宋 紋，陳博知

(天津宏仁堂藥業(yè)有限公司，天津 300385)

辛芳鼻炎膠囊是由辛夷、白芷、細(xì)辛、柴胡等15味中藥組成的復(fù)方制劑，具有宣肺通竅，發(fā)表散風(fēng)，清熱解毒的功效，臨床上主要用于治療慢性鼻炎，鼻竇炎，過敏性鼻炎[1]。方中白芷宣通鼻竅，解表散寒，祛風(fēng)止痛，為辛芳鼻炎膠囊的君藥之一，而歐前胡素為白芷最具代表性的成分[2]。本試驗(yàn)采用HPLC法測(cè)定辛芳鼻炎膠囊中歐前胡素的含量，為建立辛芳鼻炎膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和生產(chǎn)工藝的完善提供參考依據(jù)。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀：島津(SHIMADZU)LC-20A(方法學(xué))、安捷倫(Aglient)1200 Series(耐用性)；梅特勒托利多(METTLE TOLEDO)XS205DU電子天平；AS超聲波清洗機(jī)(AS20500A)。歐前胡素對(duì)照品由中國食品藥品檢定研究院提供(純度為99.6%，批號(hào)110826-201616，供含量測(cè)定用)。辛芳鼻炎膠囊(天津宏仁堂藥業(yè)有限公司，批號(hào)分別為H09005、H09001-1、H09001-2、H09003)。甲醇、乙腈為色譜純(Merk公司)，乙醇(色譜純，天津市康科德科技有限公司)，水為Milli-Q超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件 方法學(xué)采用phenomenex Luna色譜柱，耐用性采用Aglient TC與ACCHROM Unitary 色譜柱，以上均為C18填充劑(250 mm×4.6 mm,5 μm)；以乙腈-水(46∶54)為流動(dòng)相；流速：1.0 ml/min；檢測(cè)波長為300 nm；柱溫：30～35 ℃；進(jìn)樣量均為10 μl。

2.2溶液制備

2.2.1對(duì)照品溶液的制備 精密稱定歐前胡素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 ml含10 μg的溶液，即得。

2.2.2供試品溶液的制備 取“裝量差異”項(xiàng)下的辛芳鼻炎膠囊內(nèi)容物適量，混勻，取約2 g，精密稱定，置100 ml具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 ml，密塞，稱定重量，超聲處理(功率300 W，頻率50 kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過，精密量取續(xù)濾液25 ml，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，轉(zhuǎn)移至10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3陰性對(duì)照溶液的制備 按處方配比，取白芷藥材以外的各味藥材，制成辛芳鼻炎膠囊陰性樣品，再按“2.2.2 ”項(xiàng)下方法制備陰性對(duì)照溶液。

2.3陰性對(duì)照試驗(yàn) 分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液各10 μl，注入高效液相色譜儀，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分析，結(jié)果顯示陰性樣品無干擾，供試品主峰保留時(shí)間與對(duì)照品主峰的保留時(shí)間基本一致。結(jié)果見圖1。

2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 取歐前胡素對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 ml含120.815 μg的對(duì)照品儲(chǔ)備液，精密量取3、5、10、15和20 ml的儲(chǔ)備液分別稀釋至100 ml量瓶中，使其歐前胡素的濃度梯度分別為3.624 4、6.040 7、12.081 5、18.122 2和24.163 0 μg/ml，分別精密吸取上述各溶液10 μl，測(cè)定出各自的峰面積，橫坐標(biāo)為對(duì)照品濃度(μg/ml)，縱坐標(biāo)為峰面積，求得線性回歸方程：Y=24 870.76X-198.94(r=1.00)。結(jié)果表明濃度在3.624 4～24.163 0 μg/ml范圍內(nèi)歐前胡素呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.5重復(fù)性試驗(yàn) 取辛芳鼻炎膠囊(批號(hào)H09005)“裝量差異”項(xiàng)下的內(nèi)容物，混勻后精密稱定2 g，共6份，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測(cè)定每份供試品中歐前胡素的含量。其平均值為0.106 8 mg/g，RSD為0.61%，表明該方法具有較好的重復(fù)性。

2.6精密度試驗(yàn) 精密吸取“2.5”項(xiàng)下供試品溶液3，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定其峰面積RSD為0.42%。表明HPLC儀器具有較好的精密度。

1.歐前胡素

2.7穩(wěn)定性試驗(yàn) 將“2.5”項(xiàng)下供試品溶液1分別在0、4、8、12和24 h 5個(gè)不同的時(shí)間點(diǎn)進(jìn)樣，測(cè)定各自歐前胡素峰面積，RSD值為1.78%。試驗(yàn)表明24 h內(nèi)供試品溶液穩(wěn)定。

2.8回收率試驗(yàn) 精密稱定“裝量差異”項(xiàng)下(批號(hào)H09005)樣品1 g，共6份，置具塞錐形瓶中，分別精密加入2.175 2 μg/ml的對(duì)照品溶液各50 ml，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制得加樣回收供試品溶液，通過測(cè)得結(jié)果計(jì)算回收率。結(jié)果回收率平均值為100.31%，RSD為0.81%。見表1。

表1 加樣回收試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果(n=6)

2.9樣品測(cè)定 對(duì)不同批次的樣品進(jìn)行了歐前胡素的含量測(cè)定，平均值為0.027 4 mg/粒，RSD為1.93%。結(jié)果見表2。

表2 不同批次樣品測(cè)定結(jié)果(n=2)

3 討論

3.1提取條件的考查 本試驗(yàn)設(shè)計(jì)分別對(duì)樣品的提取溶劑、提取方式、提取時(shí)間、提取溶劑用量進(jìn)行了考查，采用不同濃度的甲醇、乙醇等溶劑進(jìn)行回流或超聲提取。結(jié)果顯示，用甲醇的提取效率最高；30 min已基本能提取完全；超聲處理方式與加熱回流方式的提取效率相差不大，故選用操作相對(duì)簡單、方便的超聲處理作為提取方式；溶劑用量50 ml的測(cè)定值最高，當(dāng)選用50 ml作為樣品提取溶劑量時(shí)發(fā)現(xiàn)供試品中歐前胡素的峰面積較低，不利于積分，故對(duì)溶液進(jìn)行了適當(dāng)?shù)臐饪s，對(duì)比濃縮前后供試品溶液的峰面積，二者成相應(yīng)比例，證明濃縮未造成損失。

3.2流動(dòng)相的選擇 參考大量文獻(xiàn)[3-13]及《中國藥典》2015年版一部[14]有關(guān)該成分含量的測(cè)定方法對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行摸索考查，分別采用甲醇-水、乙腈-水、乙腈-0.2%磷酸、乙腈-0.2%冰醋酸等組分按不同比例進(jìn)樣，結(jié)果顯示乙腈-水(46∶54)時(shí)，各峰分離效果最好且峰形對(duì)稱，無其他成分干擾，且出峰時(shí)間比較適中。同時(shí)，發(fā)現(xiàn)有文獻(xiàn)[15]雖可同時(shí)測(cè)定辛芳鼻炎膠囊中的木蘭脂素和歐前胡素，但其包含雜峰，且所選波長也不是最大吸收波長，故未采用。

3.3耐用性試驗(yàn)

3.3.1不同色譜柱考查 以同一儀器(島津)分別采用phenomenex Luna C18(2) (250 mm×4.6 mm,5 μm)；Aglient TC-C18(2)(250 mm×4.6 mm,5 μm)；ACCHROM Unitary C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)三個(gè)品牌的色譜柱，測(cè)定樣品中歐前胡素的含量，結(jié)果RSD為2.42%，表明不同色譜柱對(duì)含量測(cè)定的結(jié)果無顯著影響。

3.3.2不同儀器考查 以同一色譜柱(phenomenon)分別采用島津 LC-20A和Aglient 1200高效液相色譜儀，測(cè)定樣品中歐前胡素的含量，結(jié)果RAD為0.46%，表明不同儀器對(duì)含量測(cè)定的結(jié)果無顯著影響。

3.4在目前環(huán)境污染比較嚴(yán)重的條件下，辛芳鼻炎膠囊作為治療鼻炎、過敏性鼻炎的藥物，在市場(chǎng)上的使用更加廣泛，對(duì)于該產(chǎn)品的質(zhì)量把控也尤為重要，法規(guī)中該產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)目前只有白芷的鑒別方法。本試驗(yàn)采用HPLC法，對(duì)辛芳鼻炎膠囊中歐前胡素的含量進(jìn)行測(cè)定，并完成了方法學(xué)的考查與研究。結(jié)果表明該方法的重現(xiàn)性好，靈敏度高，可對(duì)辛芳鼻炎膠囊的質(zhì)量進(jìn)行有效的控制，為完善提高該品種的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)提供了良好的參考與借鑒。