潘 登，張支鳳，吳康樂，楊樹龍，張德卓

（甘肅省血液中心，甘肅 蘭州 730046）

乙型肝炎由乙型肝炎病毒（HBV）感染所致，調(diào)查顯示我國普通人群的乙肝病毒流行率約為7.2%[1]。乙肝病毒可以通過血液傳播備受人們的關(guān)注[2]。隨著無償獻(xiàn)血事業(yè)的迅速發(fā)展，獻(xiàn)血隊(duì)伍不斷壯大，血液質(zhì)量日益提高，血液經(jīng)采集到臨床經(jīng)過了層層篩查，血站承擔(dān)了采集、保存、檢驗(yàn)、制備、供應(yīng)等各個(gè)環(huán)節(jié)的工作。因此，為保證臨床用血安全，減少因輸血導(dǎo)致的HBV感染，從2015年起，按照《血站技術(shù)操作規(guī)程（2015版）》的要求，從以前的“兩遍ELISA檢測”改為“兩遍ELISA檢測+一遍核酸檢測”的模式。本中心自執(zhí)行全面開展核酸檢測工作以來，將2015—2017年甘肅省紅十字血液中心無償獻(xiàn)血者HBV感染情況進(jìn)行調(diào)查分析，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 方法與材料

1.1 對象

選取2015年1月至2017年12月甘肅省紅十字血液中心檢測的169 808份無償獻(xiàn)血者標(biāo)本作為研究對象。

1.2 儀器與試劑

HBsAg體外診斷ELISA購于北京萬泰和廈門新創(chuàng)公司，HBV/HCV/HIV-1核酸檢測試盒購于上海科華公司，HBsAg及HBV DNA質(zhì)控品購自北京康徹斯坦生物技術(shù)有限公司（以上試劑均為批批檢合格，且在有效期內(nèi)使用），STAR全自動(dòng)加樣系統(tǒng)（奧斯邦HAMILTON），F(xiàn)AME24/20全自動(dòng)酶免系統(tǒng)（奧斯邦HAMILTON），科華核酸血液篩查系統(tǒng)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 血清學(xué)檢測 對所有樣本使用兩個(gè)不同廠家的ELISA試劑進(jìn)行HBsAg的檢測，若兩遍檢測結(jié)果為反應(yīng)性的標(biāo)本及單側(cè)試劑為反應(yīng)性的標(biāo)本判定為ELISA檢測陽性。

1.3.2 病毒核酸檢測 若兩遍檢測結(jié)果無反應(yīng)性的標(biāo)本及單側(cè)試劑為反應(yīng)性的標(biāo)本，使用上海科華公司的全自動(dòng)血液核酸檢測系統(tǒng)，進(jìn)行HBV/HCV/HIV-1項(xiàng)目8混樣分項(xiàng)目檢測，檢測結(jié)果為陽性的pool繼續(xù)做拆分實(shí)驗(yàn)，拆分鑒別試驗(yàn)反應(yīng)性的標(biāo)本判為HBV DNA陽性，陰性則判為HBV DNA陰性。

1.4 質(zhì)量控制

依據(jù)本實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目質(zhì)量控制的要求，試劑盒中的陰陽性對照符合預(yù)期要求，室內(nèi)質(zhì)控符合L-J質(zhì)控曲線中的在控，則本次實(shí)驗(yàn)有效。否則，本次實(shí)驗(yàn)無效，分析原因并重新實(shí)驗(yàn)。同時(shí)，參加國家衛(wèi)健委臨檢中心的室間質(zhì)評和本省臨檢中心的室間質(zhì)評，通過參比，結(jié)果合格。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)整理和統(tǒng)計(jì)分析，采用χ2檢驗(yàn)對影響獻(xiàn)血人群HBV感染的情況進(jìn)行分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α＝0.05。

2 結(jié)果

2.1 無償獻(xiàn)血者HBV總體感染情況

甘肅省紅十字血液中心2015—2017年無償獻(xiàn)血者共計(jì)169 808人份，總陽性率 0.393%，ELISA 陽性率為 0.359%，核酸陽性率為 0.034%，見表 1。

表1 甘肅省紅十字血液中心2015—2017年無償獻(xiàn)血者HBV感染總體情況[n（%）]

2.2 獻(xiàn)血者HBV感染的一般人口學(xué)特征（見表2）

通過分析獻(xiàn)血人群中HBV不合格人數(shù)比例發(fā)現(xiàn)，HBV感染者獻(xiàn)血人群的特征為18～25歲、男性、中專及以下、漢族、其他、初次獻(xiàn)血。

表2 甘肅省紅十字血液中心2015—2017年獻(xiàn)血者人口學(xué)特征

2.3 影響無償獻(xiàn)血者HBV感染率的單因素分析（見表3）

表3 獻(xiàn)血者HBV感染率的單因素分析

通過獻(xiàn)血者的單因素分析發(fā)現(xiàn)，年齡、性別、受教育程度、婚姻狀況、職業(yè)和獻(xiàn)血方式影響了獻(xiàn)血人群中HBV的感染，而民族并非是影響獻(xiàn)血人群HBV感染的因素。

3 討論

甘肅省紅十字血液中心自2015年開始使用“兩遍酶免+一遍核酸”的檢測策略篩查HBV，即對所有檢測樣本使用兩遍酶免進(jìn)行檢測，對酶免檢測結(jié)果為陰性的標(biāo)本再次進(jìn)行核酸檢測，文獻(xiàn)表明核酸檢測技術(shù)具有高度敏感性和特異性，能顯著縮短血液感染病毒檢測窗口期[3]。本調(diào)查研究為方便統(tǒng)計(jì)，使用2015—2017年以來的HBV檢測數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，以檢測陽性數(shù)字等同于感染人數(shù)，了解最新的獻(xiàn)血人群HBV感染分布規(guī)律。

3.1 優(yōu)化獻(xiàn)血前檢測項(xiàng)目可以有效降低HBV篩查陽性率

本中心2015年1月—2017年12月共檢測169 808份無償獻(xiàn)血標(biāo)本，檢出HBV陽性668份，其中ELISA陽性610份，NAT陽性58份，HBV平均陽性率為0.393%，低于國內(nèi)如廣州0.9%[4]，杭州 13.08%[5]，滄州 0.51%[6]，重慶市江津區(qū) 1.17%[7]。由于各地人群HBV流行率不同，血站采用的檢測流程和檢測試劑不同，各地HBV陽性率差異較大，本站對獻(xiàn)血者進(jìn)行獻(xiàn)血前體檢，分別用干式生化法檢測ALT和金標(biāo)法檢測HBV的聯(lián)合篩查，合格后進(jìn)入獻(xiàn)血環(huán)節(jié)。

3.2 血站全面開展核酸檢測有助于提高用血安全

本中心2015年1月—2017年12月HBV DNA核酸檢測陽性率為0.034%，低于2010—2013年濟(jì)南地區(qū)NAT檢測陽性率 0.067%[8]，2012—2013 年青島地區(qū) NAT 檢出率 0.068%[9]，常州NAT檢出率0.1%[10]。這可能與人群地域差異有關(guān)，各地使用的核酸檢測試劑和檢測策略有差異，同時(shí)流行率在很大程度上取決于所使用的血清學(xué)和NAT檢測方法的靈敏度[11]，核酸檢測實(shí)驗(yàn)室在加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室管理的同時(shí)，要做好核酸樣本管理，從采集、離心溫度和轉(zhuǎn)速設(shè)置、保存和運(yùn)輸溫度監(jiān)控、檢測時(shí)間控制等方面做好控制，做好檢測過程質(zhì)量控制，制定質(zhì)控規(guī)則和監(jiān)控指標(biāo)，優(yōu)化檢測流程，不斷提高HBV DNA試劑的檢測下限，在選擇探針時(shí)必須至少覆蓋HBV基因組的3個(gè)基因區(qū)，并在驗(yàn)證時(shí)應(yīng)能至少檢測出基因組的兩個(gè)區(qū)[12]。筆者對蘭州地區(qū)2004—2010年無償獻(xiàn)血者HBsAg檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析[13]，2015—2017年間的 HBV 陽性率（0.393%）與 2004—2010年間的陽性率（0.454%）有顯著差異（χ2＝9.416，P＜0.05），分析可能的原因有：固定獻(xiàn)血者數(shù)量逐漸增加并日趨穩(wěn)定，無償獻(xiàn)血宣傳、科普充分，低危獻(xiàn)血者參加無償獻(xiàn)血，檢測試劑特異性提高。但是檢測陽性率降低與輸血感染HBV殘余風(fēng)險(xiǎn)關(guān)系還需收集更多實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，但是全面開展核酸檢測對于發(fā)現(xiàn)隱匿性乙肝人群具有不可替代的檢測優(yōu)勢，同時(shí)開展核酸檢測可以有效縮短HBV檢出的窗口期，降低輸血傳播風(fēng)險(xiǎn)。

3.3 依據(jù)獻(xiàn)血者陽性檢測率分布趨勢大數(shù)據(jù)制定更有效的獻(xiàn)血者招募策略

本中心2015年1月—2017年12月獻(xiàn)血人群169 808人次的 HBV 感染情況分析表明：18～25歲、26～35歲、36～45歲、46～55歲4個(gè)年齡段獻(xiàn)血人數(shù)由高到低分布，HBV陽性率逐步升高；男性獻(xiàn)血者HBV陽性率明顯高于女性；中專及以下學(xué)歷獻(xiàn)血者比例將近一半，HBV陽性率在4個(gè)學(xué)歷分類中最高；漢族與其他少數(shù)民族獻(xiàn)血者HBV陽性率無顯著差異；單身獻(xiàn)血者HBV陽性率比已婚獻(xiàn)血者高；在職業(yè)分類中，公司職員HBV陽性率較高；初次獻(xiàn)血者與重復(fù)獻(xiàn)血者的HBV陽性率無顯著差異；統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)表明蘭州地區(qū)獻(xiàn)血者HBV感染者人群呈現(xiàn)一定規(guī)律，蘭州地區(qū)漢族與其他少數(shù)民族獻(xiàn)血者HBV陽性率無顯著差異；初次獻(xiàn)血者與重復(fù)獻(xiàn)血者的HBV陽性率無顯著差異，與南京地區(qū)[14]、四川綿陽[15]無償獻(xiàn)血人群HBV感染情況調(diào)查統(tǒng)計(jì)結(jié)果不同。少數(shù)民族人群在蘭州地區(qū)占一定比例，可以繼續(xù)加大少數(shù)民族人群招募力度；做好保留重復(fù)獻(xiàn)血者隊(duì)伍的同時(shí)，應(yīng)大力發(fā)展初次獻(xiàn)血者隊(duì)伍。

綜上所述，乙型病毒性肝炎（乙肝）是最突出的公共衛(wèi)生問題之一，作為經(jīng)血傳染病，應(yīng)當(dāng)做好管理，提高輸血安全性，需繼續(xù)大力宣傳無償獻(xiàn)血，在低危人群中采集血液，做好獻(xiàn)血前獻(xiàn)血者征詢，婉言勸退高危獻(xiàn)血人群，建立一支穩(wěn)定的自愿無償獻(xiàn)血者隊(duì)伍，采用特異性好、靈敏度高的HBV篩查試劑，全面進(jìn)行核酸檢測，提高實(shí)驗(yàn)室管理水平。由于本次調(diào)查對所有陽性結(jié)果未進(jìn)行確認(rèn)檢測，調(diào)查感染人群中存在假陽性結(jié)果，還需進(jìn)一步增加檢測方法，不斷完善調(diào)查結(jié)果。