郭芳 應(yīng)英 李梅 于麗麗 遼寧省醫(yī)療器械檢驗(yàn)檢測(cè)院 （遼寧 沈陽(yáng) 110179）

內(nèi)容提要： 目的：根據(jù)YY/T 1258-2015《同型半胱氨酸測(cè)定試劑（盒）（酶循環(huán)法）》和企業(yè)產(chǎn)品技術(shù)要求，檢測(cè)評(píng)價(jià)同型半胱氨酸測(cè)定試劑盒（酶循環(huán)法）。方法：應(yīng)用日立7100全自動(dòng)生化分析儀對(duì)該試劑盒的外觀、凈含量、試劑空白吸光度、分析靈敏度、線性范圍、測(cè)量精密度、準(zhǔn)確度、穩(wěn)定性等進(jìn)行檢測(cè)評(píng)價(jià)。結(jié)果：外觀、凈含量均符合要求；試劑空白吸光度為1.8；分析靈敏度為0.03/min；線性相關(guān)系數(shù)（r）為0.9999，[3.0,10.0]μmol/L范圍內(nèi)，線性偏差為-0.2μmol/L；(10.0，45.0]μmol/L范圍內(nèi)，線性偏差最大值為0.7%。重復(fù)測(cè)試（10.0±2.0）μmol/L和（20.0±4.0）μmol/L的樣品，所得結(jié)果的重復(fù)性（變異系數(shù)CV）分別為2.2%和2.3%；3個(gè)不同批號(hào)試劑盒的批間相對(duì)極差為2.8%。不同濃度純品溶液的回收率分別為92.1%和98.5%。取到效期后3個(gè)月內(nèi)的試劑檢測(cè)，穩(wěn)定性符合要求。結(jié)論：同型半胱氨酸測(cè)定試劑盒（酶循環(huán)法）性能指標(biāo)符合標(biāo)準(zhǔn)要求。

同型半胱氨酸（Homocysteine，Hcy）是蛋氨酸的中間代謝產(chǎn)物，其依附于血管內(nèi)壁[1]。近些年的研究發(fā)現(xiàn)，Hcy與動(dòng)脈粥樣硬化和心血管疾病的危險(xiǎn)性成正相關(guān)，被認(rèn)為是動(dòng)脈粥樣硬化導(dǎo)致的心血管疾病最顯著的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，同時(shí)，Hcy水平升高將刺激血管壁并可能引起動(dòng)脈血管損傷，導(dǎo)致形成炎癥和管壁斑塊[2]。目前國(guó)內(nèi)外普遍將Hcy作為常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目，用于判斷動(dòng)脈粥樣硬化和心腦血管疾病的危險(xiǎn)性[3]。

Hcy的檢測(cè)方法主要有高效液相色譜法、酶聯(lián)免疫吸附法等。近年來(lái)，由于具有快速、簡(jiǎn)便、靈敏度高、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，酶循環(huán)法發(fā)展迅速，已逐漸成為各級(jí)各類(lèi)實(shí)驗(yàn)室常用的檢測(cè)方法[4]。本文按照YY/T 1258-2015《同型半胱氨酸測(cè)定試劑（盒）（酶循環(huán)法）》和企業(yè)產(chǎn)品技術(shù)要求，對(duì)同型半胱氨酸測(cè)定試劑盒（酶循環(huán)法）進(jìn)行檢測(cè)評(píng)價(jià)，對(duì)檢測(cè)過(guò)程中遇到的問(wèn)題進(jìn)行分析討論。

1.材料與方法

1.1 儀器與材料

日立7100全自動(dòng)生化分析儀；同型半胱氨酸測(cè)定試劑盒（酶循環(huán)法）（國(guó)內(nèi)某生物科技公司）；質(zhì)控品：心肌多項(xiàng)標(biāo)志物檢測(cè)用質(zhì)控品（RANDOX，貨號(hào)：CQ3100，批號(hào)：453728）。

1.2 方法

生化分析儀基本參數(shù)設(shè)置見(jiàn)表1。

校準(zhǔn)程序：使用兩個(gè)水平校準(zhǔn)品，進(jìn)行2點(diǎn)校準(zhǔn)，采用線性校準(zhǔn)模式。

表1. 生化分析儀基本參數(shù)設(shè)置

表2. Hcy測(cè)定試劑盒的線性范圍檢測(cè)結(jié)果

表3. Hcy測(cè)定試劑盒的測(cè)量精密度檢測(cè)結(jié)果

表4. Hcy測(cè)定試劑盒的準(zhǔn)確度檢測(cè)結(jié)果

2.結(jié)果

2.1 外觀

試劑R1為無(wú)色澄清液體，R2為淺黃色澄清液體，無(wú)沉淀及絮狀懸浮物。

2.2 凈含量

不少于標(biāo)示值。

2.3 試劑空白吸光度

試劑空白吸光度為1.8。

2.4 分析靈敏度

在37°C、波長(zhǎng)340nm、1cm光徑條件下，測(cè)定吸光度變化率（ΔA/min）為0.03/min。

2.5 線性范圍

線性相關(guān)系數(shù)（r）為0.9999，[3.0,10.0]μmol/L范圍內(nèi)，線性偏差為-0.2μmol/L；(10.0，45.0]μmol/L范圍內(nèi)，線性偏差最大值為0.7%。見(jiàn)表2。

2.6 測(cè)量精密度

重復(fù)測(cè)試（10.0±2.0）μmol/L和（20.0±4.0）μmol/L的樣品，所得結(jié)果的重復(fù)性（變異系數(shù)CV）分別為2.2%和2.3%；分別用3個(gè)不同批號(hào)試劑盒測(cè)試（10.0±2.0）μmol/L的樣品，所得結(jié)果的批間相對(duì)極差為2.8%。見(jiàn)表3。

2.7 準(zhǔn)確度

不同濃度純品溶液的回收率分別為92.1%和98.5%。見(jiàn)表4。

2.8 穩(wěn)定性

取到效期后3個(gè)月內(nèi)的試劑檢測(cè)，外觀項(xiàng)，試劑R1為無(wú)色澄清液體，R2為淺黃色澄清液體，無(wú)沉淀及絮狀懸浮物。試劑空白吸光度為1.8，分析靈敏度為0.03/min，線性相關(guān)系數(shù)（r）為0.9998，[3.0,10.0]μmol/L范圍內(nèi)，線性偏差為-0.1μmol/L；(10.0，45.0]μmol/L范圍內(nèi)，線性偏差最大值為2.0%，（10.0±2.0）μmol/L和（20.0±4.0）μmol/L的重復(fù)性分別為2.8%和0.8%，準(zhǔn)確度不同濃度的回收率分別為100.2%和109.0%。見(jiàn)表2～4。

2.9 結(jié)論

根據(jù)YY/T 1258-2015《同型半胱氨酸測(cè)定試劑（盒）（酶循環(huán)法）》和企業(yè)產(chǎn)品技術(shù)要求，同型半胱氨酸測(cè)定試劑盒（酶循環(huán)法）性能指標(biāo)符合標(biāo)準(zhǔn)要求。

3.討論

近些年的多項(xiàng)研究表明，Hcy與動(dòng)脈粥樣硬化和心腦血管疾病成正相關(guān)，是其獨(dú)立危險(xiǎn)因素。高Hcy血癥有可能是腦梗死獨(dú)立的致病因素，同時(shí)也可能是導(dǎo)致復(fù)發(fā)性腦梗死的重要危險(xiǎn)因素[5]。因此Hcy的檢測(cè)受到了越來(lái)越多的重視，隨之對(duì)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)質(zhì)量的要求也越來(lái)越高[6]。

酶循環(huán)法是目前臨床上用于測(cè)定血清Hcy較新的一種化學(xué)分析方法，其操作簡(jiǎn)單、可自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn)使得酶循環(huán)法試劑盒在臨床檢驗(yàn)中得到了較為廣泛的應(yīng)用。大量酶循環(huán)法試劑盒應(yīng)運(yùn)上市。本試驗(yàn)按照YY/T 1258-2015《同型半胱氨酸測(cè)定試劑（盒）（酶循環(huán)法）》和企業(yè)產(chǎn)品技術(shù)要求，對(duì)國(guó)內(nèi)某生物科技公司生產(chǎn)的Hcy測(cè)定試劑盒（酶循環(huán)法）進(jìn)行檢測(cè)[7]。

在本試驗(yàn)中，采用速率法進(jìn)行測(cè)試，反應(yīng)方向?yàn)樨?fù)反應(yīng)，讀取28點(diǎn)和34點(diǎn)數(shù)據(jù)，計(jì)算差值，換算吸光度變化率為0.03/min，大于標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定值0.01。準(zhǔn)確度因暫無(wú)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，因此選用回收試驗(yàn)法，不同濃度純品溶液的回收率分別為92.1%和98.5%，符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定（100±15）%范圍內(nèi)。穩(wěn)定性選用效期穩(wěn)定性進(jìn)行試驗(yàn)，產(chǎn)品技術(shù)要求規(guī)定試劑盒在2～8°C避光環(huán)境中密封保存，有效期為12個(gè)月。選取到效期后3個(gè)月內(nèi)的試劑盒檢測(cè)外觀、試劑空白吸光度、分析靈敏度、線性范圍、準(zhǔn)確度、重復(fù)性，結(jié)果分別符合標(biāo)準(zhǔn)要求。

因此，結(jié)果說(shuō)明該試劑盒各項(xiàng)性能指標(biāo)均符合YY/T 1258-2015《同型半胱氨酸測(cè)定試劑（盒）（酶循環(huán)法）》和企業(yè)產(chǎn)品技術(shù)要求。