代玉立 甘林 阮宏椿 楊靜民 石妞妞 杜宜新 陳福如 楊秀娟

摘?要：【目的】明確適用于福建省玉米大斑病菌ISSR分子標(biāo)記的反應(yīng)體系和引物。【方法】采用單因素水平優(yōu)化法對(duì)ISSR-PCR擴(kuò)增反應(yīng)中的Taq聚合酶用量、dNTPs濃度、Mg2+濃度、模板DNA濃度、PCR反應(yīng)循環(huán)數(shù)以及引物的最佳退火溫度等重要參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化?！窘Y(jié)果】適合福建省玉米大斑病菌群體遺傳多樣性分析的ISSR-PCR反應(yīng)體系（25 μL）為：Taq聚合酶0.55 U、dNTPs 0.30 mmol·L-1、Mg2+ 1.30 mmol·L-1、DNA模板100 ng、引物10 pmol。ISSR-PCR擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性4 min;94℃變性45 s，51.2～56.0℃退火45 s，72℃延伸1.5 min，35個(gè)循環(huán);72℃延伸10 min。利用優(yōu)化的反應(yīng)體系從56條ISSR引物中篩選出穩(wěn)定性好、多態(tài)性高的引物10條：UBC117、UBC118、UBC808、UBC835、UBC847、UBC855、UBC856、UBC857、UBC866和UBC887，其最佳退火溫度分別為55.6、53.1、51.2、51.2、56.0、53.1、53.1、51.2、51.2和51.2℃。利用優(yōu)化的ISSR-PCR反應(yīng)體系對(duì)21株供試菌株進(jìn)行PCR擴(kuò)增，結(jié)果表明，相同地理來(lái)源以及不同地理來(lái)源菌株間的DNA多態(tài)性均不同，表明福建省玉米大斑病菌群體存在豐富的遺傳多樣性?！窘Y(jié)論】本研究?jī)?yōu)化的ISSR-PCR反應(yīng)體系和篩選的引物可用于福建省玉米大斑病菌群體遺傳多樣性和遺傳結(jié)構(gòu)的研究。

關(guān)鍵詞：玉米大斑病菌;反應(yīng)體系;簡(jiǎn)單序列重復(fù)區(qū)間擴(kuò)增多態(tài)性;玉米大斑病;遺傳多樣性

中圖分類號(hào)：S 432.4文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1008-0384（2019）07-810-08

Abstract：【Objective】To determine the optimal reaction conditions and primers for the inter-simple sequence repeat （ISSR） PCR in analyzing isolates of Exserohilum turcicum， a pathogen of the northern corn leaf blight in Fujian. 【Method】Conditions for the ISSR-PCR amplification including Taq polymerase dosage，concentrations of dNTPs， Mg2+ and template DNA and reaction cycle as well as annealing temperatures for selected primers were optimized using a single-factor method. 【Result】 For a 25 μL ?ISSR-PCR genetic diversity analysis on E. turcicum， the following conditions were applied： 0.55 U of Taq polymerase， 0.30 mmoL·L-1 of dNTPs， 1.30 mmoL·L-1 of Mg2+， 100 ng of template DNA， and 10 pmol of primer under 94℃ for 4 min followed by 35 cycles of 45 s at 94℃， 45 s at 51.2-56.0℃， and 1.5 min at 72℃， and finally， at 72℃ for 10 min. Ten stable， polymorphic primers， i.e.， UBC117， UBC118， UBC808， UBC835， UBC847， UBC855， UBC856， UBC857， UBC866， and UBC887， were selected from 56 ISSR primers， with their optimized annealing temperatures determined to be 55.6， 53.1， 51.2， 51.2， 56.0， 53.1， 53.1， 51.2， 51.2， and 51.2℃， respectively. Regardless of their geographical origins， the 21 E. turcicum isolates differed on DNA polymorphism indicating an abundance on genetic diversity among them. 【Conclusion】The optimized ISSR-PCR reaction conditions and primers could be applied for genetic studies on E. turcicum in Fujian.

Key words： Exserohilum turcicum; reaction conditions; inter-simple sequence repeat; northern corn leaf blight; genetic diversity

0?引言

【研究意義】鮮食或加工型玉米是福建省重要的經(jīng)濟(jì)作物[1]。由大斑突臍蠕孢菌Exserohilum turcicum （Pass.） Leonard et Suggs（有性態(tài)：Setosphaeria turcica Leonard et Suggs）侵染引起的玉米大斑病是玉米生產(chǎn)上的世界性病害，該病可在玉米整個(gè)生育期發(fā)生，一般減產(chǎn)20%，重者可達(dá)50%以上，大斑病的流行嚴(yán)重影響了福建省鮮食玉米的產(chǎn)量和品質(zhì)[2-4]。玉米大斑病菌具有寄主適應(yīng)性強(qiáng)、變異頻繁和生理分化明顯等特點(diǎn)。研究表明玉米大斑病菌可在自然條件下頻繁進(jìn)行有性生殖，不同交配型和寄主適合度的2株室內(nèi)誘導(dǎo)產(chǎn)生的F1代玉米大斑病菌菌株進(jìn)行有性雜交形成的F2代菌株群體中，有30%的菌株在產(chǎn)孢量、毒素產(chǎn)量以及致病力上有顯著增強(qiáng)[2，5]。由于玉米大斑病菌頻繁地進(jìn)行有性重組，造成病菌變異頻率顯著提升和新的生理小種不斷出現(xiàn)[4-6]，這為病害的長(zhǎng)期可持續(xù)控制和鮮食玉米的優(yōu)質(zhì)、安全生產(chǎn)帶來(lái)了困擾。最經(jīng)濟(jì)、有效的防治玉米大斑病的措施是種植抗病品種[7]，但是福建省適宜的氣候條件以及高復(fù)種指數(shù)，致使田間玉米大斑病菌強(qiáng)適應(yīng)性新小種不斷積累，加之該菌的遺傳變異性常常導(dǎo)致玉米品種抗病性喪失。因此，深入探討玉米大斑病菌群體的DNA指紋圖譜，揭示病菌流行群體的遺傳多樣性和遺傳結(jié)構(gòu)，對(duì)了解病菌群體的變異趨勢(shì)以及指導(dǎo)抗病玉米品種的選育具有重要的意義?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】已有隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性（Random Amplified Polymorphic DNA，RAPD）[2，8-9]、擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性（Amplified Fragment Length Polymorphism，AFLP）[10]、通用引物聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Universally primed polymerase chain reaction，UP-PCR）[11]、簡(jiǎn)單重復(fù)序列標(biāo)記（Simple Sequence Repeat，SSR）[12-14]、簡(jiǎn)單序列重復(fù)區(qū)間擴(kuò)增多態(tài)性（inter-simple sequence repeat，ISSR）[15-17]等多種DNA分子標(biāo)記技術(shù)被應(yīng)用于國(guó)內(nèi)外玉米大斑病菌群體遺傳多樣性的研究中。在眾多DNA分子標(biāo)記中，ISSR分子標(biāo)記技術(shù)由于操作簡(jiǎn)單、穩(wěn)定性好以及多態(tài)性高，且無(wú)需知道靶標(biāo)的任何遺傳背景[18-19]，使其成為植物病原真菌群體遺傳多樣性和遺傳結(jié)構(gòu)研究的重要工具[20]。近年來(lái)，ISSR分子標(biāo)記技術(shù)已被廣泛應(yīng)用于Bipolaris maydis[1]、Puccinia polysora[21]、Cercospora zeina[22]、Sporisorium reilianum[23]、Fusarium graminearum[24]、Bipolaris zeicola[25]和Curvularia lunata[26]等玉米重要真菌病害的分子標(biāo)記研究中?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】迄今已報(bào)道適用于其他地理來(lái)源玉米大斑病菌群體的ISSR-PCR反應(yīng)體系和引物并不適用于福建省玉米大斑病菌種群?！緮M解決的關(guān)鍵問(wèn)題】本研究采用單因素水平優(yōu)化法對(duì)ISSR-PCR擴(kuò)增反應(yīng)中的Taq聚合酶用量、dNTPs濃度、Mg2+濃度、模板DNA濃度、PCR反應(yīng)循環(huán)數(shù)以及引物的退火溫度等重要參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，并利用優(yōu)化的反應(yīng)體系和擴(kuò)增條件從植物病原真菌基因組DNA重復(fù)序列ISSR引物庫(kù)中篩選重復(fù)性好、多態(tài)性高的引物，以期建立適合福建省玉米大斑病菌ISSR分子標(biāo)記的反應(yīng)體系和引物，為福建省玉米大斑病菌的群體遺傳多樣性和遺傳結(jié)構(gòu)研究奠定基礎(chǔ)。

1?材料與方法

1.1?試驗(yàn)材料

馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）培養(yǎng)基：新鮮去皮馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、瓊脂粉16 g、去離子水1 000 mL。121℃濕熱滅菌20 min。

試劑和引物：Taq酶、dNTPs、MgCl2溶液和5-kb DNA Marker均購(gòu)自大連寶生物有限公司;其他分析純生化試劑購(gòu)自索萊寶（北京）生物有限公司;供試的56個(gè)ISSR引物篩選至加拿大哥倫比亞大學(xué)設(shè)計(jì)的植物病原真菌基因組DNA重復(fù)序列ISSR引物庫(kù)（http：/www.michaelsmith.ubc.ca）并結(jié)合谷守芹[15]和郭麗媛[16]等文獻(xiàn)報(bào)道，引物委托上海英濰捷基生物技術(shù)有限公司合成。

儀器：C1000TM Thermal Cycler梯度PCR儀（美國(guó)Bio-Rad公司）、Nanodrop 2000c核酸定量?jī)x（賽默飛世爾科技公司）、DYY-6C型電泳系統(tǒng)（北京六一儀器廠）、BioDoc-ItTM凝膠成像系統(tǒng)（美國(guó)UVP公司）、ZWY-240恒溫振蕩培養(yǎng)箱（上海智城分析儀器制造有限公司）。

1.2?試驗(yàn)方法

1.2.1?玉米大斑病菌的分離和保存?2016-2019年從福建省建甌、松溪、屏南和南靖等縣（市）的鮮食玉米田采集具有典型玉米大斑病癥狀的玉米病葉，切取病健交界處的組織塊（0.5 cm × 0.4 cm）依次置于75% （V/V）酒精和0.1% （W/V） 氯化汞溶液中消毒2 min和90 s，無(wú)菌水清洗3次，28℃黑暗培養(yǎng)4～5 d，通過(guò)單孢分離法獲取純培養(yǎng)菌株（表1）。所有單孢菌株均經(jīng)過(guò)形態(tài)學(xué)和rDNA-ITS序列分析鑒定，確定供試菌株為玉米大斑病菌[27-28]。分離純化的單孢菌株采用濾紙片法保存于-20℃冰箱中[29]。

1.2.2?玉米大斑病菌DNA的提取?玉米大斑病菌的DNA提取方法采用改良的CTAB法[30]。用無(wú)菌手術(shù)刀刮取PDA平板上培養(yǎng)6 d的菌絲置于2 mL無(wú)菌離心管中，向管中加入800 μL提取液[2% CTAB （w/v），100 mmol·L-1 Tris-HCl （pH 8.0），20 mmol·L-1 EDTA，1.4 mol·L-1 NaCl]、80 μL 10% 的SDS和880 μL酚/氯仿/異戊醇（25∶24∶1），輕柔混勻，37℃、180 r·min-1搖床上振蕩1.0 h，12 000 r·min-1離心20 min，將600 μL上清液移至無(wú)菌1.5 mL離心管中，加入600 μL異丙醇，輕柔混勻，-20℃冰箱中沉淀30 min，12 000 r·min-1離心20 min，沉淀用800 μL 75%冰乙醇洗滌2次，12 000 r·min-1離心15 min，無(wú)菌操作臺(tái)上室溫干燥20 min。DNA用100 μL TE緩沖液（10 mmol·L-1 Tris-HCl，1 mmol·L-1 EDTA，pH 8.0）溶解，再加入2 μL RNA降解酶（20 mg·mL-1）于37℃酶解1 h。所有菌株的DNA樣品均通過(guò)核酸定量?jī)x測(cè)定DNA濃度和質(zhì)量，OD260/OD280值在1.8左右說(shuō)明DNA純度達(dá)到實(shí)驗(yàn)要求。提取的DNA樣品保存于-20℃冰箱中。

1.2.3?ISSR-PCR反應(yīng)體系的優(yōu)化?用TE緩沖液分別將玉米大斑病菌JO1801、DFDB1901、SX1801、PNDB1602a和NJDB1805菌株的基因組DNA濃度稀釋到200 ng·μL-1，作為ISSR-PCR的模板。ISSR引物為UBC847。25 μL ISSR-PCR反應(yīng)體系：Taq聚合酶用量分別為0.25、0.35、0.45、0.55、0.65（推薦劑量）、0.75、0.85和0.95 U;dNTPs濃度梯度為0.07、0.10、0.14、0.17、0.20（推薦劑量）、0.23、0.26、0.30 mmol·L-1;Mg2+濃度梯度為0.5、0.8、1.0、1.3、1.5（推薦劑量）、1.7、2.0、2.2 mmol·L-1;DNA模板濃度梯度為50、100、150、200 ng。

ISSR-PCR擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性4 min;94℃變性45 s，退火溫度梯度為56.0、55.6、54.7、53.1、51.2、49.6、48.5和48.0℃退火45 s，72℃延伸90 s，25、30、35或40個(gè)循環(huán);72℃延伸10 min;4℃保存。PCR結(jié)束后取7 μL擴(kuò)增產(chǎn)物用含有EB的1.5%瓊脂糖凝膠在120 V恒定電壓下電泳約35 min，用凝膠成像系統(tǒng)檢測(cè)并照相。

1.2.4?ISSR-PCR引物的篩選?利用上述優(yōu)化的反應(yīng)體系和擴(kuò)增條件，通過(guò)梯度PCR擴(kuò)增對(duì)56條ISSR引物進(jìn)行篩選，退火溫度梯度為56.0、55.6、54.7、53.1、51.2、49.6、48.5和48.0℃。最終篩選擴(kuò)增條帶清晰、多態(tài)性好的引物，同時(shí)確定引物的最佳退火溫度。

1.2.5?ISSR-PCR擴(kuò)增?利用優(yōu)化的ISSR-PCR反應(yīng)體系及擴(kuò)增條件和篩選的多態(tài)性好的引物對(duì)21個(gè)供試菌株進(jìn)行ISSR擴(kuò)增。

2?結(jié)果與分析

2.1?ISSR-PCR反應(yīng)體系的優(yōu)化

以引物UBC847為例，對(duì)Taq聚合酶用量的優(yōu)化結(jié)果表明，25 μL的ISSR-PCR反應(yīng)體系中0.55 U的Taq聚合酶用量即可擴(kuò)增出條帶清晰、穩(wěn)定性好的DNA指紋圖譜（圖1-A）。設(shè)置的8個(gè)dNTPs濃度梯度內(nèi)，7個(gè)能擴(kuò)增出DNA條帶，在濃度為0.30 mmol·L-1時(shí)擴(kuò)增出的DNA指紋圖譜清晰、重復(fù)性好（圖1-B）。Mg2+濃度對(duì)ISSR-PCR的擴(kuò)增結(jié)果有較大影響，Mg2+濃度過(guò)低或過(guò)高，擴(kuò)增的條帶或弱或多態(tài)性不豐富，當(dāng)Mg2+濃度為1.3 mmol·L-1時(shí)擴(kuò)增出的條帶較清晰、多態(tài)性較好（圖1-C）。本研究設(shè)置的50～200 ng 模板DNA濃度均能有效地?cái)U(kuò)增出清晰的DNA指紋圖譜（圖1-D），表明本研究設(shè)置的DNA模板用量在25 μL ISSR-PCR反應(yīng)體系中對(duì)擴(kuò)增結(jié)果影響不顯著。本試驗(yàn)設(shè)置的25～40個(gè)循環(huán)數(shù)均能擴(kuò)增出DNA條帶，循環(huán)數(shù)過(guò)少，擴(kuò)增的條帶較少且亮度較暗，循環(huán)數(shù)越多，擴(kuò)增的條帶越多且亮度越亮。當(dāng)循環(huán)數(shù)為35次時(shí)，擴(kuò)增的條帶較清晰且亮度適中，當(dāng)循環(huán)數(shù)為40次時(shí)，擴(kuò)增的部分條帶亮度過(guò)強(qiáng)，有覆蓋臨近的條帶的趨勢(shì)（圖1-E）。當(dāng)退火溫度值為56.0℃時(shí)，擴(kuò)增的條帶越多且亮度適中;隨著退火溫度值的降低，擴(kuò)增的條帶亮度降低或條帶數(shù)減少（圖2）。

綜合上述優(yōu)化結(jié)果，使用引物UBC847，適合福建省玉米大斑病菌ISSR擴(kuò)增的最適反應(yīng)體系為：25 μL反應(yīng)體積中，Taq聚合酶用量0.55 U，dNTPs濃度為0.30 mmol·L-1，Mg2+濃度為1.3 mmol·L-1，模板DNA濃度100 ng，引物終濃度0.4 pmol（Taq酶反應(yīng)體系推薦用量，本研究未優(yōu)化）;ISSR-PCR擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性4 min;94℃變性45 s，56.0℃退火45 s，72℃延伸1.5 min，35個(gè)循環(huán);72℃延伸10 min。

2.2?ISSR-PCR引物的篩選

利用福建省5個(gè)玉米大斑病菌菌株的基因組DNA混合樣品為模板和優(yōu)化的反應(yīng)體系及擴(kuò)增條件，最終篩選出UBC117、UBC118、UBC808、UBC835、UBC847、UBC855、UBC856、UBC857、UBC866和UBC887等10條擴(kuò)增條帶清晰、重復(fù)性好且多態(tài)性豐富的ISSR-PCR引物（表2）。

通過(guò)梯度PCR擴(kuò)增對(duì)篩選的UBC117、UBC118、UBC808、UBC835、UBC847、UBC855、UBC856、UBC857、UBC866和UBC887等10條引物的最佳退火溫度進(jìn)行優(yōu)化，最終確定10條引物的最佳退火溫度分別為55.6、53.1、51.2、51.2、56.0、53.1、53.1、51.2、51.2和51.2℃（表2）。

2.3?ISSR-PCR擴(kuò)增

利用優(yōu)化的ISSR-PCR反應(yīng)體系和擴(kuò)增條件對(duì)供試的21株玉米大斑病菌進(jìn)行ISSR-PCR擴(kuò)增，結(jié)果表明，擴(kuò)增條帶的分子量介于100～5 000 bp，引物UBC847從20號(hào)菌株DNA中僅擴(kuò)增出2個(gè)條帶，而從其他菌株DNA中擴(kuò)增出4～6個(gè)條帶，表明不同菌株間的DNA多態(tài)性存在明顯差異（圖3-A）。引物UBC887從南靖縣的菌株DNA（17～21號(hào)菌株）中擴(kuò)增出0～5個(gè)條帶，而從建甌市的菌株DNA（1～8號(hào)菌株）中擴(kuò)增出4～5個(gè)條帶，表明相同地理來(lái)源以及不同地理來(lái)源菌株間的DNA多態(tài)性存在顯著差異（圖3-B）。上述結(jié)果表明，福建省玉米大斑病菌群體存在豐富的遺傳多樣性。

3?討論與結(jié)論

對(duì)ISSR-PCR反應(yīng)體系和擴(kuò)增條件進(jìn)行優(yōu)化，是獲得擴(kuò)增圖譜清晰、重復(fù)性好、多態(tài)性高的ISSR分子標(biāo)記結(jié)果的前提。本研究針對(duì)影響ISSR-PCR擴(kuò)增結(jié)果的重要參數(shù)，如Taq聚合酶用量、dNTPs濃度、Mg2+濃度、模板DNA濃度、擴(kuò)增循環(huán)數(shù)以及引物的退火溫度等分別進(jìn)行單因素4～8個(gè)水平的系統(tǒng)優(yōu)化，試驗(yàn)結(jié)果表明，Taq聚合酶用量、dNTPs濃度、Mg2+濃度和擴(kuò)增循環(huán)數(shù)對(duì)ISSR-PCR反應(yīng)體系均有明顯影響，而50～200 ng的模板DNA用量對(duì)反應(yīng)體系的影響不明顯。通過(guò)單因素優(yōu)化法建立了適合福建省玉米大斑病菌ISSR分子標(biāo)記的最適反應(yīng)體系和擴(kuò)增條件。該ISSR-PCR反應(yīng)體系和擴(kuò)增條件的建立為進(jìn)一步在DNA分子水平上揭示福建省玉米大斑病菌的遺傳變異和遺傳結(jié)構(gòu)以及深入探討病菌的遺傳變異、生理分化與致病性之間的關(guān)系奠定了基礎(chǔ)。

不同地理來(lái)源和不同遺傳背景的相同物種對(duì)ISSR分子標(biāo)記的引物要求存在一定的差異性。谷守芹等報(bào)道適合我國(guó)北方地區(qū)玉米大斑病菌的ISSR分子標(biāo)記的引物包括UBC112、UBC113、UBC117、UBC118和UBC121等9條[15]。郭麗媛篩選的適合我國(guó)玉米大斑病菌的ISSR分子標(biāo)記的引物包括UBC112、UBC113、UBC117、UBC118、UBC121、UBC808、UBC835、UBC847、UBC855、UBC887和UBC888等18條[16]。本研究采用優(yōu)化的ISSR-PCR反應(yīng)體系從引物庫(kù)中篩選出UBC117、UBC118、UBC808、UBC835、UBC847、UBC855、UBC856、UBC857、UBC866和UBC887等10條適合福建省玉米大斑病菌ISSR分子標(biāo)記的引物。而文獻(xiàn)中報(bào)道的引物UBC112、UBC113和UBC121并不適合福建省玉米大斑病菌種群。

明確ISSR分子標(biāo)記引物的最佳退火溫度是決定試驗(yàn)成敗的又一重要因素。一般情況下，退火溫度越低，擴(kuò)增的DNA指紋圖譜模糊、弱帶多;退火溫度越高，不利于長(zhǎng)片段的擴(kuò)增，所以擴(kuò)增的DNA指紋圖譜條帶偏少[15]。本研究通過(guò)梯度PCR擴(kuò)增優(yōu)化出10條ISSR引物的最佳退火溫度范圍為51.2～56.0℃。引物UBC117的退火溫度為55.6℃，與谷守芹等[15]的報(bào)道較為一致，但是明顯高于郭麗媛的優(yōu)化結(jié)果。UBC118、UBC808、UBC835和UBC855的退火溫度，與郭麗媛[16]的優(yōu)化結(jié)果較為一致，但是引物UBC118的退火溫度顯著低于谷守芹等[15]的報(bào)道。這可能是由于不同ISSR反應(yīng)體系中Mg2+濃度不同以及病菌具有不同的遺傳背景所致。

Borchardt等[2]利用RAPD技術(shù)研究歐洲玉米大斑病菌群體遺傳多樣性時(shí)發(fā)現(xiàn)，病菌群體具有26個(gè)不同的RAPD單元型且病菌群體存在豐富的DNA多態(tài)性。Tang等[11]通過(guò)UP-PCR研究發(fā)現(xiàn)，來(lái)自中國(guó)玉米S. turcica f. sp. zeae和高粱S. turcica f. sp. sorghi上的兩個(gè)S. turcica致病性?；腿后w的DNA多態(tài)性高達(dá)82%以上，表明不同寄主來(lái)源的S. turcica群體存在豐富的遺傳多樣性，且與地理來(lái)源相比，兩個(gè)S. turcica致病性?；团c遺傳多樣性的關(guān)系更密切。谷守芹等[15]利用ISSR-PCR研究表明，中國(guó)玉米大斑病菌的遺傳多樣性與病菌的交配型存在一定的相關(guān)性，而與菌株的地理來(lái)源和生理小種沒(méi)有明顯的相關(guān)性。本研究發(fā)現(xiàn)，相同地理來(lái)源以及不同地理來(lái)源菌株間的DNA多態(tài)性均不同，表明福建省玉米大斑病菌群體存在豐富的遺傳多樣性。由于本研究主要目的在于建立ISSR-PCR反應(yīng)體系，群體分析時(shí)所用的病菌菌株數(shù)量較小，因此，有必要進(jìn)一步擴(kuò)大采樣的空間范圍和樣本數(shù)量，深入研究福建省玉米大斑病菌群體的遺傳多樣性和遺傳結(jié)構(gòu)，同時(shí)揭示病菌群體的遺傳多樣性和遺傳結(jié)構(gòu)與病菌的地理來(lái)源、交配型、生理小種以及致病性之間的關(guān)系。

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（責(zé)任編輯：林海清）