張曉雪郭秋紅李文瑾張納博田小超

（1 河北中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，河北 石家莊 050200；2 河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院心內(nèi)科，河北 石家莊 050000）

充血性心力衰竭（congestive heart failure，CHF） 是由于冠心病、肺心病、高心病等長(zhǎng)期病變誘發(fā)心肌受損出現(xiàn)收縮或舒張功能異常的一種疾病，常伴隨神經(jīng)內(nèi)分泌過(guò)度激活和心室重構(gòu)，是心血管疾病患者的主要死亡原因。N末端B型利鈉肽前體（NT-proBNP） 和心肌肌鈣蛋白Ⅰ（cTnI）是目前診斷CHF重要標(biāo)志物，并在療效評(píng)價(jià)和預(yù)后評(píng)估中具有重要意義［1］。國(guó)家級(jí)名老中醫(yī)邢月朋根據(jù)多年臨床經(jīng)驗(yàn)總結(jié)出治療氣虛血瘀、陽(yáng)虛水停型CHF的有效方劑葶藶生脈方，能有效改善患者癥狀，提高生活質(zhì)量，減少再住院率。本研究擬通過(guò)葶藶生脈方對(duì)CHF大鼠血清NT-proBNP、cTnl及心功能的影響，探討其作用機(jī)制并評(píng)估其治療效應(yīng)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)SD雄性大鼠50只，體重（180±20）g，由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（冀） 2013-1-003。

1.2 藥物及試劑 葶藶生脈方由葶藶子、桂枝、白術(shù)、茯苓、豬苓、澤瀉、紅參、麥冬、五味子、枳實(shí)、川芎、丹參、車前子、郁李仁等組成，飲片由石家莊樂(lè)仁堂提供，學(xué)校制劑實(shí)驗(yàn)室水煎濃縮至所需濃度；卡托普利片購(gòu)自中美上海施貴寶制藥有限公司；小動(dòng)物超聲成像系統(tǒng)Vevo?2100購(gòu)自富士VisualSonics公司；酶聯(lián)免疫試劑盒（ELISA）均購(gòu)自美國(guó)ADL公司；電化學(xué)發(fā)光法試劑盒購(gòu)自德國(guó)羅氏診斷有限公司。

1.3 造模與分組 將50只大鼠隨機(jī)分為5組（假手術(shù)組、模型組、葶藶生脈方低、高劑量組及對(duì)照組），每組10只。參照Anversea文獻(xiàn)［2］行腹主動(dòng)脈縮窄術(shù)制備CHF大鼠模型。5組大鼠分別腹腔注射1%戊巴比妥鈉（40 mg/kg）進(jìn)行麻醉，選取仰臥體位，定位劍突后向下沿腹正中線逐層剖開(kāi)，分離腹主動(dòng)脈，除假手術(shù)組只掛線不結(jié)扎外其余各組行動(dòng)脈縮窄術(shù)，將7號(hào)注射器針頭與腹主動(dòng)脈平行放置，0號(hào)手術(shù)線結(jié)扎后將針頭抽出，使腹主動(dòng)脈直徑縮窄到60%～70%。

造模4周后開(kāi)始給藥（水）干預(yù)，假手術(shù)組、模型組分別給予蒸餾水灌胃，對(duì)照組給予卡托普利（4 mg/kg），葶藶生脈方低、高劑量組分別給與20 g/kg、40 g/kg濃縮水煎液。每次給藥劑量為1 mL/100 g，日1劑，持續(xù)8周。

1.4 指標(biāo)檢測(cè)

1.4.1 心功能檢測(cè) 給藥（水）8周末，大鼠腹腔注射麻醉后仰臥位置于電極板固定，胸前區(qū)脫毛，應(yīng)用小動(dòng)物超聲成像系統(tǒng)選擇大鼠心臟探頭記錄左室舒張末期內(nèi)徑（LVIDd） 和左室收縮末期內(nèi)徑（LVIDs） 連續(xù)3個(gè)心動(dòng)周期，計(jì)算左室射血分?jǐn)?shù)（LVEF）。

1.4.2 血清指標(biāo)檢測(cè) 給藥（水）8周末夜間停水、停食12 h，次日20%烏拉坦 6.5 mg/kg腹腔注射麻醉，股動(dòng)脈取血，離心，提取血清。采用ELISA法檢測(cè)血清NT-proBNP含量，電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)血清cTnI含量，均嚴(yán)格參照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 使用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以表示，各組間均數(shù)比較采用單因素方差分析 （one-way ANOVEA），以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠心功能比較 與假手術(shù)組比較，模型組大鼠心功能LVIDs、LVIDd均顯著增加，LVEF顯著降低，且LVEF≤50% 表明造模成功（P＜0.01）；與模型組比較，各治療組LVIDs/mm、LVIDd/mm均顯著降低，LVEF顯著增加 （P＜0.01）。見(jiàn)表 1。

表1 各組大鼠心功能比較

表1 各組大鼠心功能比較

注：與假手術(shù)組比較，*P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.01

組別 鼠數(shù) LVIDs（mm）假手術(shù)組模型組高劑量組低劑量組對(duì)照組10 10 10 10 10 2.78±0.34 5.97±0.41*4.11±0.47#4.56±0.52#4.77±0.53#LVIDd（mm） LVEF（%）4.49±0.56 6.47±0.59*5.06±0.44#5.32±0.53#5.59±0.39#57.20±4.89 36.30±4.62*45.98±5.01#44.99±3.70#43.05±4.01#

2.2 各組大鼠血清NT-proBNP、cTnI含量比較 與假手術(shù)組比較，模型組大鼠血清NT-proBNP、cTnI含量顯著增加（P＜0.01）；與模型組比較，各治療組大鼠NT-proBNP、cTnI含量均顯著降低（P＜0.01）。見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠血清NT-proBNP和cTnI含量比較，pg/mL）

表2 各組大鼠血清NT-proBNP和cTnI含量比較，pg/mL）

注：與假手術(shù)組比較，*P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.01

組別 鼠數(shù) NT-proBNP假手術(shù)組模型組高劑量組低劑量組對(duì)照組10 10 10 10 10 0.33±0.06 1.27±0.16*0.88±0.10#1.01±0.19#0.90±0.18#cTnI 133.88±17.22 305.60±33.52*240.26±30.29#260.18±29.87#251.11±33.98#

3 討論

CHF在中醫(yī)學(xué)屬“喘證”“心悸”“痰飲”等范疇。臨床表現(xiàn)雖然復(fù)雜，但主要集中在水腫、心悸、喘滿這三大癥狀上，病機(jī)多概括為本虛標(biāo)實(shí)，以心之陽(yáng)氣（或兼心陰）虧虛為本，瘀血水停為標(biāo)。葶藶生脈方由黃芪生脈飲、五苓散、葶藶大棗瀉肺湯、桃紅四物湯、枳術(shù)丸幾個(gè)經(jīng)典方劑組合而來(lái)。黃芪生脈飲益氣固本強(qiáng)心，為主方；配以五苓散助陽(yáng)化氣利水；桃紅四物湯活血化瘀；枳術(shù)丸行氣散結(jié)，燥濕健脾；葶藶子苦寒瀉肺，開(kāi)泄肺氣，清降逐痰。諸藥合用，攻補(bǔ)兼施，扶正不礙邪，驅(qū)邪不傷正，開(kāi)上啟下，共奏補(bǔ)氣強(qiáng)心，滌飲祛瘀之功。以往研究表明，葶藶生脈方可有效改善CHF大鼠血流動(dòng)力學(xué)，調(diào)控腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（RAAS） 激活，抑制心肌細(xì)胞凋亡，有效逆轉(zhuǎn)心肌重構(gòu)［3-4］。

神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)的過(guò)度激活是CHF發(fā)生、發(fā)展的重要因素，激活后釋放的大量活性物質(zhì)可導(dǎo)致心肌細(xì)胞能量代謝障礙、心肌細(xì)胞凋亡，心室重塑，進(jìn)而促進(jìn)心衰的發(fā)展。腦鈉肽（brain natriuretic peptide，BNP）是心肌細(xì)胞在容量負(fù)荷和壓力負(fù)荷增高時(shí)由心室肌細(xì)胞分泌的一種多肽類心臟神經(jīng)激素，具有擴(kuò)張血管、利鈉、利尿等作用，可有效抑制RAAS過(guò)度激活，血管內(nèi)皮細(xì)胞、心肌細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞過(guò)度增生，延緩心肌細(xì)胞重構(gòu)［5］。BNP是目前較為公認(rèn)的室壁張力及心室負(fù)荷變化的重要觀察指標(biāo)，在CHF鑒別診斷及預(yù)后評(píng)估中具有重要參考價(jià)值。NT-proBNP為BNP分裂后的N-末端片段，因其與BNP功能相似，且具有生物半衰期長(zhǎng)，穩(wěn)定性好，不易受外界環(huán)境影響等優(yōu)點(diǎn)，多用于臨床檢測(cè)［6］。cTnI為心肌組織特有肌鈣蛋白，對(duì)橫紋肌收縮起到重要調(diào)節(jié)作用，以復(fù)合物和游離態(tài)兩種方式分別存在于心肌細(xì)胞細(xì)肌絲和胞漿中。健康人血清中含量微少，CHF時(shí)心臟負(fù)荷過(guò)重，神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)異常激活，心肌細(xì)胞受損，cTnI復(fù)合物分解成游離態(tài)，胞漿中游離態(tài)cTnI穿過(guò)細(xì)胞膜大量進(jìn)入血液，致使血清cTnI濃度增加。臨床研究證實(shí)，CHF患者血清cTnI濃度顯著高于健康體檢者，且升高幅度與心功能分級(jí)密切相關(guān)［7-8］。

本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示，通過(guò)腹主動(dòng)脈縮窄術(shù)可顯著增加大鼠血清 NT-proBNP、cTnI含量，增加 LVIDs、LVIDd，降低LVEF，且LVEF≤50%，表明腹主動(dòng)脈縮窄可有效導(dǎo)致大鼠壓力超負(fù)荷性慢性心力衰竭。葶藶生脈方可有效降低CHF大鼠血清NT-proBNP、cTnI含量，降低LVIDs、LVIDd，升高LVEF，表明該方能減輕心室壓力和容量負(fù)荷，降低室壁張力，有效調(diào)節(jié)神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)的過(guò)度激活。