孫菱 郭桂英 楊建科 歐陽慧 王燕玲 姚莉 成莉
【摘 要】目的:探討Xpert MTB/RIF檢測結(jié)核分枝桿菌在結(jié)核感染診斷中的臨床應(yīng)用價(jià)值。方法:回顧分析2019年6月至8月我院151例臨床患者標(biāo)本,所有樣本均同時(shí)采用抗酸染色法、Xpert MTB/RIF試驗(yàn)進(jìn)行檢測,并對(duì)檢測結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果:Xpert MTB/RIF檢測的總陽性率明顯高于抗酸染色法,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。采用Xpert MTB/RIF法檢測不同類型樣本的陽性率依次為:痰樣本陽性率56.3%、灌洗液陽性率40.0%、胸水陽性率5.2%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論:Xpert MTB/RIF技術(shù)檢測MTB具有簡單、快速、敏感性高等優(yōu)點(diǎn),在結(jié)核分枝桿菌及其對(duì)利福平耐藥的快速檢測方面有良好的應(yīng)用
前景。
【關(guān)鍵詞】結(jié)核分枝桿菌;Xpert 結(jié)核分枝桿菌/利福平試驗(yàn);抗酸染色
【中圖分類號(hào)】R52 【文獻(xiàn)識(shí)別碼】B 【文章編號(hào)】1002-8714(2019)11-0011-02
【Abstract】Objective:To investigate the clinical application value of Xpert Mycobacterium tuberculosis(MTB)/rifampicin(RIF)assay in the diagnosis of tuberculosis. Methods A total of 151 patients were determined by XpertMTB/RIF assayand acid-fast stain,respectively. The results were compared.Results The positive rates of Xpert MTB/RIF assay for all types of samples were higher than those of acid-fast stain,and the difference is statistically significant(P<0.05).Conclusions? Compared with acid-fast stain, Xpert MTB/RIF assayis simple, rapid and sensitive,and has a good application prospect.
【Key words】Mycobacterium tuberculosis;Xpert MTB/RIF assay;acid-fast stain
我國一直是世界上結(jié)核疫情較嚴(yán)重的國家之一,目前用于診斷結(jié)核病的方法有抗酸桿菌染色和結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng),但在臨床使用的過程中,前者陽性率低,后者周期長,可能延誤診斷及治療[1]。近幾年來,新的分子檢測方法Xpert MTB/RIF逐步發(fā)展,可在2h同時(shí)對(duì)MTB和RIF耐藥進(jìn)行檢測[2]。我們對(duì)Xpert MTB/RIF與抗酸染色法以及Xpert MTB/RIF技術(shù)檢測情況進(jìn)行了比較,初步探討Xpert MTB/RIF技術(shù)的臨床應(yīng)用價(jià)值。
1 材料與方法
1.1 材料
1.1.1 樣本來源
收集樂山市人民醫(yī)院2019年6月至8月同時(shí)進(jìn)行了抗酸涂片檢查和Xpert MTB/RIF的151例患者樣本,樣本包括痰80例、支氣管肺泡灌洗液35例、胸水19例,以及腹水、腦脊液、尿、膿液等非呼吸道標(biāo)本17例。
1.1.2 儀器和試劑
抗酸桿菌染色液購自珠海貝索生物技術(shù)有限公司;Xpert MTB/RIF 檢測試劑盒購自美國 Cepheid 公司。
1.2 方法
對(duì)所有標(biāo)本同時(shí)進(jìn)行 Xpert MTB/RIF 檢測、抗酸染色法檢測。
1.2.1 抗酸染色法 按照《結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化操作與網(wǎng)絡(luò)建設(shè)》進(jìn)行操作。
1.2.2 Xpert MTB/RIF核酸擴(kuò)增檢測
按試劑說明書對(duì)各類標(biāo)本分別進(jìn)行前處理,然后渦旋振蕩15s,靜置15min,取2mL處理后的樣本加入反應(yīng)盒,然后將反應(yīng)盒放入檢測模塊,儀器開始進(jìn)行自動(dòng)化檢測。反應(yīng)結(jié)束后對(duì)MTB及RIF結(jié)果進(jìn)行判讀。
1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,抗酸染色和Xpert MTB/RIF陽性率的比較采用McNemar檢驗(yàn);三種不同樣本陽性率之間的比較采用Pearson檢驗(yàn),以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2 結(jié)果
Xpert MTB/RIF試驗(yàn)陽性率41.7%(63/151)高于抗酸染色法27.2%(41/151),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.00)。
Xpert MTB/RIF技術(shù)檢測呼吸道不同類型樣本陽性檢出率比較,其陽性率由高到低依次為痰[56.3%(45/80)]>灌洗液[40.0%(14/35)]>胸水[5.2%(1/19)]。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=16.58,P=0.00)。
3 討論
結(jié)核感染是目前世界公共衛(wèi)生面臨的最為嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)之一。目前國內(nèi)大多數(shù)醫(yī)院對(duì)結(jié)核分枝桿菌的檢測還是依賴于抗酸染色涂片鏡檢,鏡檢方法簡單快速,但是靈敏度不高,容易導(dǎo)致漏診。培養(yǎng)方法分離出結(jié)核分枝桿菌是診斷結(jié)核病的金標(biāo)準(zhǔn),但結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)對(duì)實(shí)驗(yàn)室生物安全級(jí)別要求高,在國內(nèi)大多醫(yī)院還未開展,且培養(yǎng)周期長不利于結(jié)核病的早期診斷。
XpertMTB/RIF是一種能在2小時(shí)內(nèi)完成結(jié)核分枝桿菌和利福平耐藥性快速檢測的方法。Xpert MTB/RIF為全自動(dòng)一體化熒光定量PCR儀,其最低檢測限值低于TB-DNA,且手工時(shí)間僅需約20min。這種新型的診斷方法是由美國Cepheid公司開發(fā)的,Xpert MTB/RIF 基于全自動(dòng)半巢式實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 原理,將樣本的準(zhǔn)備、擴(kuò)增、檢測集于一體,對(duì)結(jié)核分枝桿菌特有的序列rpo B基因進(jìn)行檢測。Xpert MTB/RIF 有5條分子信標(biāo)探針,覆蓋目標(biāo)基因,第6條探針用于質(zhì)量控制。與傳統(tǒng)的結(jié)核檢測方法相比,XpertMTB/RIF更加簡便、快捷、安全、準(zhǔn)確,其對(duì)硬件設(shè)備和人員的要求比較低,成本也在可接受的范圍內(nèi),且在診斷結(jié)核分枝桿菌感染的同時(shí)對(duì)利福平耐藥一并進(jìn)行了檢測,在結(jié)核病診治中具有非常重要的作用。
本研究通過比較Xpert MTB/RIF與痰涂片抗酸染色鏡檢的陽性率,初步探討其在診斷結(jié)核感染方面的價(jià)值,結(jié)果表明,其陽性率明顯高于痰涂片抗酸染色鏡檢法,提示可以通過 Xpert MTB/RIF聯(lián)合痰涂片抗酸染色鏡提高診斷結(jié)核感染的敏感度,降低漏檢率。另外,通過比較Xpert MTB/RIF檢測不同標(biāo)本陽性率,發(fā)現(xiàn)其診斷價(jià)值受到標(biāo)本類型的影響。但由于本次研究采用的標(biāo)本量較少,結(jié)果存在一定局限性,接下來應(yīng)收集更多標(biāo)本以彌補(bǔ)此不足,且增加培養(yǎng)結(jié)果??傊瓽ene Xpert系統(tǒng)具有簡便快速、安全、敏感性高等優(yōu)點(diǎn),XpertMTB/RIF在結(jié)核病診斷以及利福平耐藥檢測等方面必將具有廣闊的應(yīng)用前景。
參考文獻(xiàn)
[1] Bates M,Ogrady J,Maeurer M,et al. Assessment of the xpert MTB / RIF assay for diagnosis of tuberculosis with gastric lavage as-pirates in children in sub-Saharan Africa:a prospective descriptive study[J].Lancet Infect Dis,2013,13(1) : 36-42.
[2] Lawn SD,Nicol MP.Xpert MTB/ RIF assay: development,evaluation and implementation of a new rapid molecular diagnostic for tuberculosis and rifampicin resistance[J].Future Microbiol,2011,6(9):1067-1082.