周 軍，陳 卓，張 茉，王 杰

(天津市藥品檢驗(yàn)研究院，天津 300070)

半夏糖漿由麻黃、紫菀、枇杷葉、甘草等9味中藥組成，具有化痰止咳的作用，用于治療咳嗽痰多、支氣管炎。其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑》第八冊(標(biāo)準(zhǔn)號WS3-B-1527-93)。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中僅有化學(xué)鑒別、相對密度及糖漿劑常規(guī)檢查項(xiàng)，無定量指標(biāo)，無法控制藥品的質(zhì)量。麻黃具有發(fā)汗散寒、宣肺平喘、利水消腫的功效，用于風(fēng)寒感冒、胸悶咳喘、風(fēng)水浮腫，與處方中的其他中藥協(xié)同發(fā)揮化痰止咳的作用。《中國藥典》2015年版一部麻黃藥材項(xiàng)下采用HPLC法測定活性成分鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的量[1]。為了有效控制藥品的質(zhì)量，本試驗(yàn)采用HPLC法測定半夏糖漿中的鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量。

1 儀器與試藥

1.1儀器 島津LC-20AD高效液相色譜儀，配有LC-20AD泵、SIL-20AC自動進(jìn)樣器、SPD-M20紫外檢測器、CTO-20AC柱溫箱；LC-soLution色譜工作站。

1.2試藥 乙腈(色譜純，默克公司)；甲醇(色譜純，天津市康科德科技有限公司)；磷酸、磷酸二氫鉀、三乙胺、鹽酸均為市售分析純；水為超純水。鹽酸麻黃堿對照品(中國食品藥品檢定研究院提供，批號171241-201508，供含量測定用，質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.8%)、鹽酸偽麻黃堿對照品(中國食品藥品檢定研究院提供，批號171237-201510，供含量測定用，質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.8%)。 半夏糖漿(HLBZ，批號2017-1～2017-24，2018-1～2018-8；GSXY，批號2016b-1，2017b-1,2018-1b～2018b-2；HHZX，批號2018-1c～2018c-3；STCC，批號2017d-1,2018d-1；LSYY，批號2016e-1～2016e-2，2017e-1，2018e-1；HXNY，批號2017f-1，2018f-1；BSYP，批號2016g-1～2016g-2；KYHW，批號2017h-1；ZQJJ，批號2017i-1，2018i-1～2018i-2；GBXQ，批號2018j-1～2018j-2，2017j-1；GWDQ，批號2017k-1～2017k-2，2016k-1，2018k-1～2018k-2；JYSY，批號2018l-1；GZXT，2017m-1～2017m-4，2018m-1～2018m-3；HBYY，批號2017n-1～2017n-6，2018n-1～2018n-7；GZLZ，批號2017p-1～2017p-13，2018p-1～2018p-18；HDBZ，批號2017q-1～2017q-7，2018q-1；GBXQ，批號2017r-1～2017r-16，2018r-1～2018r-6；GHXT，批號2017s-1～2017s-5)均為2018年國家評價抽驗(yàn)樣品。試驗(yàn)中使用的處方藥材均由天津中藥飲片廠提供，由天津市藥品檢驗(yàn)研究院趙晨主管藥師鑒定，均符合《中國藥典》2015年版一部相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的要求。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件 OSAKA SODA CAPCELL PAK C18色譜柱 (250 mm×4.6 mm，5 μm)；以乙腈-0.1 mol/L磷酸二氫鉀水溶液(含0.1%磷酸及0.1%三乙胺)(5∶95)為流動相；檢測波長210 nm；柱溫25 ℃；體積流量1.0 ml/min；進(jìn)樣量10 μl。

2.2溶液的制備

2.2.1對照品溶液的制備 分別取鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿適量，加5%氨水甲醇制成每1 ml中含有鹽酸麻黃堿55 μg、鹽酸偽麻黃堿50 μg的混合溶液，即得。

2.2.2供試品溶液的制備 精密量取本品15 ml，置25 ml量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸稀釋至刻度，搖勻，精密量取3 ml，加于已處理好的混合型陽離子交換小柱上(500 mg，依次用甲醇、水、0.1 mol/L鹽酸各10 ml洗脫)，用甲醇5 ml洗脫，棄去洗脫液，再用5%氨水甲醇溶液洗脫至10 ml量瓶中，加5%氨水甲醇溶液至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3陰性樣品溶液的制備 按處方取除麻黃外的各味藥材，按半夏糖漿處方制得陰性樣品，再按供試品溶液的制備方法制得陰性樣品溶液。

2.3系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 取上述對照品溶液5 μl、供試品溶液和陰性樣品溶液各10 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。理論板數(shù)按鹽酸麻黃堿峰計算應(yīng)不低于3 000，鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿的分離度應(yīng)大于1.5。見圖1。

2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 取鹽酸麻黃堿對照品適量，精密稱定，加5%氨水甲醇溶液制成0.4678、1.169 5、2.339 0、7.017 0、11.695 0和46.780 0 μg/ml的對照品溶液，分別精密吸取10 μl，注入液相色譜儀，按以上色譜條件分別測定峰面積。以對照品進(jìn)樣的質(zhì)量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，得回歸方程:Y=1743.2X-862.62(r=0.999 9)。結(jié)果表明，鹽酸麻黃堿進(jìn)樣量在4.67 8～467.8 ng與峰面積線性關(guān)系良好。取鹽酸偽麻黃堿對照品適量，加5%氨水甲醇溶液制成0.444 1、1.110 0、2.220 0、6.662 0、11.100 0和44.410 0 μg/ml的對照品溶液，分別精密吸取10 μl，注入液相色譜儀，按以上色譜條件分別測定峰面積。以對照品進(jìn)樣的質(zhì)量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，得回歸方程：Y=1 773.2X-1 112.8(r=0.999 9)。結(jié)果表明，鹽酸偽麻黃堿進(jìn)樣量在4.441～444.1 ng與峰面積線性關(guān)系良好。

1.鹽酸麻黃堿 2.鹽酸偽麻黃堿

2.5精密度試驗(yàn) 取半夏糖漿(HLBZ，2017-24)樣品，精密量取15 ml，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，計算得樣品中鹽酸麻黃堿峰面積的RSD值為0.85%，鹽酸偽麻黃堿峰面積的RSD值為0.75%。

2.6重復(fù)性試驗(yàn) 取半夏糖漿(HLBZ，2017-24)樣品，精密量取15 ml，共6份，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣測定，計算得樣品中鹽酸麻黃堿質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30.77 μg/ml，RSD為0.46%；鹽酸偽麻黃堿質(zhì)量分?jǐn)?shù)為32.48 μg/ml，RSD為2.53%。

2.7穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密量取同一批半夏糖漿(HLBZ，2017-24)15 ml，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別在0、2、4、8、12、18和24 h進(jìn)樣測定。結(jié)果樣品中鹽酸麻黃堿峰面積的RSD為0.75%，鹽酸偽麻黃堿峰面積的RSD為2.54%。

2.8回收率試驗(yàn) 取半夏糖漿(HLBZ，2017-24)樣品，精密量取7.5 ml，共6份，置25 ml量瓶中，分別精密加入含有鹽酸麻黃堿0.023 05 mg/ml與鹽酸偽麻黃堿0.025 705 mg/ml混合對照品的0.1 mol/L鹽酸溶液10 ml，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依法測定，計算回收率。結(jié)果鹽酸麻黃堿的平均回收率為95.82%(RSD為0.84%)、鹽酸偽麻黃堿的平均回收率98.77%(RSD為1.62%)。見表1和表2。

表1 鹽酸麻黃堿回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

表2 鹽酸偽麻黃堿回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.9樣品測定 對本次抽驗(yàn)18家生產(chǎn)企業(yè)共151批半夏糖漿樣品依法測定，結(jié)果見表3。

表3 半夏糖漿樣品含量測定結(jié)果 mg/ml

續(xù)表3

續(xù)表3

續(xù)表3

注：HXNY的2批樣品測定結(jié)果非常低，已超出標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍。懷疑使用提取過的麻黃投料

3 討論

3.1提取方法的選擇 試驗(yàn)中嘗試采用樣品稀釋后直接進(jìn)樣測定，結(jié)果在鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿色譜峰出峰位置有較多的雜質(zhì)峰，無法分開；采用蒸餾法[2]，結(jié)果樣品蒸餾時間長；采用萃取法[3，4]，將樣品加氨水堿化后，用乙醚提取，結(jié)果樣品溶液非常易乳化并且萃取時間長；采用固相萃取柱富集凈化的方法簡單、快速、準(zhǔn)確[5]。分別比較不同品牌的固相萃取柱，進(jìn)行耐用性試驗(yàn)，結(jié)果顯示含量測定結(jié)果基本一致。

3.2流動相的選擇 分別采用乙腈-0.1%磷酸(5∶95)、甲醇-0.1%磷酸(10∶90)、乙腈-0.1 mol/L磷酸二氫鉀水溶液(含0.1%磷酸及0.1%三乙胺)(5∶95)為流動相分別進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果以采用乙腈-0.1 moL/L磷酸二氫鉀水溶液(含0.1%磷酸及0.1%三乙胺)(5∶95)為流動相樣品中的鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿分離較好。

3.3樣品測定情況 計算抽驗(yàn)樣品中鹽酸麻黃堿及鹽酸偽麻黃堿測定總量的平均值為0.046 06 mg/ml，部分樣品測定結(jié)果較低，不同企業(yè)間樣品含量差異較大，其中最低的HXNY共2批次樣品測定結(jié)果低于線性范圍，懷疑該企業(yè)使用提取過的麻黃投料。此外，部分企業(yè)不同批次間樣品差異較大，無法保證半夏糖漿藥品的質(zhì)量。因此，建立樣品中麻黃的含量測定方法具有重要的意義。