闞永軍　施萍萍　蔣暢　趙立　胡娟

【摘 要】 目的：考察不同提取方式對太子參粗多糖的得率、總多糖含量的影響。方法：采用熱水提取法、超聲提取法和酶提取法分別提取太子參多糖，苯酚硫酸法測定總多糖含量。結(jié)果：熱水提取法、超聲提取法和酶提取法對太子參粗多糖得率分別為14.54%、11.12%和17.81%，太子參總多糖含量依次為10.18%、8.68%和10.69%。結(jié)論：綜合考慮提取效率、多糖純度和工藝成本，熱水提取法較為適用于太子參多糖的生產(chǎn)。

【關(guān)鍵詞】 太子參;多糖;提取;含量

【中圖分類號】R284.2 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號】1007-8517（2019）14-0041-03

福建道地藥材太子參在柘榮縣已有近百年的人工栽培歷史，太子參的生產(chǎn)、加工成為當(dāng)?shù)刂е彤a(chǎn)業(yè)。多糖是太子參中重要活性成分之一，研究表明，太子參多糖具抗氧化[1]、免疫調(diào)節(jié)[2]、抗糖尿糖[3-4]、及心肌保護(hù)[5]等多種活性。太子參多糖的高效生產(chǎn)對于太子參產(chǎn)業(yè)的發(fā)展尤為重要，在多糖生產(chǎn)過程中，如何在提高提取率的同時，降低生產(chǎn)能耗和成本，是多糖生產(chǎn)工藝中的難點。

目前，中藥多糖提取方法主要有熱水提取法、酸/堿提取法、超聲波提取法、微波提取法、酶提取法、超臨界萃取法和超高壓提取等，其中熱水提取法工藝成本較低、操作簡單，是最傳統(tǒng)的提取方法;超聲提取具有時間短、效率高、節(jié)約能耗等特點;酶提取法可有效破壞藥材致密的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，促進(jìn)多糖的溶出[6]。本研究分別采用熱水提取法、超聲提取法、酶提取法3種方法提取太子參多糖，比較不同提取方法對太子參粗多糖的得率、總多糖含量的影響。

1 儀器與材料

1.1 儀器 UV-3200型紫外分光光度計（上海美譜達(dá)儀器有限公司）;AE240S電子分析天平（梅特勒-托利多上海有限公司）;KQ2200DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;Sorall ST 16R高速冷凍離心機(jī)（Thermo Fisher公司）;MOKULYOD-230型冷凍干燥儀（Thermo Fisher公司）。

1.2 材料 太子參藥材購于福建柘榮太子參市場;纖維素酶（批號：20170309）、乙醇（批號：20170424）、苯酚（批號：20161018）等購于國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;硫酸（批號：160123，西隴化工股份有限公司）;D-無水葡萄糖對照品（批號：110833-201506，中國食品藥品檢定研究院）。

2 方法與結(jié)果

2.1 多糖的提取

2.1.1 熱水提取法 精密稱取太子參粉末20.00g，加入400mL蒸餾水，回流提取1h，濾渣重復(fù)提取2次，合并3次續(xù)濾液，旋蒸濃縮至約100mL;加入4倍量無水乙醇，4 ℃靜置過夜，離心（4000r/min， 10min），收集沉淀。向沉淀中加入100mL蒸餾水，充分溶解，重復(fù)醇沉1次。收集沉淀冷凍干燥，稱重，計算粗多糖得率，既得熱水提取法太子參粗多糖。

2.1.2 超聲提取法 精密稱取太子參粉末20.00g，加入400mL蒸餾水，超聲（350W，40℃）提取0.5h，濾渣重復(fù)提取2次，合并3次續(xù)濾液后處理方式同熱水提取法，既得超聲提取法太子參粗多糖。

2.1.3 酶提取法 精密稱取太子參粉末20.00g，加入400mL蒸餾水，加入0.5g纖維素酶55℃浸泡1h，煮沸10min對酶進(jìn)行滅活，過濾，濾渣重復(fù)提取2次，合并3次提取所得濾液后處理方式同熱水提取法，既得酶提取法太子參粗多糖。

2.2 多糖含量的測定

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 準(zhǔn)確稱取D-無水葡萄糖對照品20.02mg，加蒸餾水溶解，定容至200mL容量瓶中，配制成濃度為100μg /mL的對照品儲備液，分別精密量取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.1、0.3、0.5、0.7、0.9mL 置于10mL 的具塞試管中，分別添加蒸餾水至2mL，并且各加5%苯酚溶液1mL，混勻，緩緩加入硫酸5mL，搖勻;沸水浴中加熱20min，取出，置冰浴中冷卻5min。用1mL蒸餾水按同法反應(yīng)作為空白對照，分別在490nm 波長處測定吸光度。以葡萄糖濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。并得到回歸方程：y=0.0072x+0.0167，r=0.9991，表明葡萄糖在10.01～90.09μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示。

2.2.2 精密度試驗 精密稱取太子參粗多糖10 mg，置于100 mL容量瓶中，加蒸餾水定容至刻度，精密吸取太子參多糖溶液1mL，共6份，分別置10 mL具塞試管中按標(biāo)準(zhǔn)曲線項下方法顯色，測定吸光度，計算其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為3.35%，表明儀器精密度良好。

2.2.3 穩(wěn)定性試驗 精密吸取太子參粗多糖供試液，按標(biāo)準(zhǔn)曲線項下方法顯色，分別于0、15、30、60、90、120min測定吸光度，考察其穩(wěn)定性，結(jié)果相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.72 %，表明在120min內(nèi)樣品具有良好的穩(wěn)定性。

2.2.4 重現(xiàn)性試驗 精密稱取太子參粗多糖5份，按標(biāo)準(zhǔn)曲線項下方法顯色，測定吸光度，計算其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為2.56%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.2.5 加樣回收率試驗 精密稱取太子參粗多糖10.00mg，置于100mL容量瓶中，加蒸餾水定容至刻度，準(zhǔn)確移取供試液8份，每份5mL，轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶，分別加入0.5mg/mL葡萄糖溶液0、0.5、1、1.5mL，加超純水定容至刻度，測定吸光度，計算含量及回收率，加樣回收率試驗結(jié)果見表1。

2.2.6 總多糖的測定 精密稱取不同提取方法的太子參粗多糖10mg，置于100mL容量瓶中，加入超純水，超聲溶解，定容。精密吸取各多糖溶液1mL，按照上述標(biāo)準(zhǔn)曲線方法進(jìn)行顯色反應(yīng)后測定吸光度，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各多糖含量。

通過對不同提取方式得到的粗多糖得率及總多糖含量進(jìn)行對比（表2），結(jié)果顯示太子參粗多糖得率受提取方法的影響很大，熱水提取法、超聲提取法和酶提取法獲得太子參粗多糖得率分別為14.54%、11.12%和17.81%，粗多糖得率由高至低依次為酶提取法>熱水提取法>超聲提取法。酶提取法所得粗多糖與熱水提取法和超聲提取法相比純度較低。熱水提取法（10.18%）和酶提取法（10.69%）所得太子參總多糖含量相當(dāng)，均高于超聲提取法（8.68%）。

4 討論

研究采用熱水回流提取法、超聲提取法和酶法分別提取太子參多糖，結(jié)果顯示熱水回流和酶法提取所得粗多糖得率高于超聲提取法。回流提取法較高的提取溫度有利于提取溶劑進(jìn)入藥材內(nèi)部，增加藥材與提取溶劑的接觸;酶提取法利用纖維素酶分解太子參細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，在一定程度上可以促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)部多糖的溶出和提高太子參中纖維素源多糖的提取率，因此，熱水回流和酶提取法更有利于太子參多糖的高效提取。在實用性方面，超聲波提取法需要專門設(shè)備，且設(shè)備要求技術(shù)含量較高，不適用于工業(yè)化大生產(chǎn)。酶提取法所需設(shè)備簡捷，操作簡便，但存在提取成本較高和多糖產(chǎn)物純度較低等問題。熱水回流提取法在工業(yè)上已有較成熟的提取設(shè)備，且提取時間短、提取率高，較為適用于太子參多糖的生產(chǎn)。

該試驗采用的室溫條件下超聲提取法對太子參多糖提取率要低于熱水提取法和酶提取法，說明較高的溫度可能更有利于太子參多糖的溶出，但是高溫的提取環(huán)境容易破壞多糖的空間結(jié)構(gòu)，從而影響其生物活性;而相對較低的提取溫度，可能會更好的保持多糖獨特的性質(zhì)[7]，關(guān)于不同提取條件下太子參多糖生物活性的研究有待進(jìn)一步深入。

參考文獻(xiàn)

[1]徐先祥，黃玉香，夏倫祝，等.太子參多糖對糖尿病小鼠抗氧化能力與胰腺病理的影響[J].食品工業(yè)科技，2012，33（24）：392-393.

[2]張麗娟，王珍，廖尚高. 太子參多糖對RAW 264.7巨噬細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)作用的初步研究[J]. 中國野生植物資源， 2018， 37（4）： 14-17.

[3]Hu J， Pang W， Chen J， et al. Hypoglycemic effect of polysaccharides with different molecular weight of Pseudostellaria heterophylla[J]. BMC Complement Altern Med， 2013（13）： 267.

[4]Chen J， Pang W， Kan Y， et al. Structure of a pectic polysaccharide from Pseudostellaria heterophylla and stimulating insulin secretion of INS-1 cell and distributing in rats by oral[J]. Int J Biol Macromol， 2018（106）： 456-463.

[5]劉湘湘，阮君山. 太子參多糖對大鼠心肌缺血的保護(hù)作用[J]. 中國民族民間醫(yī)藥， 2017， 26（17）： 18-20.

[6]李瑤佳. 植物多糖提取方法研究進(jìn)展[J]. 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技， 2019（1）： 222-223.

[7]Vieira J M， Mantovani R A， Raposo M， et al. Effect of extraction temperature on rheological behavior and antioxidant capacity of flaxseed gum[J]. Carbohydr Polym， 2019（213）： 217-227.

（收稿日期：2019-04-30 編輯：劉斌）