保嘉敏 趙春苗 周世雄

摘 要：本文采用高效液相色譜法（HPLC-VWD）對(duì)阿司匹林腸溶片中成分阿司匹林進(jìn)行測(cè)定，對(duì)方法的系統(tǒng)適用性試驗(yàn)、特異性試驗(yàn)、精密度試驗(yàn)、檢測(cè)限、定量限、線性關(guān)系和線性范圍考察、重復(fù)性試驗(yàn)、準(zhǔn)確度試驗(yàn)（加樣回收試驗(yàn)）進(jìn)行驗(yàn)證，證實(shí)本方法確實(shí)可靠。本方法可測(cè)定濃度在0.999862mg/mL-0.01999724 mg/mL間的阿司匹林，檢測(cè)下限可達(dá)0.1ug/mL。

關(guān)鍵詞：阿司匹林;HPLC-VWD;方法驗(yàn)證

阿司匹林腸溶片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，監(jiān)測(cè)阿司匹林腸溶片中的阿司匹林含量是一項(xiàng)重要指標(biāo)[1]。本文采用高效液相色譜法測(cè)定阿司匹林腸溶片中的阿司匹林，分別對(duì)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)、特異性試驗(yàn)、精密度試驗(yàn)、檢測(cè)限、定量限、線性關(guān)系和線性范圍考察、重復(fù)性試驗(yàn)、準(zhǔn)確度試驗(yàn)（加樣回收試驗(yàn)）進(jìn)行驗(yàn)證[2]。

一、儀器與材料

1.1 樣品 ?阿司匹林腸溶片（25mg）市售樣品。

1.2 儀器及試藥

高效液相色譜儀：Thermo Fisher Ultimate 3000（VWD檢測(cè)器）。超聲儀：上海科導(dǎo)SK7210LHC超聲儀，35KHz。色譜柱：Welch Xtimate C18（5um，150×4.6mm）。

0.45um有機(jī)性樣品濾膜。天平：賽多利斯電子天平（BSA224S-CW）（100g，0.01mg;220g，0.1g）;梅特勒-托利多電子天平（MX5）（3g，0.001mg）。

試劑：甲醇，色譜級(jí)，德國(guó)默克，I866432 601。乙腈：色譜純，德國(guó)默克，JA050820。四氫呋喃，色譜純，德國(guó)默克，I826801615。冰醋酸，分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，20140326。水，為GB/T6682中規(guī)定的一級(jí)水。阿司匹林，中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：100113-201405，純度：99.8%。水楊酸，中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：100106-201104，純度：99.9%。

1.3標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的制備 ?取阿司匹林和水楊酸，用1%冰醋酸甲醇配制成含阿司匹林0.1mg/mL，水楊酸0.01mg/mL溶液作為系統(tǒng)適應(yīng)性測(cè)試溶液。取阿司匹林約2.5mg，準(zhǔn)確稱定后，用1%冰醋酸甲醇溶解并定容至25mL，此溶液阿司匹林含量為0.1mg/mL，作為含量測(cè)定項(xiàng)下的對(duì)照品溶液。

1.4供試品制備 ?取本品細(xì)粉85mg（約相當(dāng)于阿司匹林0.1g），精密稱定，置100ml量瓶中，加1%冰醋酸的甲醇溶液振搖使阿司匹林溶解，并稀釋至刻度，搖勻，濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

1.5 測(cè)定法 ?以乙腈-四氫呋喃-冰醋酸-水（20：5：5：70）為流動(dòng)相;檢測(cè)波長(zhǎng)為303nm，柱溫30℃。分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10uL，注入色譜儀，測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，既得。

二、驗(yàn)證項(xiàng)目

2.1系統(tǒng)適用性試驗(yàn) ? ?照高效液相色譜法測(cè)定，阿司匹林與水楊酸的分離度為13.56，滿足系統(tǒng)分離度R>2.0的要求。

2.2特異性試驗(yàn) ? 制備正常樣品與空白樣品，按照供試品溶液制備方法處理，進(jìn)樣檢測(cè)分析，考察試驗(yàn)樣品中除阿司匹林和水楊酸以外的其他組分對(duì)阿司匹林和水楊酸的測(cè)定沒(méi)有干擾。

2.3精密度試驗(yàn) ?分別精密吸取阿司匹林對(duì)照品溶液10uL，按測(cè)定方法重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積值，分別為438.561、438.704、438.956、429.862、438.955、438.720，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差值為0.84%。

2.4線性關(guān)系與線性范圍考察 ?分別不同濃度梯度的阿司匹林標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，取10uL注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定峰面積。配置阿司匹林的濃度分別為0.999862mg/mL、0.1999724 mg/mL、0.0999862 mg/mL、0.07998896 mg/mL、0.05999172 mg/mL、0.03999448 mg/mL、0.01999724 mg/mL。以峰面積為縱坐標(biāo)，以阿司匹林濃度為橫坐標(biāo)作線性回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。線性方程為Y=3916.2x+3.8453，R為0.9998。

2.5檢測(cè)限定量限的確定 ?取一定濃度的對(duì)照品溶液，精密量取10uL注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，滿足信噪比3：1或10：1為最低檢測(cè)限或定量限的要求。測(cè)試得到其檢出限為0.1ug/mL，定量限為0.3ug/mL。

2.6重復(fù)性試驗(yàn) ?照1.4供試品制備方法平行制備6份樣品，進(jìn)行重復(fù)性試驗(yàn)，平均含量為0.26mg/mg，RSD為0.61%。

2.7加標(biāo)回收率試驗(yàn)（準(zhǔn)確度試驗(yàn)）制備樣品進(jìn)行3水平3平行加標(biāo)試驗(yàn)，回收率分別為100.24%、101.34%、101.78%、100.85%、100.57%、100.83%、101.48%、101.98%、100.23%，平均值為101.03%，RSD為0.61%。

三、結(jié)論

通過(guò)HPLC-VWD進(jìn)行測(cè)定，對(duì)阿司匹林腸溶片阿司匹林含量進(jìn)行系統(tǒng)適用性試驗(yàn)、特異性試驗(yàn)、精密度試驗(yàn)、線性關(guān)系與線性范圍考察、檢測(cè)限、定量限、重復(fù)性試驗(yàn)、準(zhǔn)確度試驗(yàn)（加樣回收試驗(yàn)），各項(xiàng)試驗(yàn)測(cè)試結(jié)果均能滿足要求，儀器性能穩(wěn)定，質(zhì)控結(jié)果滿意。從以上數(shù)據(jù)可以看出用該方法檢測(cè)阿司匹林腸溶片中阿司匹林的含量結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可以在實(shí)驗(yàn)室運(yùn)用。

參考文獻(xiàn)

[1]中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，《中華人民共和國(guó)藥典》[M]2015年版 二部

[2]中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，《中華人民共和國(guó)藥典》[M]2015年版 四部