張玉格

（華北制藥股份有限公司，河北 石家莊 050000）

引言

青霉素類藥物是抗生素藥物的重要組成部分，是β-內(nèi)酰胺類抗生素的藥物總稱，包括阿莫西林膠囊、注射用氟氯西林鈉、注射用青霉素鈉以及注射用氨芐西林鈉等藥物，其中注射用氟氯西林鈉為半合成的耐青霉素酶青霉素。其作用機(jī)制與青霉素G相似。臨床中，根據(jù)患者的體質(zhì)不同，很多患者在應(yīng)用青霉素類藥物時(shí)，身體會(huì)出現(xiàn)不同程度的過敏反應(yīng)，如過敏性休克、皮疹、藥物熱等，其中，過敏性休克可能會(huì)危及患者的生命，是最為嚴(yán)重的一種過敏反應(yīng)。通過大量的研究驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)容易引發(fā)患者產(chǎn)生青霉素類藥物過敏反應(yīng)的源頭其實(shí)是再來自身細(xì)胞在其生產(chǎn)和儲(chǔ)存過程中產(chǎn)生的一種“雜質(zhì)”，這種雜質(zhì)就是高分子聚合物，為此，解決這些雜質(zhì)，不斷的加強(qiáng)對(duì)青霉素類藥物聚合物的檢測(cè)準(zhǔn)確性，實(shí)現(xiàn)對(duì)其含量的嚴(yán)格控制，需要一個(gè)具有高度準(zhǔn)確性和可靠性的測(cè)定方法。聚合物是2000版藥典新增項(xiàng)目，2010年版藥典聚合物控制品種增加到37個(gè)，2015年版藥典中聚合物控制延續(xù)并延伸至新品注冊(cè)研究領(lǐng)域，而注射用氟氯西林鈉聚合物檢測(cè)并未在2015年藥典中收載?；诖?，對(duì)注射用氟氯西林鈉聚合物檢測(cè)方法進(jìn)行探析，并深入研究具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

一、試驗(yàn)的基礎(chǔ)儀器和試劑

（一）基本檢測(cè)的試驗(yàn)儀器

①Waters E2695高效液相色譜儀器；②葡聚糖凝膠色譜柱Sep-hadexTMG-10；③電子天平AX205DR。

（二）試驗(yàn)的主要試劑與主要的對(duì)照品

主要的試劑：1.0g/支的注射用氟氯西林鈉；藍(lán)色葡萄糖溶液2000ml；磷酸氫二鈉溶液；磷酸二氫鈉溶液；無水碳酸鈉溶液。

主要實(shí)驗(yàn)對(duì)照品：氟氯西林。

二、試驗(yàn)方法與結(jié)果

（一）開展試驗(yàn)的基礎(chǔ)條件

利用高效液色譜法中的分子排阻方法作為整個(gè)實(shí)驗(yàn)的主要方法，葡聚糖凝膠色譜柱為親水性：Sep-hadexTMG-10（300*10mm），流動(dòng)相A為pH7.0的0.1mol/L磷酸氫二鈉溶液-0.01mol/L磷酸二氫鈉溶液（61：39），流動(dòng)相B為水，流速為每分鐘0.8ml，檢測(cè)的波長(zhǎng)為254nm，柱體溫度為30℃，進(jìn)樣量為100ul。

（二）精密度的測(cè)定

重復(fù)性：取注射用氟氯林鈉約400mg，精密稱定六份，用純化水溶解至10ml容量瓶中，定容至刻度，搖勻，作為供試品溶液，在以上系統(tǒng)條件下測(cè)定，記錄色譜圖，以外標(biāo)法計(jì)算測(cè)定的色譜圖中氟氯西林聚合物含量。計(jì)算六次測(cè)定所得的氟氯西林聚合物含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，詳細(xì)情況請(qǐng)見下表1和表2。

中間精密度：取三批注射用氟氯林鈉約400mg，精密稱定各一份，分別用純化水溶解至10ml容量瓶中，定容至刻度，搖勻，作為供試品溶液，由兩名分析員采用不同儀器分別在以上色譜系統(tǒng)條件下測(cè)定，記錄色譜圖，以外標(biāo)法計(jì)算測(cè)定的色譜圖中聚合物含量。計(jì)算此三批樣品每?jī)扇藴y(cè)定所得的氟氯西林聚合物含量的相對(duì)偏差。

表1 重復(fù)性測(cè)量結(jié)果

重復(fù)性四 0.028重復(fù)性五 0.027重復(fù)性六 0.028

表2 中間精密度測(cè)定結(jié)果

（三）定量限測(cè)定

精密稱取氟氯西林對(duì)照品19.99mg，加純化水溶解并稀釋至200ml，搖勻。精密吸取上溶液6.0ml，用純化水稀釋至100ml，進(jìn)樣100μl，以流動(dòng)相B為流動(dòng)相，于（1）色譜系統(tǒng)條件下測(cè)定，記錄色譜圖，計(jì)算主峰的信噪比為10.1，此時(shí)樣品濃度為5.5532×10-3mg/ml，以此濃度的樣品再連續(xù)測(cè)定5次，計(jì)算五次主峰峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.7%，此方法的定量限為5.5532×10-3mg/ml。詳細(xì)情況見下表3：

表3

（四）耐用性測(cè)定

精密稱取注射用氟氯林鈉約412mg，用純化水溶解至10ml容量瓶中，定容至刻度，搖勻，作為供試品溶液，放置于5℃低溫箱中，分別在0h、7h、11h、14h、17h時(shí)于（1）色譜系統(tǒng)條件下測(cè)定，記錄色譜圖，以外標(biāo)法計(jì)算不同時(shí)間測(cè)定的色譜圖中聚合物含量，經(jīng)計(jì)算不同時(shí)間測(cè)定的聚合物含量和與0時(shí)的變化值均為0.0%，證明供試品溶液在5℃低溫箱中中17h內(nèi)穩(wěn)定。詳見表4。

表4

三、討論

文章通過對(duì)注射用氟氯西林鈉中的聚合物測(cè)定方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)分析，從實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)中了解到其測(cè)定方法具有良好的重現(xiàn)性，并且準(zhǔn)確性與可靠性較高，能夠準(zhǔn)確測(cè)定注射用氟氯西林鈉中高分子聚合物含量?；诖?，可以確認(rèn)出其對(duì)于青霉素類藥物抗生素中注射用氟氯西林鈉的高分子聚合物含量測(cè)定可以得出準(zhǔn)確度、可靠度較高的結(jié)果，注射用氟氯西林鈉中聚合物含量在0.03%左右，存在致敏風(fēng)險(xiǎn)，建議進(jìn)行聚合物控制。