倪 奎

(安徽新聞出版職業(yè)技術學院，安徽 合肥 230061)

玉米是中國的重要糧食作物[1]，雜草危害一直是限制玉米產(chǎn)量提高的關鍵因素[2]。因此，適當?shù)脑谟衩滋飮娛┻m量除草劑可降低雜草對玉米產(chǎn)量的危害[3]。自20世紀90年代以來，玉米田除草劑應用面積逐年擴大，在有效控制草害方面發(fā)揮了重要作用[4]，然而因使用濃度和方法不當，除草劑對作物造成一定的藥害[5]。所以，除草劑的選擇、噴施的方法、劑量時間以及殘留檢測在當前顯得尤為重要[6]。

玉米田除草劑有單劑種類和混劑種類兩種。單劑種類就是只含有某一種化學成分，如異丙草胺、莠去津、二甲四氯鈉鹽等，而混劑種類則是兩種或兩種以上化學成分按照一定的比例混合在一起使用，如撲草津+莠去津混劑、異丙草胺+莠去津混劑、煙嘧磺隆+莠去津混劑等。本課題實驗所用除草劑為異丙草胺+莠去津混劑。異丙草胺+莠去津能有效地防除稗草、馬唐、鱧腸、莎草等單、雙子葉雜草，在夏玉米整個生育期間可有效地控制田間雜草的危害，且對玉米較為安全，優(yōu)于目前旱作物上普遍應用的除草劑。

本實驗在原有傳統(tǒng)檢測基礎上設計最終殘留試驗，對最終殘留試驗中的青玉米和玉米進行采樣，以提高檢測的科學性。通過采用GC、氮吹儀、旋轉(zhuǎn)濃縮蒸發(fā)器等儀器以及柱層析凈化等方法，對所采樣品中異丙草草胺+莠去津除草劑中兩種農(nóng)藥同時進行提取和純化并檢測，即同柱分析，達到較高的檢測效率。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

本試驗所用材料品種為安徽省舒城縣棠樹鄉(xiāng)和河南省鄭州市辛店鎮(zhèn)兩地栽種的玉米。試驗農(nóng)藥為37%異丙草胺+莠去津可分散油懸浮劑。異丙草胺標準品純度95.8%，莠去津標準品純度97.4%，由山東一松生化有限公司提供；無水硫酸鈉、二氯甲烷、正己烷、石油醚、丙酮、氯化鈉均為分析純;活性炭、中性氧化鋁(550 ℃烘4 h，使用前5%水減活)[6]。

1.2 試驗設計

本試驗共設置2個處理，在每個處理中設計3個重復小區(qū)，目的是為了保證試驗的客觀性和科學性。每小區(qū)面積不小于30 m2，以30 m2為最佳，且在各小區(qū)之間設保護行。在設計各試驗小區(qū)時還應該注意各小區(qū)在此之前應未施用過異丙草胺和莠去津混劑除草劑[7]。選用低劑量和高劑量兩個施藥劑量，其中低劑量為1 110 g/hm2(有效成分用量)，而高劑量為1 665 g/hm2(有效成分用量)。

按照劑量由低劑量到高劑量的順序用噴霧器進行均勻噴霧，且在噴施除草劑的過程中應該保持勻速，目的是為了使噴施的除草劑盡可能均勻地分布，反而則會影響試驗的客觀性和準確性，噴施除草劑的時間為玉米3～7葉期(雜草2～3葉期)[8]。選在這個時期是因為在玉米苗期，其氣候正處于高溫多雨季節(jié)，雜草發(fā)生最大，生長迅速，一般在播后10 d雜草即達出苗高峰，15 d出苗90%，30 d達97%。而玉米在中后期會逐漸形成密閉的高大的群體，此時的雜草生長會受到抑制，對產(chǎn)量的影響不嚴重。然后用噴霧器進行均勻噴霧施藥1次即可，不需要再專門對土壤進行噴施。最后于收獲前采集青玉米，收獲時采集玉米[9]。

1.3 試驗地點氣候條件和土壤類型

本試驗所用材料品種分別選自于2014年和2015年在安徽省舒城縣棠樹鄉(xiāng)和河南省鄭州市辛店鎮(zhèn)兩地栽種的玉米。其中安徽點在2014和2015年試驗期間降雨量為294.2 mm左右，氣溫為15.1～32.3 ℃。土壤類型為黃白土，有機質(zhì)含量為2.10%，pH值為6.6。河南點在2011～2012年試驗期間降雨量為293 mm左右，氣溫為15～34 ℃。土壤類型為壤質(zhì)土，有機質(zhì)含量1.05 %，pH值為7.1。

1.4 采集最終殘留樣品

在各個小區(qū)內(nèi)隨機多點采集生長正常的青玉米和成熟玉米樣品，各采集6～12個即可。除去采集的玉米樣品的苞葉和花絲，且保證玉米取樣量應該不少于2 kg。對所采集的玉米樣品進行脫粒，且籽粒應不少于1 kg。對采集的玉米籽粒進行充分混勻后，用四分法縮分，然后取300 g裝入封口容器中。注意應在容器內(nèi)外各加上標簽且應該保存在-20 ℃冰箱中。

1.5 玉米中異丙草胺和莠去津殘留檢測方法

方法原理簡述：選用合適的溶劑對樣品進行提取，然后柱層析凈化，最后GC測定。

提取:將采集的玉米籽粒樣品解凍，然后用粉碎機對其粉碎，稱取10 g。向粉碎后的玉米籽粒樣品中加入50 mL丙酮∶水=4∶1溶液，然后用振蕩機振蕩1 h。振蕩1 h后，過濾，收集濾液。用丙酮∶水=4∶1溶液10 mL對殘渣進行洗滌，收集濾液，重復2次，最后將收集的濾液合并于分液漏斗中。向分液漏斗中加入50 mL 10%NaCl溶液，然后用50 mL石油醚對其進行萃取，重復3次。最后將萃取所得溶液用旋轉(zhuǎn)濃縮蒸發(fā)器濃縮至3 mL。

凈化:選擇玻璃層析柱，其長為20 cm，內(nèi)徑為1 cm。在進行柱層析凈化前對玻璃層析柱進行裝柱。首先在玻璃層析柱底端裝入適量脫脂棉，以防裝柱時試劑漏出來，然后加2 cm無水Na2SO4，其上再加入已經(jīng)混勻的0.1 g活性碳與6 g中性氧化鋁(5%水減活)，最后再加入2 cm無水Na2SO4。裝柱結(jié)束后應用玻璃棒對玻璃層析柱的外壁進行輕輕的敲打，目的是再層析時保證層析效果和液體不滯留。裝好柱后，先用20 mL二氯甲烷進行預淋，待預淋液即將預淋完時棄去淋洗液，再轉(zhuǎn)移樣品溶液至柱上，然后用70 mL二氯甲烷對裝有樣品液的燒瓶進行溶解，再淋洗。收集淋洗液，然后用旋轉(zhuǎn)濃縮蒸發(fā)器對其進行濃縮至近干，加5 mL石油醚，再用旋轉(zhuǎn)濃縮蒸發(fā)器對其進行濃縮，然后N2吹干，最后用正己烷定容至5 mL。待測。

一個企業(yè)如果想要很好的發(fā)展，僅僅只是做出一份市場營銷策略是遠遠不夠的。企業(yè)需要引導自己相關的企業(yè)部門不斷對自己企業(yè)的具體情況展開深入的分析與研究。不同時期的企業(yè)所面臨的企業(yè)風險和挑戰(zhàn)是不同的，不同階段的企業(yè)實力也是不同的。所以，只有隨時對企業(yè)實力和其所面臨的市場狀況進行研究，才可以及時發(fā)現(xiàn)企業(yè)的問題并加以整改，從而促進企業(yè)不斷地完善自己的市場營銷策略，提高自己企業(yè)的競爭實力，借此來全面的推廣自己企業(yè)的產(chǎn)品，為企業(yè)自身帶來更為客觀的收益［4］。

1.6 玉米中異丙草胺和莠去津殘留分析測定

氣相色譜儀器為美國安捷倫公司GC7890，配ECD檢測器。DB-5毛細管柱為110 m×0.25 mm× 0.25 μm。進樣口溫度為250 ℃。檢測器溫度為300 ℃。載氣為高純氮，流速為10 mL/min，不分流。進樣量為1 μL。柱溫(程序升溫)：初始溫度為100 ℃，保持1 min后，以10 ℃/min升至200 ℃后再以2 ℃/min升至220 ℃，保持4 min。繪制標準曲線有兩個目的，一是說明所測異丙草胺和莠去津在所測質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關系良好；一是通過對異丙草胺和莠去津單獨進行標準曲線的繪制，得到異丙草胺和莠去津在色譜圖上的相對保留時間。

1.6.1 異丙草胺標準曲線 將配制好的1 000 μg/mL異丙草胺母液用正己烷逐級稀釋，分別配制成0.1、0.2、1.0、2.0、5.0、10.0 μg/mL的標準溶液。在2.5.1節(jié)的儀器條件(氣相色譜檢測條件)下對6個濃度的標準溶液進行測定，以測得的峰面積(Hz﹡S)為縱坐標，以濃度(μg/mL)為橫坐標，繪制標準曲線。

所得異丙草胺標準曲線回歸方程為：y=20 565.718 0x-1 207.201 1，R=0.999 8，說明異丙草胺在0.1～10.0 μg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關系良好(圖1)。

1.6.2 莠去津標準曲線 將1 000 μg/mL莠去津母液用正己烷逐級稀釋，分別配制成0.1、0.2、1.0、2.0、5.0、10.0 μg/mL的標準溶液。在2.5.1節(jié)的儀器條件(氣相色譜檢測條件)下對6個濃度的標準溶液進行測定，以測得的峰面積(Hz﹡S)為縱坐標，以濃度(μg/mL)為橫坐標，繪制標準曲線。

所得莠去津標準曲線回歸方程為：y=2 235.023 0x+524.063 1，R=0.999 1，說明莠去津在0.1～10.0 μg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關系良好(圖2)。

圖1 異丙草胺標準曲線圖

圖2 莠去津標準曲線圖

異丙草胺和莠去津最小檢出量、最低檢測濃度：儀器對異丙草胺和莠去津的最小檢出量分別為2.0×10-12、2.0×10-11g。玉米籽粒(青籽?；蚴熳蚜?中異丙草胺和莠去津最低檢測濃度為0.005 mg/kg。

異丙草胺和莠去津相對保留時間：在上述節(jié)儀器條件(氣相色譜檢測條件)下，異丙草胺的相對保留時間為9.6 min，莠去津的相對保留時間為6.8 min。

異丙草胺、莠去津添加回收率與相對標準偏差：無論是用何種方法去測定農(nóng)藥殘留量抑或是進行其他實驗，首先應該要證明該實驗方法的準確性(準確度)和精密性(精密度)。只有建立在準確度和精密度較好的基礎上，實驗方法所得數(shù)據(jù)或結(jié)果才能說明問題。故對本實驗設計了添加回收試驗，測其添加回收率和相對標準偏差。

稱取空白籽粒樣品，并將其用粉碎機粉碎，稱取10 g，然后分別添加0.005、0.05、0.5 mg/kg的異丙草胺標準溶液和莠去津標準溶液。

2 結(jié)果與分析

2.1 方法學考察

圖3 籽?？瞻滋砑踊厥兆V圖

圖4 籽粒添加0.5 mg/kg除草劑加樣回收譜圖

圖5 籽粒添加0.05 mg/kg除草劑加樣回收譜圖

圖6 籽粒添加0.005 mg/kg除草劑加樣加樣回收譜圖

添加濃度/(mg/kg)回收率/%RSD/%0.00587.38±4.445.080.0589.26±5.065.670.597.39±1.681.72

表2 籽粒中莠去津添加回收

式中:R為樣本中農(nóng)藥殘留量(mg/kg)；C標為標準溶液濃度(μg/mL)；V標為標準溶液進樣體積(μL)；S樣為注入樣本溶液的峰面積(HZ*S)；V終為樣本最終定容體積(mL)；V樣為樣本溶液進樣體積(μL)；S標為注入標準溶液的峰面積(HZ*S)；W為樣品重量(g)。

2.2 異丙草胺最終殘留檢測分析

2014～2015年安徽省舒城縣棠樹鄉(xiāng)和河南省鄭州市辛店鎮(zhèn)兩地最終殘留檢測試驗結(jié)果如圖7-10和表3所示，37%異丙草胺+莠去津莠可分散油懸浮劑分別以低劑量1 110 g/hm2(有效成分用量)和高劑量1 665g/hm2(有效成分用量)施藥1次，于收獲前采收到的青玉米籽粒中異丙草胺的殘留量平均值為0.013 9～0.035 9 mg/kg，于收獲期采收的熟籽粒中異丙草胺的殘留量平均值為0.007 9～0.016 1 mg/kg。

目前，中國規(guī)定玉米籽粒中異丙草胺的農(nóng)藥最高殘留限量值為0.1 mg/kg，本實驗于收獲前采收到的青玉米籽粒中異丙草胺的殘留量平均值為0.013 9～0.035 9 mg/kg，于收獲期采收的熟籽粒中異丙草胺的殘留量平均值為0.007 9～0.016 1 mg/kg，均未超過最高殘留限量值。

2.3 莠去津最終殘留檢測分析

2014～2015年安徽省舒城縣棠樹鄉(xiāng)和河南省鄭州市辛店鎮(zhèn)兩地最終殘留檢測試驗結(jié)果如圖7～10和表3所示，37%異丙草胺+莠去津莠可分散油懸浮劑分別以低劑量1 110 g/hm2和高劑量1 665 g/hm2(有效成分用量)施藥1次，于收獲前采收到的青玉米籽粒中莠去津的殘留量平均值為0.016 4～0.034 0 mg/kg，于收獲期采收的熟籽粒中莠去津的殘留量平均值為0.008 1～0.033 5 mg/kg。

中國規(guī)定玉米籽粒中莠去津的農(nóng)藥最高殘留限量值為0.05 mg/kg，本實驗于收獲前采收到的青玉米籽粒中莠去津的殘留量平均值為0.016 4～0.034 0 mg/kg，于收獲期采收的熟籽粒中莠去津的殘留量平均值為0.008 1～0.033 5 mg/kg，均未超過最高殘留限量值。

圖7 安徽熟籽粒終殘高濃度最終殘留譜圖

圖8 安徽青籽粒終殘高濃度最終殘留譜圖

圖9 河南熟籽粒終殘低濃度最終殘留譜圖

圖10 河南青籽粒終殘高濃度最終殘留譜圖

時間/地點劑量/(g/hm2)次數(shù)采收間隔期/d殘留量/(mg/kg)2014年安徽省舒城縣棠樹鄉(xiāng)1 1101收獲前收獲期0.013 9±0.002 20.007 9±0.003 51 6651收獲前收獲期0.018 1±0.003 60.013 4±0.003 32015年安徽省舒城縣棠樹鄉(xiāng)1 1101收獲前收獲期0.014 2±0.001 00.008 1±0.001 51 6651收獲前收獲期0.017 0±0.001 60.016 1±0.002 02014年河南省鄭州市辛店鎮(zhèn)1 1101收獲前收獲期0.014 3±0.005 30.010 5±0.002 61 6651收獲前收獲期0.033 6±0.002 50.013 6±0.003 02015年河南省鄭州市辛店鎮(zhèn)1 1101收獲前收獲期0.014 8±0.004 00.010 7±0.001 61 6651收獲前收獲期0.035 9±0.010 20.013 0±0.001 0

從表3可以看出2011～2012年棠樹鄉(xiāng)和辛店鎮(zhèn)噴施高劑量除草劑1次，于收獲前采收到青玉米樣品異丙草胺最大檢測量為0.035 9 mg/kg，于收獲期采收到熟籽粒樣品異丙草胺最大檢測量為0.016 1 mg/kg。

表4 籽粒中莠去津的最終殘留量

從表4中可以看出2014～2015年安徽省和山東省噴施高劑量莠去津一次，于收獲前采收到青玉米樣品莠去津最大檢測量為0.034 0 mg/kg，于收獲期采收到熟籽粒樣品莠去津最大檢測量為0.033 5 mg/kg。

3 結(jié)論與討論

由于本試驗所用除草劑農(nóng)藥為兩種成分混合除草劑，所以在檢測的時候如何達到同步和高效的檢測是其關鍵。GC法的分離原理是使混合物中各組分在兩相間進行分配，其中不動的相為固定相，另一相為攜帶混合物流過此固定相的流體，稱為流動相。當流動相中所含混合物經(jīng)過固定相時，就會與固定相發(fā)生作用[10]。由于各組分在性質(zhì)和結(jié)構上的差異，與固定相發(fā)生作用的大小、強弱也有差異，因此在同一推動力作用下，不同組分在固定相中滯留時間有長有短，從而按先后不同次序從固定相中流出。通過這個原理就可以通過一次實驗檢測，在一張色譜圖上得到兩種藥的檢測結(jié)果，從而達到同時、高效的檢測。

從異丙草胺和莠去津?qū)嶒灲Y(jié)果數(shù)據(jù)以及最終殘留分析可以得出，無論是異丙草胺還是莠去津，噴施高劑量的除草劑所測最終殘留量均未超過農(nóng)藥最高殘留限量值，說明本實驗噴施農(nóng)藥合理，按規(guī)定在玉米田噴施低、高劑量的異丙草胺+莠去津除草劑是安全的，對于玉米田噴施除草劑農(nóng)藥起到一定的參考價值。