于春萍　李若飛　付子杰　蘭丁璇

【摘? 要】肝臟作為主要代謝器官在機體中發(fā)揮重要作用。而肝病的發(fā)生率一直居高不下，病毒性肝炎在肝病中占據(jù)重要的地位，因此選取合適的肝損傷模型，對病毒性肝病的發(fā)病機制的研究、篩選較為有效的保肝藥物、探索其保肝原理以為臨床治療病毒性肝炎提供醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)具有十分重要的意義。

【關(guān)鍵詞】急性免疫性肝損傷;動物模型;刀豆蛋白;脂多糖;卡介苗

【中圖分類號】R575????? 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A????? 【文章編號】1004-7484（2020）09-0062-01

1.刀豆蛋白A（Con A）

Con A是一種植物血凝素，具有很強的促有絲分裂作用，可作為一種T細(xì)胞絲裂原。ConA具有很強的嗜肝性，在體內(nèi)經(jīng)代謝后，產(chǎn)物仍具有活性并且可入侵免疫系統(tǒng)，從而導(dǎo)致免疫系統(tǒng)特異性殺傷肝臟細(xì)胞導(dǎo)致肝臟細(xì)胞壞死。此后，藥物修飾蛋白從細(xì)胞中溢出，枯否細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及 B 細(xì)胞等抗原提示細(xì)胞對其進行吞噬，分解為小分子多肽。多肽分子溢出并存留于細(xì)胞表面，T細(xì)胞分化群（CD4+T）細(xì)胞對其進行識別，T細(xì)胞被激活，分泌并釋放多種細(xì)胞因子，在較短的時間內(nèi)產(chǎn)生大量中性粒細(xì)胞 、巨噬細(xì)胞 、T細(xì)胞等炎癥性細(xì)胞，浸潤小鼠肝臟細(xì)胞，進而導(dǎo)致肝臟損傷。李紅^[1-2]等人采用給C57/BL小鼠尾靜脈注射劑量為12mg/kg的Con A處理8小時后造模成功;單瑩瑩^[3-4]等人給ICR小鼠尾靜脈注射40mg/kg的Con A，8小時后處死造模成功。造模成功的小鼠可見精神萎靡，活動減少，蜷臥，抱團，豎毛等身體特征，另外（丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶）ALT、（天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶）AST等肝功能指標(biāo)升高，IL- 10、IL- 2、IL- 12、TNF-α、C- 干擾素等炎癥因子水平升高，與正常組存在顯著性差異;從肝臟的病理學(xué)觀察可見小鼠肝臟淤血腫大，呈現(xiàn)暗紅色，肝組織可見少量炎性細(xì)胞浸潤;脾臟淤血腫大。Con A引起的動物肝損傷模型與人類病毒性肝炎引發(fā)的免疫性肝損傷的病理生理過程相似，此模型有助于我們對病毒性肝炎的病理過程及藥物治療等進行研究。Con A有較強的劑量依賴性，隨著劑量的加大，肝損傷的程度也越嚴(yán)重。另外，Con A肝毒性專性高，能夠特異性的損傷肝臟細(xì)胞，并未發(fā)現(xiàn)對脾、心等肝外器官的損傷。并且刀豆蛋白誘導(dǎo)的小鼠免疫性肝損傷因為不需要預(yù)先致敏還具有操作簡單迅速的特點。

2.卡介苗和脂多糖

①脂多糖引發(fā)小鼠急性肝損傷模型建立

脂多糖（LPS）產(chǎn)生于革蘭氏陰性菌，進入血液循環(huán)后，先天免疫系統(tǒng)被激活，導(dǎo)致大量的炎癥因子釋放。程訸等人用腹腔注射LPS（8、15、20 mg/kg）證明LPS可成劑量依賴性導(dǎo)致小鼠急性肝損傷，導(dǎo)致小鼠肝臟產(chǎn)生炎性腫大，肝臟中央靜脈周圍易受損部位出現(xiàn)大量炎癥細(xì)胞，對肝細(xì)胞造成損傷從而引起血清中谷氨酸轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天冬氨酸轉(zhuǎn)移酶（AST）水平上升。張曉慧^[3]等人采用小鼠禁食不禁水24 h后腹腔注射LPS （10 mg/kg） 構(gòu)建肝損傷模型。在腹腔注射LPS 4 h， 摘眼球取血，進行一系列肝功能及病理學(xué)檢測，結(jié)果顯示肝功能水平明顯升高，肝小葉周圍中央靜脈去由于最易受到損傷而表現(xiàn)出細(xì)胞凋亡壞死， 肝細(xì)胞索正常形態(tài)遭受破壞， 導(dǎo)致大量肝細(xì)胞壞死， 胞核固縮并向周圍擴散或完全溶解破碎， 細(xì)胞發(fā)生空泡樣變及被炎癥細(xì)胞浸潤，同時表現(xiàn)出抗氧化能力明顯降低，TNF-α、IL-1β、IL-6、iNOS等炎性因子明顯升高，上述結(jié)果顯示此方法對小鼠急性肝損傷造模成功。脂多糖造成的急性肝損傷模型重復(fù)性好，簡單易行，可直接作用或間接作用的造成肝細(xì)胞損傷，且其誘導(dǎo)的肝臟細(xì)胞壞死在重癥病毒性肝炎的發(fā)生發(fā)展進程起到重要作用。

②BCG注入小鼠體內(nèi)首先激活敏性T淋巴細(xì)胞，并且大量集中于肝臟;隨后注射LPS后進一步使致敏的巨噬細(xì)胞激活，促使致敏的肝臟細(xì)胞釋放大量細(xì)胞的導(dǎo)致小鼠急性免疫性肝損傷的因子，如一氧化氮、腫瘤壞死因子、白細(xì)胞介素、白三烯等。邱英峰^[4]等人采用給SD大鼠腹腔注射BCG劑量5 .0×10 ⁷ 菌數(shù)鼠 +LPS劑量30μg/kg可達(dá)到很好的造模效果。陳偉平等人給予小鼠BCG 5mg/2ml， 12 d后， 注射LPS 7.5g/0.2ml以誘導(dǎo)免疫性肝損傷模型， 禁食12 h后取血處死，達(dá)到很好的造模效果。肝臟損時，血清中ALT 、AST的含量明顯升高、肝組織中丙二醛 （MDA）明顯升高 、還原型谷胱甘肽 （GSH） 水平明顯降低。肝組織病理切片可見產(chǎn)生大量中、重度炎性細(xì)胞^[5]?？ń槊绾椭嗵堑穆?lián)合使用得到的大鼠模型相較于卡介苗以及脂多糖的單獨使用效果明顯，模型簡便易行持續(xù)時間相對來說時間久。

討論：

目前急性肝損傷的造模方法已有多種類型，但是急性免疫性肝損傷的造模方法相對于其他化學(xué)性肝損傷數(shù)量較少，仍存在諸多不足，并且致病機制復(fù)雜尚未完全闡明，所以尋找合適的造模方法具有十分重要的意義。本文總結(jié)了常用并且較為成熟的急性免疫性肝損傷的造模方法，以為后續(xù)的科學(xué)研究提供方便。

參考文獻(xiàn)

[1]單瑩瑩，王佳燁，王曉麗，于佳卉，王春梅，李賀，孫紅霞，張成義，陳建光，孫靖輝.Con A建立小鼠急性免疫性肝損傷模型研究[J].北華大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2019，20（01）：55-58.

[2]李紅，于慧杰，盛國光.刀豆蛋白A誘導(dǎo)的C57BL/6J小鼠急性免疫性肝損傷模型的研究[J].中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志，2016，26（02）：93-95+131.

[3]程訸，葛晶晶.脂多糖誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷模型的建立[J].汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2015，28（03）：150-151+193.

[4]邱英鋒，繆曉輝，王俊學(xué)，張瑞祺，蔡雄，倪武.卡介苗加脂多糖建立大鼠急性免疫性肝損傷模型的研究[J].實驗動物科學(xué)與管理，2004（03）：15-19.

[5]徐曉輝，袁江玲，徐磊，杜勇，劉曉峰.常用急性肝損傷5種動物模型的病理組織學(xué)特點比較[J].疾病預(yù)防控制通報.2018，33（1）：12-15，95.