禚寶山　章紅軍　范鵬程　歐士利　馮佩平摘譯

摘 ?要：自2007年以來(lái)，非洲豬瘟（African Swine Fever，ASF）在東歐的豬群中持續(xù)流行，俄羅斯聯(lián)邦在中部和南部地區(qū)已發(fā)現(xiàn)兩個(gè)非洲豬瘟流行區(qū)。中毒力至低毒力ASF病毒分離株在地方性ASF感染區(qū)域中循環(huán)。為了提高人們對(duì)于ASF病毒感染恢復(fù)動(dòng)物中病毒傳播的知識(shí)，本試驗(yàn)進(jìn)行了體內(nèi)研究。用ASF病毒NH/P68毒株感染4只家豬，在感染72 d后在同一豬欄中引入另外2頭健康豬進(jìn)行同居。ASF感染豬發(fā)展成溫和型ASF，研究人員從感染豬的組織中分離出了ASF病毒，直至感染的第36天、第65天、第99天和第134天安樂死。同居豬表現(xiàn)出輕微的臨床癥狀或沒有臨床癥狀，但血清呈現(xiàn)ASF病毒抗體陽(yáng)性，研究人員在感染后28 d檢測(cè)到短暫的病毒血癥。同居豬的病毒傳播發(fā)生在同居后4周，原發(fā)感染后的3個(gè)月。本研究結(jié)果將有助于設(shè)計(jì)出能夠?qū)笰SF的更好、更有效的控制方案。

關(guān)鍵詞：非洲豬瘟;低毒力;感染;抗體;豬

中圖分類號(hào)：S855 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：C 文章編號(hào)：1001-0769（2019）07-0040-04

一個(gè)地區(qū)的豬群一旦確立非洲豬瘟（African Swine Fever，ASF）流行并具有廣泛的臨床癥狀和未來(lái)發(fā)病預(yù)期，豬群中感染超過一個(gè)月的豬可以從感染中恢復(fù)過來(lái)，但會(huì)保持亞臨床感染狀態(tài)。雖然研究人員在過去的幾十年中進(jìn)行了多次有關(guān)ASF的豬體內(nèi)試驗(yàn)，評(píng)估了幸存豬的體內(nèi)為什么能保留該病毒并存活，但仍然不知其中的原因。1960年，ASF在葡萄牙流行，8年后分離到毒株NH/P68，但已經(jīng)是弱毒株，這可能與病毒傳播過程中毒性減弱有關(guān)。ASF病毒BA71V毒株于1971年在西班牙分離到，其已經(jīng)能適應(yīng)Vero細(xì)胞培養(yǎng)。

歐洲機(jī)構(gòu)在研究ASF病毒在幸存豬上的傳播時(shí)，選擇低毒力的ASF病毒NH/P68株（1968年葡萄牙毒株）進(jìn)行豬體內(nèi)傳代研究，發(fā)現(xiàn)了感染后無(wú)癥狀及未感染的豬，并評(píng)估了病毒的傳播。

1 ?材料及方法

西班牙的Gallardo在P3實(shí)驗(yàn)室使用葡萄牙的ASF病毒NH/P68毒株感染豬，編號(hào)C1、C2、C3和C4，病毒含量105 TCID50/mL，肌肉注射1 mL，72 d后，編號(hào)為CC13和CC14的豬與其同居，每天統(tǒng)計(jì)7種癥狀的臨床得分，并匯總每日的臨床得分表（表1）。采血檢測(cè)豬的ASF抗體變化。

接種后，分別在第0天、第4天、第8天、第11天、第14天、第18天、第21天、第30天、第37天、第44天、第52天、第58天、第65天、第72天、第79天、第86天、第93天、第100天、第107天、第114天、第121天、第128天和第134天進(jìn)行觀察。對(duì)癥狀明顯并安樂死的豬采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase Chain Reaction，PCR）檢測(cè)ASF病毒。

2 ?結(jié)果

研究人員對(duì)編號(hào)為CC13和CC14的豬于同居后的第62天和第42天實(shí)施安樂死，感染豬安樂死的時(shí)間是感染后的第35天（C1）、第65天（C4）、第99天（C3）和第134天（C2）。同時(shí)對(duì)這些豬的臨床癥狀進(jìn)行評(píng)分、記錄體溫變化（圖1和圖2）和病毒檢測(cè)。

研究人員在肝臟、脾臟、扁桃體、心臟、肺臟、腎臟、關(guān)節(jié)和下頜下關(guān)節(jié)內(nèi)組織、咽、腹股溝、隱窩、腸系膜、縱隔、脾、腎和淋巴結(jié)等組織或器官中檢測(cè)到了ASF病毒。

感染的豬出現(xiàn)了不同的臨床癥狀：C2號(hào)豬表現(xiàn)出亞臨床感染，其他3頭豬的臨床癥狀強(qiáng)度為C1號(hào)豬>C3號(hào)豬>C4號(hào)豬。主要臨床癥狀有：反復(fù)性短暫發(fā)燒（以C1號(hào)和C4號(hào)豬為主），關(guān)節(jié)腫脹（中度至重度），皮膚發(fā)紅的區(qū)域變得僵硬和壞死（圖3），體重逐漸減輕，一個(gè)月內(nèi)發(fā)生痙攣性咳嗽等呼吸道癥狀（在C3號(hào)豬最明顯）。在病毒接種后第35天（C1號(hào)豬）、第65天（C4號(hào)豬）、第99天（C3號(hào)豬）和第134天（C2號(hào)豬）剖檢時(shí)都檢測(cè)到了ASF病毒（圖4），C1號(hào)豬和C4號(hào)豬發(fā)現(xiàn)了肉眼可見的病變。

Portugal報(bào)道，相關(guān)人員在伊比利亞半島對(duì)正常豬群接種了40多萬(wàn)頭份的減毒ASF疫苗，結(jié)果引發(fā)非典型的ASF感染。有證據(jù)表明，ASF病毒陽(yáng)性血清對(duì)ASF的抵抗作用不明，尸檢時(shí)可發(fā)現(xiàn)主要由慢性纖維蛋白組成的心包炎和干酪樣壞死以及鈣化的肺部，這與肺炎的存在有關(guān)（圖5），Pan指出這樣的慢性病的伴發(fā)癥狀和病變經(jīng)常被認(rèn)為是細(xì)菌繼發(fā)感染引起。感染低劑量或低毒力病毒的豬群在經(jīng)過多年后，將出現(xiàn)與之適應(yīng)的毒株。

3 ?討論

3.1 全程無(wú)癥狀豬

C2號(hào)豬在感染ASF病毒后一直無(wú)臨床癥狀，在第8天時(shí)檢測(cè)到抗體反應(yīng)并持續(xù)到第134天，外觀無(wú)臨床癥狀可能與低水平的抗體有關(guān);研究人員未在組織樣本中檢測(cè)到ASF病毒，在無(wú)癥狀豬檢測(cè)到的特異性抗體滴度比在慢性感染豬中檢測(cè)到的抗體滴度要低。但是，在生產(chǎn)中，它們的數(shù)量可能比較少。

3.2 發(fā)病后存在感染能力

豬患有慢性ASF癥狀14 d后出現(xiàn)病毒血癥和發(fā)燒，并檢測(cè)到高水平的抗ASF病毒特異性抗體和傳播病毒的能力，對(duì)生產(chǎn)影響大。通過引入的陰性豬試驗(yàn)，研究人員發(fā)現(xiàn)慢性ASF病毒感染豬能將ASF傳播給易感豬群，病毒很容易傳播，這可能是由于在豬的呼吸道中存在感染性ASF病毒。Carvalho研究表明，ASF病毒中等毒力株感染后的耐過豬在70 d后仍能通過口咽進(jìn)行排毒，并有感染能力。

本試驗(yàn)證明，感染3個(gè)月后恢復(fù)為無(wú)臨床癥狀的豬仍然能夠?qū)SF病毒傳播給抗原檢測(cè)為陰性的豬群。一些研究已經(jīng)證明當(dāng)ASF在當(dāng)?shù)爻蔀榈胤搅餍行载i病后，亞急性、慢性和亞臨床感染也會(huì)發(fā)生，死亡率下降，這可能與獲得性免疫增加有關(guān)。Penrith指出，這種癥狀變化后將難以識(shí)別，豬群可能表現(xiàn)為發(fā)育遲緩或消瘦，甚至可能出現(xiàn)類似其他疾病的臨床癥狀。Ordas報(bào)道，巴西等受影響地區(qū)、伊比利亞半島（1979-1981年）的實(shí)地研究揭示新爆發(fā)的疫情分別為3.5%和0.6%，由癥狀剛恢復(fù)的血清陽(yáng)性家豬引起。

3.3 亞臨床感染豬的后續(xù)發(fā)展

目前，多項(xiàng)研究已經(jīng)證明，ASF發(fā)病地區(qū)出現(xiàn)亞急性和慢性病程的病豬數(shù)量在增加，亞臨床感染也會(huì)發(fā)生，隨著時(shí)間的推移死亡率在下降。Sanchez-Vizcaino證明，ASF發(fā)病地區(qū)也會(huì)出現(xiàn)難以識(shí)別的感染場(chǎng)，感染可持續(xù)數(shù)月，但無(wú)特別明顯的癥狀，甚至可能出現(xiàn)類似豬圓環(huán)病的癥狀，表現(xiàn)為發(fā)育遲緩或消瘦，或類似其他疾病的表現(xiàn)。

4 ?結(jié)論

ASF病毒弱毒株仍有感染力，有的豬天然耐受，但有的豬帶毒不發(fā)病，但能表現(xiàn)感染力，抗體高低與癥狀表現(xiàn)關(guān)系不密切，同居豬的ASF病毒抗體產(chǎn)生需要21 d時(shí)間，而接種感染豬的抗體產(chǎn)生只需4 d，體溫達(dá)到高峰的時(shí)間差距達(dá)60 d。該試驗(yàn)證明，人們可以通過加強(qiáng)檢測(cè)來(lái)辨別豬場(chǎng)的隱性感染，并能進(jìn)一步降低隱性感染豬形成新的傳染源。