韓曉江 ，杜錦輝 ，關(guān)敬之 ，畢連寶 ，劉雁飛 ，呼格吉樂

（1.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院中醫(yī)科，呼和浩特 010059；2.內(nèi)蒙古國(guó)際蒙醫(yī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬蒙醫(yī)醫(yī)院藥學(xué)部，呼和浩特 010065；3.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院影像科，呼和浩特 010059；4.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，呼和浩特 010059）

參芪養(yǎng)心顆粒為臨床經(jīng)驗(yàn)方，由黃芪、黨參、丹參、沙參等中藥組成，其功效為益氣養(yǎng)心、活血化瘀，臨床用于治療心肌缺血。以胸部疼痛、憋悶，甚則短氣，胸痛徹背，喘息不得臥等為主要表現(xiàn)的病證，與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中的心絞痛、冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病等疾病引起的以胸痛為主癥的疾病相類似。臨床人擬用量為每天40 g生藥（每日0.57 g生藥/kg，按70 kg質(zhì)量計(jì)）。筆者對(duì)參芪養(yǎng)心顆粒對(duì)冠脈結(jié)扎致犬急性心肌缺血影響藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)。

1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和藥品 Beagle犬，8.00～12.00 kg，雌雄各半，由北京沙河通利實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖場(chǎng)提供，許可證號(hào)：SCXK（京）2013-0007，適應(yīng)性飼養(yǎng) 2周后使用。犬飼料，購于北京科澳協(xié)力飼料有限公司，許可證號(hào)：SCXK（京）2014-0010。

參芪養(yǎng)心顆粒，用法用量：口服，一次1袋，每日2次，規(guī)格：5g/袋，1g顆粒含4 g生藥，由深圳市龍華區(qū)人民醫(yī)院提供，批號(hào)：20150716。硝酸異山梨酯片，用法用量：口服：每日 1～2 片，每日 2～3 次，規(guī)格：5 mg，北京恒生藥業(yè)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字：H11021331，批號(hào)：170803。

1.2 試劑和儀器 磷酸鹽緩沖液（PBS），上海澤葉生物科技有限公司，批號(hào)：20161223。氨基甲酸乙酯，國(guó)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司，批號(hào)：20120316。氯化鈉注射液，四川科倫藥業(yè)股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H20056626，批號(hào)：1509130223。四唑紅，北京索萊寶科技有限公司。

SKP-03電熱恒溫培養(yǎng)箱，黃石市恒豐醫(yī)療器械有限公司。生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，成都泰盟科技有限公司。BW-BM1103小動(dòng)物呼吸機(jī)，上海軟隆科技發(fā)展有限公司。PL2200血?dú)夥治鰞x，南京普朗醫(yī)用設(shè)備有限公司。Transonic T400超聲血流儀，美國(guó)。多導(dǎo)生理記錄儀，澳大利亞AD公司生產(chǎn)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 實(shí)驗(yàn)分組及造模 取Beagle犬36只，雌雄各半，分6組，每組6只，分別為假手術(shù)組、模型對(duì)照組、參芪養(yǎng)心顆粒低劑量組（2.73 g生藥/kg）、參芪養(yǎng)心顆粒中劑量組（5.46 g生藥/kg）、參芪養(yǎng)心顆粒高劑量組（10.92 g生藥/kg）及硝酸異山梨酯片組（0.8 mg/kg）。灌胃給藥，假手術(shù)組、模型對(duì)照組給予等量蒸餾水，每日1次，連續(xù)給藥5 d，于第5天，氨基甲酸乙酯（1.00 g/kg）腹腔麻醉后，氣管插管接呼吸機(jī)，潮氣量：130～160 mL，頻率：20 次/min，呼吸比2∶1。分離右側(cè)頸總動(dòng)脈，插入導(dǎo)管至左心室測(cè)心室內(nèi)壓，分離股動(dòng)脈，檢測(cè)動(dòng)脈壓。在第4、5肋間處開胸，暴露心臟。于左冠狀動(dòng)脈前降支上中1/3處埋線以備結(jié)扎[1]。縫30點(diǎn)式心外膜電極，測(cè)心外膜電圖變化。結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈，假手術(shù)組埋線不結(jié)扎，結(jié)扎前、結(jié)扎15 min時(shí)，記錄給藥前心外膜電圖。十二指腸注射給藥，記錄給藥后60、120、180 min心外膜電圖，統(tǒng)計(jì)ST段升高＞2 mV位點(diǎn)數(shù)心肌缺血區(qū)心外膜電圖（N-ST，ST個(gè)數(shù)）[2]。分離主動(dòng)脈和冠狀動(dòng)脈并用超聲血流儀分別測(cè)心輸出量和冠狀動(dòng)脈血流量，結(jié)扎15 min時(shí)記錄給藥前生理指標(biāo)，即心電、平均動(dòng)脈壓。十二指腸給藥，記錄給藥后60、120、180 min各項(xiàng)指標(biāo)。

2.2 心功能指標(biāo)的計(jì)算方法 計(jì)算心肌血流量（MBF，冠脈血流量×300÷心室質(zhì)量），以及冠脈血管阻力（CVR，平均動(dòng)脈壓×0.018÷心肌血流量）。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后分別取動(dòng)脈血、靜脈血各2 mL，測(cè)定血氧飽和度，按公式計(jì)算各組心肌耗氧量（MOC）：心肌耗氧量=冠狀動(dòng)脈血流量（mL/min）×[動(dòng)脈血氧（mL%）-靜脈血氧（mL%）]÷100 g心肌質(zhì)量[3]。

2.3 四唑紅（TTC）染色方法 處死動(dòng)物，心臟稱重，于-20℃冰箱中冰凍30 min，在結(jié)扎線以下切除心房，稱心室質(zhì)量，平行冠狀溝將心室橫切成6片，每片約0.3～0.5 cm，心尖處用于蘇木精-伊紅（HE）染色法，剩余5片置于1%的四唑紅溶液中，在37℃恒溫水浴中染色15 min，缺血區(qū)不著色，非缺血區(qū)染為紅色[4]。稱未染色心肌質(zhì)量，計(jì)算缺血區(qū)質(zhì)量占左心室質(zhì)量百分比（%）=缺血區(qū)質(zhì)量/左心室質(zhì)量×100%[5]。

3 統(tǒng)計(jì)方法

所有數(shù)據(jù)采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間比較用單因素方差分析，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

4 結(jié)果

4.1 參芪養(yǎng)心顆粒對(duì)犬心肌缺血區(qū)ST段升高＞2 mV位點(diǎn)數(shù)N-ST的影響 由表1可見，與假手術(shù)組比較，模型對(duì)照組犬心肌缺血位點(diǎn)數(shù)從結(jié)扎15 min至給藥180 min明顯升高（P＜0.01）。與模型對(duì)照組比較，參芪養(yǎng)心顆粒中劑量組在給藥60 min能顯著降低缺血位點(diǎn)數(shù)N-ST（P＜0.05）。參芪養(yǎng)心顆粒高劑量組在給藥60 min、120 min和180 min時(shí)能顯著降低缺血位點(diǎn)數(shù) N-ST（P＜0.01 或 P＜0.05）。硝酸異山梨醇組在結(jié)扎15 min、給藥60 min、120 min和180 min時(shí)能顯著降低缺血位點(diǎn)數(shù)N-ST（P＜0.01或P＜0.05）。

4.2 參芪養(yǎng)心顆粒對(duì)心肌缺血犬CVR的影響 由表2可見，與假手術(shù)組比較，模型對(duì)照組急性心肌缺血犬CVR從結(jié)扎15 min至給藥180 min均顯著增加（P＜0.01）。與模型對(duì)照組比較，參芪養(yǎng)心顆粒中劑量組在給藥60 min、180 min能顯著降低冠脈血管阻力（P＜0.05）。參芪養(yǎng)心顆粒高劑量組在結(jié)扎給藥15 min，給藥60 min、120 min和180 min時(shí)能顯著降低 CVR（P＜0.01 或 P＜0.05）。硝酸異山梨醇組在結(jié)扎15 min、給藥60 min、120 min和180 min時(shí)能顯著降低 CVR（P＜0.01）。

4.3 參芪養(yǎng)心顆粒對(duì)急性心肌缺血犬MBF的影響由表3可見，與假手術(shù)組比較，模型對(duì)照組急性心肌缺血犬MBF從結(jié)扎15 min至給藥180 min均有顯著降低（P＜0.05）。與模型對(duì)照組比較，參芪養(yǎng)心顆粒中劑量組（5.46 g生藥/kg）和參芪養(yǎng)心顆粒高劑量組在給藥 60 min、120 min、180 min能增加MBF（P＜0.05）。硝酸異山梨醇組在給藥 60 min、120 min、180 min 時(shí)能顯著增加 MBF（P＜0.05）。

表1 參芪養(yǎng)心顆粒對(duì)犬心肌缺血區(qū)ST段升高>2 mV位點(diǎn)數(shù)N-ST的影響（x±s）Tab.1 Effect of Shenqi Yangxin Granule on the number of ST segment rises>2 mV of dogs myocardial ischemia model（x±s）

4.4 參芪養(yǎng)心顆粒對(duì)給藥后180 min犬MOC的影響 由表4可見，與假手術(shù)組比較，模型對(duì)照組犬MOC顯著增加（P＜0.01）。與模型對(duì)照組比較，參芪養(yǎng)心顆粒高劑量組在給藥180 min時(shí)能顯著降低MOC（P＜0.05）；硝酸異山梨醇組在給藥 180 min 時(shí)能顯著降低 MOC（P＜0.05）。

4.5 參芪養(yǎng)心顆粒對(duì)心肌缺血犬心肌梗死區(qū)質(zhì)量百分比的影響 由表5可見，與假手術(shù)組比較，模型對(duì)照組犬心肌梗死質(zhì)量與心室質(zhì)量比值顯著增加（P＜0.01）。與模型對(duì)照組比較，參芪養(yǎng)心顆粒中劑量組、參芪養(yǎng)心顆粒高劑量組、硝酸異山梨醇組能降低心肌梗死質(zhì)量與心室質(zhì)量比值（P＜0.01或P＜0.05）。

表2 參芪養(yǎng)心顆粒對(duì)心肌缺血犬CVR的影響（x±s）Tab.2 Effect of Shenqi Yangxin Granule on CVR in dogs with myocardial ischemia（x±s）

表3 參芪養(yǎng)心顆粒對(duì)心肌缺血犬MBF的影響（x±s）Tab.3 Effect of Shenqi Yangxin Granule on MBF in dogs with myocardial ischemia（x±s）

表4 參芪養(yǎng)心顆粒對(duì)給藥后180 min犬MOC的影響（x±s）Tab.4 Effect of Shenqi Yangxin Granule on MOC in dogs 180 minutes after treatment（x±s）

表5 參芪養(yǎng)心顆粒對(duì)心肌缺血犬心肌梗死質(zhì)量百分率的影響（x±s）Tab.5 Effect of Shenqi Yangxin Granule on the percentage of myocardial infarction in dogs with myocardial ischemia（x±s）

4.6 參芪養(yǎng)心顆粒對(duì)心肌缺血犬心肌HE染色結(jié)果 由HE染色結(jié)果可見假手術(shù)組犬心肌細(xì)胞正常，無病變。模型對(duì)照組犬心肌左心室片狀透壁壞死，多處局灶性損害，肌纖維腫脹和斷裂，心肌細(xì)胞溶解消失，呈片狀淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)（箭頭指示位置為炎癥細(xì)胞聚集區(qū)）。各給藥組心肌細(xì)胞出現(xiàn)局灶性的間質(zhì)反應(yīng)，肌纖維斷裂以及水腫，部分心肌細(xì)胞溶解消失，但與模型對(duì)照組病變程度相比均有所減輕，見圖1。

圖1 犬左心室心肌組織HE染色圖（×200）Fig.1 HE staining of myocardial tissue in canine left ventricle（×200）

5 討論

心肌缺血是由于心臟血液灌注減少引起心臟的供氧減少，進(jìn)而誘發(fā)心肌能量代謝失衡，心臟不能正常工作的一種病理狀態(tài)[6]。正常心臟活動(dòng)所需的能量幾乎完全依靠有氧代謝提供，當(dāng)某些原因?qū)е滦募⊙汗┙o困難，就構(gòu)成了心肌缺血?？梢鹦募∪毖脑蛴泻芏啵渲凶畛Ｒ姷脑蚴枪跔顒?dòng)脈粥樣硬化。心肌梗死是在冠狀動(dòng)脈粥樣硬化病變的基礎(chǔ)上繼發(fā)血栓形成阻塞冠狀動(dòng)脈所致[7]。心電圖是最常用于心肌缺血的無創(chuàng)性檢查，當(dāng)心肌某一部分供血不足時(shí)，將會(huì)影響到正常的心室復(fù)極化，可使缺血區(qū)相關(guān)導(dǎo)聯(lián)發(fā)生ST-T異常改變[8]。本研究中模型對(duì)照組ST段升高＞2 mV位點(diǎn)數(shù)N-ST顯著多于假手術(shù)組，而與模型對(duì)照組比較參芪養(yǎng)心顆粒中劑量組和參芪養(yǎng)心顆粒高劑量組可顯著降低犬心肌缺血區(qū)N-ST。

冠狀動(dòng)脈包繞于心臟外面，為心臟提供營(yíng)養(yǎng)，冠狀動(dòng)脈狹窄是動(dòng)脈粥樣硬化所引起的，當(dāng)冠狀動(dòng)脈狹窄到一定程度而導(dǎo)致心肌缺血就形成了冠心病[9]。冠狀動(dòng)脈狹窄最大可超過50%，意味著其對(duì)心臟的血液供應(yīng)只有正常時(shí)的50%甚至更少[10]。引起冠狀動(dòng)脈狹窄的粥樣斑塊隨時(shí)都有破裂脫落的危險(xiǎn)，一旦脫落很可能引起冠狀動(dòng)脈閉塞，造成心肌大質(zhì)量壞死[11-12]。常用的血管擴(kuò)張藥硝酸甘油對(duì)冠狀動(dòng)脈具有直接擴(kuò)張作用，可使冠脈血管總阻力減小，進(jìn)而增加心肌血流量，硝酸甘油還能擴(kuò)張遠(yuǎn)端小動(dòng)脈，降低心臟后負(fù)荷，從而使心肌耗氧量降低，減小心肌梗死的質(zhì)量[13]。本研究中參芪養(yǎng)心顆粒中劑量組和參芪養(yǎng)心顆粒高劑量組可顯著降低冠脈血管阻力，增加犬急性心肌缺血模型的心肌血流量。同時(shí)參芪養(yǎng)心顆粒高劑量組可顯著降低心肌耗氧量。以上結(jié)果與處死動(dòng)物后通過1%的四唑紅溶液對(duì)心室染色的結(jié)果一致[14-15]，芪養(yǎng)心顆粒中劑量組和參芪養(yǎng)心顆粒高劑量組可顯著降低心肌梗死區(qū)質(zhì)量。

參芪養(yǎng)心顆粒對(duì)犬結(jié)扎冠狀動(dòng)脈所引起的急性心肌缺血具有保護(hù)作用，有改善因冠狀動(dòng)脈結(jié)扎而引起的心肌供血不足，減小了心肌梗死區(qū)質(zhì)量。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果為參芪養(yǎng)心顆粒在臨床上治療冠狀動(dòng)脈狹窄引起的心肌缺血提供了藥效學(xué)依據(jù)。