劉駿 李波 劉興文

[摘要]目的探討黃精采用不同方法炮制后對(duì)其成分的影響。方法采用蒽酮-硫酸法測(cè)定黃精多糖含量。熱浸法測(cè)定醇溶性浸出物。薄層色譜法分析成分變化。結(jié)果黃精經(jīng)臨制后。多糖含量降低。多糖含量由高到低分別為黃精片，九制黃精，酒黃精，制黃精;同時(shí)炮制后。制黃精浸出物降低。酒黃精、九制黃精浸出物略有升高。浸出物由高到低分別為：九制黃精>酒黃精>黃精片>制黃精;薄層色譜分析表明各炮制品鼢無明顯差異。結(jié)論黃精臨方炮制后。多糖含量降低;浸出物含量酒黃精及九制黃精略升高。其他成分的變化有待于進(jìn)一步深入研究。

[關(guān)鍵詞]黃精;黃精多糖;浸出物;炮制;薏酮-硫酸法;熱浸法;薄層色譜法

[中圖分類號(hào)]R283 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A [文童編號(hào)]2096-5249（2019）14-281-03

黃精為百合科植物滇黃精Polygonatum kingianum Coll。etHemsl、黃精Polygonatum sibiricum Red?；蚨嗷S精Polygonatum cyrtonema Hua的干燥根莖。按形狀不同，習(xí)稱“大黃精”、“雞頭黃精”、“姜形黃精”。黃精為臨床常用補(bǔ)益藥，歸脾、肺、腎經(jīng)，其性味甘平，具有補(bǔ)氣養(yǎng)陰，健脾潤(rùn)肺，益腎的功效，用于脾胃氣虛，體倦乏力，胃陰不足，口干食少，肺虛燥咳，勞嗽咳血，精血不足，腰膝酸軟，須發(fā)早白，內(nèi)熱消渴等病癥。生黃精具有麻味，生品服用時(shí)，口舌麻木，刺激咽喉。接觸過生黃精或其汁液的皮膚會(huì)產(chǎn)生瘙癢的感覺，久聞其生味，有刺目之感，故多炮制后入藥。通過炮制，一方面可制其毒副作用，消除麻味，減輕對(duì)咽喉的刺激性，糖性變濃烈，口感好，利于服用;另一方面，黃精經(jīng)炮制后轉(zhuǎn)變藥性，利于有效成分積累，可提高黃精的臨床療效，增強(qiáng)藥物補(bǔ)脾潤(rùn)肺，益腎的作用。至清末，黃精的炮制方法多達(dá)十余種，但以蒸煮法為主，現(xiàn)代的炮制方法中又增加了加輔料蒸等不同的工藝方法。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，黃精的臨方炮制品多為黃精片（藥典）、酒黃精（藥典，酒燉法或酒蒸法，每100kg黃精，用黃酒20kg。）、制黃精（四川炮制規(guī)范，用黑豆熬取濃汁，浸拌潤(rùn)透心，蒸至內(nèi)外呈滋潤(rùn)黑色，干燥。每100kg黃精用黑豆10kg）、九制黃精。為了探討這些炮制方法使黃精的成分發(fā)生了什么改變，本實(shí)驗(yàn)通過測(cè)定黃精不同炮制品中多糖、浸出物含量變化并對(duì)其薄層色譜進(jìn)行比較研究，試探黃精臨方炮制的實(shí)際意義，為闡明黃精炮制作用機(jī)制研究奠定基礎(chǔ)。

1試驗(yàn)儀器與材料

1.1儀器

手提式高速粉碎機(jī)：DFT-100A（溫嶺市林大機(jī)械有限公司）

數(shù)顯恒溫水浴鍋：HH-6（國(guó)華電器有限公司）

雙光束紫外可見分光光度計(jì)：TU-1901（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）;

電子分析天平：BP211D、BT224S（賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司）

玻璃儀器：購(gòu)自重慶醫(yī)藥化玻公司。

1.2材料

對(duì)照品：無水葡萄糖（110833-201506），中國(guó)食品藥品檢定研究院。

對(duì)照藥材：黃精（121341-201705），中國(guó)食品藥品檢定研究院。

供試品：黃精片、酒黃精、制黃精、九制黃精4種炮制品，各備6個(gè)批次。

試劑：試驗(yàn)用水為純化水，無水乙醇、乙醇、正丁醇、石油醚（60-90℃）、乙酸乙酯、甲酸、香草醛、硫酸、蒽酮均為分析純。

硅膠G薄層板：青島海洋化工廠分廠。

2方法與結(jié)果

2.1黃精不同炮制品的多糖含量測(cè)定

2.1.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

對(duì)照品溶液的制備取105℃干燥至恒重的無水葡萄糖對(duì)照品33mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得（每lml中含無水葡萄糖0.33rag）。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密量取對(duì)照品溶液0.1ml、0.2ml、0.3ml、0.4ml、0.5ml、0.6ml，分別置10ml具塞刻度試管中，各加水至2.0ml，搖勻，在冰水浴中緩緩滴加0.2%蒽酮-硫酸溶液至刻度，混勻，放冷后置水浴中保溫10分鐘，取出，立即置冰水浴中冷卻10分鐘。取出，以相應(yīng)試劑為空白。照紫外?？梢姺止夤舛确ǎā吨袊?guó)藥典～2015年版通則0401》）在582nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性方程，A=0.0395C+0.0547，r=0.9996.結(jié)果見表1及圖1.

結(jié)果表明，無水葡萄糖在3.319-19.914ug/ml范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

2.1.2黃精不同炮制品的含量測(cè)定

供試品溶液的制備

取60℃干燥至恒重的黃精片、酒黃精、制黃精、九制黃精細(xì)粉各約0.25g，精密稱定，分別置圓底燒瓶中，各加80%乙醇150ml，置水浴中加熱回流1小時(shí)，趁熱濾過，殘?jiān)?0%熱乙醇洗滌3次，每次10ml，將殘?jiān)盀V紙置燒瓶中，加水150ml，置沸水浴中加熱回流1小時(shí)，趁熱濾過，殘?jiān)盁坑脽崴礈?次，每次10ml，合并濾液與洗液，放冷，轉(zhuǎn)移至250ml量瓶中，加水至刻度，搖勻。

黃精不同炮制品多糖含量測(cè)定 精密量取各供試品溶液lml，分別置10ml具塞干燥試管中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下的方法，自“加水至2.0ml"起，依法測(cè)定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中含無水葡萄糖的重量（mg），計(jì)算，即得。各炮制品作六個(gè)批次。結(jié)果見表2及圖2.

該法為藥典2015版收載的方法，穩(wěn)定可靠，科學(xué)簡(jiǎn)便，故不再做方法學(xué)考查。

結(jié)果表明，黃精經(jīng)炮制后，多糖含量降低，多糖含量由高到低分別為：黃精片>九制黃精>酒黃精>制黃精。

2.2黃精不同炮制品的浸出物測(cè)定

取黃精片、酒黃精、制黃精、九制黃精供試品各約2g，精密稱定，分別置150ml的錐形瓶中，精密加稀乙醇各100ml，密塞，稱定重量，靜置1小時(shí)后，連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸1小時(shí)。放冷后，取下錐形瓶，密塞，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用干燥濾器濾過，精密量取濾液25ml，置己干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小時(shí)，置干燥器中冷卻30分鐘，迅速精密稱定重量，計(jì)算，即得。各炮制品作六個(gè)批次。結(jié)果見表3及圖3

結(jié)果表明，黃精經(jīng)炮制后，制黃精浸出物降低，酒黃精、九制黃精浸出物升高，浸出物由高到低分別為：九制黃精>酒黃精>黃精片>制黃精。

2.3黃精不同炮制品薄層色譜的比較

分別取黃精片、酒黃精、制黃精、九制黃精粉末各1g，各加70%乙醇20ml，加熱回流1小時(shí)，抽濾，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，加正丁醇振搖提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)蛹状糽ml使溶解，作為供試品溶液。另取黃精對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法（《中國(guó)藥典》2015年版通則0502）試驗(yàn)，吸取上述溶液各10ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60-90℃）-乙酸乙酯-甲酸（5：2：0.1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在1050CN熱至斑點(diǎn)顯色清晰，得黃精片、酒黃精、制黃精、九制黃精及黃精對(duì)照藥材薄層色譜，結(jié)果見圖4

結(jié)果表明，黃精片、酒黃精、制黃精、九制黃精薄層色譜與黃精對(duì)照藥材無明顯差異。

3討論

3.1通過以上實(shí)驗(yàn)，對(duì)黃精不同炮制品的成分變化作了初步探討。結(jié)果表明：黃精經(jīng)臨方炮制后，多糖含量降低，多糖含量由高到低分別為黃精片>九制黃精>酒黃精>制黃精;同時(shí)，制黃精浸出物降低，酒黃精、九制黃精浸出物升高，浸出物由高到低分別為：九制黃精>酒黃精>黃精片>制黃精;薄層色譜表明各炮制品與對(duì)照藥材無明顯差異。初步認(rèn)為采用蒸制法和用輔料黃酒是確保黃精炮制質(zhì)量的關(guān)鍵。

3.2目前關(guān)于黃精的刺激性作用，普遍認(rèn)為其中的黏液質(zhì)是主要成分，黏液質(zhì)屬多糖類物質(zhì)，黃精經(jīng)炮制后多糖類含量降低，可能是黏液質(zhì)被分解的結(jié)果。

3.3黃精的藥理作用研究多集中在黃精多糖、黃精皂苷及炮制過程中明顯增多的5-羥甲基糠醛上。黃精多糖被認(rèn)為是黃精的主要藥效成分，本實(shí)驗(yàn)中，炮制后多糖含量下降，這與多個(gè)研究報(bào)道的結(jié)果一致。而又有研究認(rèn)為，炮制前后的多糖藥理作用并沒有顯著性差異，盡管多糖含量下降，但由于多糖水解成了易于煎出的低聚糖和單糖，才更有利于藥效的發(fā)揮。目前對(duì)黃精炮制增效的機(jī)制探討主要集中在黃精多糖質(zhì)變和量變方面，而黃精多糖是否就是唯一的或者是最主要的藥效成分，以及黃精中的其他成分是否對(duì)炮制后藥效增強(qiáng)也起到了關(guān)鍵作用，仍然有待于進(jìn)一步研究。

3.4黃精成分豐富，炮制后其成分及浸出物含量的改變，既有炮制過程中發(fā)生化學(xué)反應(yīng)的作用，也有加入輔料炮制促進(jìn)有效成分溶解的作用。黃精的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)需更加全面考慮多個(gè)因素，而黃精炮制后，補(bǔ)益作用增強(qiáng)，可能與組成成分改變（包括化學(xué)結(jié)構(gòu)改變、有效成分增多、各成分構(gòu)成比例改變）、成分溶出提高、氨基酸含量增多等有關(guān)。因此，有必要對(duì)黃精炮制前后的化學(xué)成分進(jìn)行更深入的研究，并結(jié)合藥理實(shí)驗(yàn)以闡明黃精炮制前后減毒增效的作用機(jī)制，從而為制定黃精及其炮制品的質(zhì)量控制體系奠定基礎(chǔ)。

致謝：感謝成都新荷花中藥飲片公司周靜波博士及其團(tuán)隊(duì)提供有關(guān)實(shí)驗(yàn)支撐。