注射用泮托拉唑鈉在臨床上主要用于十二指腸潰瘍、胃潰瘍、急性胃粘膜病變等急性上消化道出血，是繼奧美拉唑、蘭索拉唑之后上市的第3個(gè)質(zhì)子泵抑制劑[1]。注射用泮托拉唑鈉（Pantoprazole Sodium）收載于《中國(guó)藥典》2015版（二部）[2]，采用HPLC法測(cè)定有關(guān)物質(zhì)。經(jīng)多次實(shí)驗(yàn)該方法在適用性方面存在不足，梯度基線在主峰位置存在異常峰。但該異常峰的存在具有不確定性，且無(wú)重現(xiàn)性。本文旨在通過(guò)出現(xiàn)問(wèn)題，分析問(wèn)題過(guò)程的探討，給讀者提供幫助，最大限度的降低異常峰及異常峰對(duì)結(jié)果判定的影響。

1、儀器與試藥

1.1實(shí)驗(yàn)儀器

戴安Ultimate3000高效液相色譜儀，包括VWD-3100紫外檢測(cè)器（賽默飛世爾科技有限公司），變色龍chromeleon色譜工作站（美國(guó)戴安公司），XS105-DU電子分析天平（上海梅特勒-托利多儀器有限公司），F(xiàn)E30數(shù)顯式PH計(jì)（上海梅特勒-托利多儀器有限公司），月旭和賽分Amethyst，菲羅門等液相色譜柱。

1.2藥品與試劑

藥品：注射用泮托拉唑鈉（生產(chǎn)單位 ： 河北愛(ài)爾海泰制藥有限公司，產(chǎn)品規(guī)格為每支80mg，產(chǎn)品批號(hào)：31170201，31170202，31170203）。

對(duì)照品及試劑：乙腈（fisher，HPLC級(jí)）。磷酸氫二鉀（GR），磷酸（AR）均由天津科密歐化學(xué)試劑有限公司提供，水為重蒸餾去離子水。

2、方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

有關(guān)物質(zhì) 臨用新制。取本品，加溶劑 [0.01mol/L氫化鈉溶液 - 乙腈 （1 ： 1 ） ]溶解并稀釋制成每 lm l中約含0.4m g的溶液，作為供試品溶液；精密量取1ml，置200ml量瓶中，用上述溶劑稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照溶液。另取泮托拉唑?qū)φ掌芳s 8 m g ，置10ml量瓶中加0.3%過(guò)氧化氫溶液1ml使溶解，用上述溶劑稀釋至刻度，搖勻，作為系統(tǒng)適用性溶液。

2.2色譜條件

2.3現(xiàn)象及分析

在實(shí)際檢測(cè)過(guò)程中按照藥典標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定臨用新制，供試品及自身對(duì)照未發(fā)生異常。進(jìn)溶劑后發(fā)現(xiàn)在主峰相對(duì)保留時(shí)間處有一個(gè)異常峰，峰面積約 100（見(jiàn)下圖1）。有關(guān)物質(zhì)的來(lái)源有：降解物、相容性產(chǎn)物[3]。

2.3.1首先考慮是否為進(jìn)樣針殘留，充分清洗進(jìn)樣針，重新將溶劑倒入液相小瓶進(jìn)樣，發(fā)現(xiàn)異常峰仍然存在，且大小未發(fā)生明顯變化。

2.3.2接下來(lái)認(rèn)為可能是溶劑污染導(dǎo)致。用與之前所配制的溶劑相同的試劑重新配制溶劑，進(jìn)樣發(fā)現(xiàn)仍然存在異常峰且大小未發(fā)生明顯變化。

2.3.3由以上兩次實(shí)驗(yàn)可以得出異常峰的出現(xiàn)并非是進(jìn)樣針殘留和溶劑所引入。因?yàn)樵摲椒榫彌_鹽和乙腈梯度洗脫，所以考慮有可能為流動(dòng)相梯度造成的異常，所以接下來(lái)，不進(jìn)樣品，單單采集梯度的基線，發(fā)現(xiàn)在主峰位置仍然存在異常峰且大小未發(fā)生明顯變化（見(jiàn)下圖2），故考慮為系統(tǒng)本身或流動(dòng)相A、B的問(wèn)題。流動(dòng)相B相為乙腈，更換新開(kāi)瓶乙腈后，發(fā)現(xiàn)異常峰仍然存在，且大小未發(fā)生明顯變化，故排除流動(dòng)相B的問(wèn)題；更換流動(dòng)相A配制所需的試劑重新配制A相，重新進(jìn)樣空白，主峰位置仍有異常峰，峰面積減小，進(jìn)樣溶劑峰面積減小，約為（見(jiàn)下圖3）。計(jì)算結(jié)果時(shí)將溶劑峰扣除以計(jì)算結(jié)果。

2.3.4按照之前的試驗(yàn)表明該異常峰的引入為梯度洗脫造成的影響。由于流動(dòng)相B相為乙腈，故而考慮將流動(dòng)相A配置為含乙腈%1，%3，%5的溶液，破壞梯度洗脫的比例。但結(jié)果表明主峰保留時(shí)間隨乙腈加入量增加而提前，而該異常峰的保留時(shí)間也隨主峰的提前而提前，且仍出峰在相同的位置（見(jiàn)下圖4、圖5、圖6），對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的判定造成影響。

由于破壞梯度程序并未解決異常峰引入的問(wèn)題，所以嘗試更換色譜柱子品牌，及規(guī)格，以改變主峰及異常峰的保留時(shí)間，以避免異常峰的干擾，而試驗(yàn)結(jié)果表明，無(wú)論是更換色譜柱品牌還是改變色譜柱規(guī)格，該異常峰仍然存在，且對(duì)主峰仍存在干擾。

截至目前尚不明確該異常峰是否為泮托拉唑主成分，考慮中國(guó)藥典對(duì)泮托拉唑有含量測(cè)定的方法為：，照含量測(cè)定方法直接進(jìn)樣發(fā)生問(wèn)題的溶劑，并進(jìn)樣定位的對(duì)照品，發(fā)現(xiàn)溶劑樣品主峰位置并無(wú)明顯殘留。

后續(xù)檢測(cè)注射用泮托拉唑鈉31170201，31170202，31170203成品存放10天有關(guān)物質(zhì)實(shí)驗(yàn)時(shí)，徹底清洗管路及系統(tǒng)，進(jìn)樣溶劑及有關(guān)對(duì)照時(shí)，主峰位置無(wú)異常峰。之后又做存放15天有關(guān)物質(zhì)實(shí)驗(yàn)時(shí)，進(jìn)樣前徹底清洗管路及系統(tǒng)，進(jìn)樣溶劑及有關(guān)對(duì)照時(shí)，與主峰保留時(shí)間相同處，有一峰面積約100的異常峰，計(jì)算結(jié)果時(shí)將溶劑峰扣除以計(jì)算結(jié)果。接著考察三批加速1月有關(guān)物質(zhì)時(shí)，進(jìn)樣前徹底清洗管路及系統(tǒng)，進(jìn)樣溶劑及有關(guān)對(duì)照時(shí)，主峰保留時(shí)間處無(wú)異常峰。經(jīng)過(guò)多次實(shí)驗(yàn)考察，通過(guò)更換不同的液相色譜儀、配制不同的流動(dòng)相，主峰位置異常峰的出現(xiàn)存在不確定性，且峰面積無(wú)重現(xiàn)性。

3、討論

經(jīng)過(guò)多次實(shí)驗(yàn)分析，所用的溶劑、流動(dòng)相配制所用的試劑經(jīng)過(guò)不同批號(hào)的改變之后，在主峰保留時(shí)間處，進(jìn)樣空白、溶劑及有關(guān)對(duì)照不定期的出現(xiàn)異常峰，且峰面積大小無(wú)重復(fù)性。通過(guò)以上實(shí)驗(yàn)得出結(jié)論：此異常峰歸結(jié)為檢驗(yàn)方法的問(wèn)題，以后再做泮托拉唑鈉有關(guān)物質(zhì)時(shí)，要清洗液相儀器的流路及色譜柱，如果溶劑還是出現(xiàn)與主峰保留時(shí)間相同的異常峰，以扣除溶劑峰計(jì)算最終結(jié)果。此檢驗(yàn)方法中存在的異常峰的出現(xiàn)，目前未找到真正原因，在后續(xù)檢驗(yàn)工作中仍繼續(xù)調(diào)查。

參考文獻(xiàn)：

[1]傅宏義（Fu HY）.新型質(zhì)子泵抑制劑-泮托拉唑[J]. 藥物不良反應(yīng)雜質(zhì)（Adeverse Drug React J），1999，1（3）：173.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：二部[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2015：706.

[3]論壇ID：hongwei2000 DEC，2014.

作者簡(jiǎn)介：武衡，男，河北省石家莊人，助理工程師，多年從事藥物分析工作。