王志芳, 李貞景, 楊明冠, 路來風(fēng)， 王昌祿，*, 李 政,張健飛, 鞏繼賢

(1.天津工業(yè)大學(xué) 分析測(cè)試中心， 天津 300387；2.天津科技大學(xué) 食品工程與生物技術(shù)學(xué)院/食品營(yíng)養(yǎng)與安全教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 天津 300457；3.天津工業(yè)大學(xué) 紡織科學(xué)與工程學(xué)院， 天津 300387)

鐮刀菌是世界性分布的一類真菌，可侵染達(dá)100余種植物，引起植物的根腐、莖腐、花腐和穗腐等多種病害[1-2]。鐮刀菌侵染寄主植物維管束系統(tǒng)，破壞植物的輸導(dǎo)組織維管束，并產(chǎn)生毒素，造成作物萎蔫死亡，屬于生產(chǎn)上最難防治的重要病害之一。鐮刀菌在世界范圍內(nèi)造成許多毀滅性的植物病害，如串珠鐮刀菌(Fusariummoniliforme)、尖孢鐮刀菌(Fusariumoxysporum)造成香蕉萎蔫病，禾谷鐮刀菌(Fusariumgraminearum)造成頸腐病等[3-5]。串珠鐮刀菌還會(huì)污染玉米、高粱、小麥、棉花及某些飼料等，為非專性、非宿主特異性病原菌，其水溶性代謝產(chǎn)物伏馬菌素(fumonisin)，還可以引起動(dòng)物各種疾病，如馬腦白質(zhì)軟化癥、豬肺水腫或大鼠肝癌[6-7]。采用生物防治手段對(duì)有害霉菌及其毒素進(jìn)行防控，對(duì)環(huán)境污染小，符合農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展戰(zhàn)略方向，受到國(guó)內(nèi)外科學(xué)家關(guān)注。

鏈霉菌是重要的生防菌株，利用鏈霉菌產(chǎn)生的次級(jí)代謝物開發(fā)抑菌劑具有天然、安全、抑菌效果好等特點(diǎn)，被廣泛用于農(nóng)業(yè)及醫(yī)藥領(lǐng)域[8-10]。隨著現(xiàn)代生物技術(shù)的發(fā)展，研究者們?cè)跇O端環(huán)境微生物、新菌種篩選、新物質(zhì)分離等方面取得了一定的成果。鏈霉菌具有產(chǎn)生多種次級(jí)代謝物的能力，對(duì)尋找具有新穎化學(xué)結(jié)構(gòu)及開發(fā)新作用機(jī)理的抗菌藥物生物活性資源具有重要意義[11-14]。

Streptomycesalboflavus是從土壤中篩選到的一株拮抗菌，保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(CGMCC No. 4666)，16S rDNA在NCBI注冊(cè)登錄號(hào)為JX915780，鑒定為白黃鏈霉菌。對(duì)峙培養(yǎng)法研究發(fā)現(xiàn)，該菌對(duì)黃曲霉(Aspergillusflavus)、黑曲霉(Aspergillusniger)、米曲霉(Aspergillusoryzae)、赭曲霉(Aspergillusochraceus)、純綠青霉(Penicilliumverrucosum)、串珠鐮刀菌、尖孢鐮刀菌、茄腐鐮刀菌(Fusariumsolani)等常見重要植物病原菌具有廣譜拮抗作用，尤其對(duì)串珠鐮刀菌的抑制效果最好，且還會(huì)產(chǎn)生揮發(fā)性抑菌物質(zhì)[15-16]。為進(jìn)一步研究Streptomycesalboflavus產(chǎn)生的生物活性物質(zhì)，本研究對(duì)其產(chǎn)生的胞內(nèi)抗菌物質(zhì)進(jìn)行定性分析，并研究其活性物質(zhì)對(duì)串珠鐮刀菌的抑菌機(jī)理，希望為利用鏈霉菌開展鐮刀菌的生物防治技術(shù)研究提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1菌株和培養(yǎng)基

拮抗菌株：拮抗鏈霉菌菌株Streptomycesalboflavus，本實(shí)驗(yàn)室自天津市寶坻區(qū)飼料廠儲(chǔ)糧倉(cāng)周圍的土壤中篩選分離獲得并保藏。供試菌株：串珠鐮刀菌(Fusariummoniliforme)，由天津市畜牧獸醫(yī)研究所提供。

供試培養(yǎng)基：高氏一號(hào)液體培養(yǎng)基，用于Streptomycesalboflavus發(fā)酵液的培養(yǎng)；PDA培養(yǎng)基，用于指示菌串珠鐮刀菌的培養(yǎng)及拮抗活性的測(cè)定。

1)高氏一號(hào)合成培養(yǎng)基配方：可溶性淀粉，20.0 g；NaCl，0.5 g；FeSO4·7H2O，0.01 g；MgSO4·7H2O，0.5 g；KNO3，1 g；K2HPO4，0.5 g；瓊脂，20 g；自來水，1 000 mL；調(diào)節(jié)pH值7.2～7.4。

2)高氏一號(hào)液體培養(yǎng)基配方：可溶性淀粉，20.0 g；黃豆粉，10.0 g；KNO3，1.0 g；K2HPO4，0.5 g；NaCl，0.5 g； MgSO4·7H2O，0.5 g；FeSO4·7H2O，0.01 g；自來水，1 000.0 mL；pH值7.2～7.4。

3)PDA培養(yǎng)基配方：稱取去皮馬鈴薯200.0 g，切成小塊，加入1 000.0 mL水，煮沸30 min，用雙層紗布濾成清液。加水至1 000.0 mL，然后加入20.0 g葡萄糖至完全溶解，pH值自然。

4)查氏培養(yǎng)基配方：NaNO3，3.0 g； K2HPO4，1.0 g；MgSO4·7H2O，0.5 g；KCl，0.5 g；FeSO4·7H2O，0.01 g；蔗糖，30.0 g；蒸餾水，1 000 mL；pH值自然。

1.1.2原料和試劑

黃豆粉，食品級(jí)，天津市售黃豆粉；硫酸亞鐵、硫酸鎂，化學(xué)純，天津市化學(xué)試劑一廠；可溶性淀粉、氯化鈉、硝酸鉀，分析純，天津市北方天醫(yī)化學(xué)試劑廠；膽固醇(質(zhì)量比94%)、麥角甾醇(質(zhì)量比大于75%)，Sigma-aldrich公司；葡聚糖(質(zhì)量比大于97%)，百特純大分子科技有限公司；殼聚糖(質(zhì)量比大于85%)，湖北圣天宇公司；硅膠G、硅膠H，青島海洋化工廠；葡聚糖凝膠LH- 20，Pharmacia公司。

1.2 儀器和設(shè)備

LS- B50L型立式壓力蒸汽滅菌鍋，上海華線醫(yī)用核子儀器有限公司；KCL2000型恒溫恒濕培養(yǎng)箱，日本Eyela東京理化公司；AG22331型高速離心機(jī)，德國(guó)Eppendorf公司； CX41型生物顯微鏡、BX- 60型熒光顯微鏡，Olympus公司；SU- 1510型掃描電子顯微鏡，Hiachi公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1Streptomycesalboflavus的發(fā)酵培養(yǎng)

將Streptomycesalboflavus菌株劃線于高氏一號(hào)固體培養(yǎng)基斜面上進(jìn)行活化， 28 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5～6 d，制備1×106CFU/mL孢子懸液，按體積分?jǐn)?shù)10%添加量加入到液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，28 ℃，180 r/min搖床培養(yǎng)6 d。

1.3.2Streptomycesalboflavus中抑菌活性物質(zhì)的分離純化

用8層紗布過濾發(fā)酵液，得到鏈霉菌菌絲體。甲醇浸提菌絲體，將浸提液減壓濃縮，粗提物經(jīng)萃取、硅膠吸附柱層析、葡聚糖凝膠LH- 20柱層析分離純化，得到脂溶性抑菌組分。

1.3.3抑菌活性物質(zhì)檢測(cè)方法

采用牛津杯法測(cè)定抑菌物質(zhì)的生物活性。將串珠鐮刀菌的孢子懸浮液接種于PDA培養(yǎng)基中，然后放置3個(gè)牛津杯，將活性物質(zhì)加入一個(gè)牛津杯，其余兩個(gè)作為空白對(duì)照組，培養(yǎng)3 d。

1.3.4抑菌活性物質(zhì)pH紙層析

以新華一號(hào)層析紙為固定相，用pH值為2.2～8.0的磷酸氫二鈉- 檸檬酸緩沖液及pH值9～10的甘氨酸- 氫氧化鈉溶液分別處理各濾紙條，晾干后備用。在每個(gè)pH值的濾紙條上一端標(biāo)記起點(diǎn)，取抑菌物質(zhì)20 μL進(jìn)行點(diǎn)樣，晾干后分別在水飽和的正丁醇、水飽和的乙酸乙酯、體積分?jǐn)?shù)50%的乙醇中展層，用生物學(xué)顯跡法測(cè)遷移率Rf值，具體方法見參考文獻(xiàn)[17]。

1.3.5抑菌活性物質(zhì)Doskochilova溶劑紙層析

溶劑系統(tǒng)：Ⅰ.水飽和的正丁醇；Ⅱ.水飽和的正丁醇，內(nèi)含質(zhì)量比2%的對(duì)甲苯磺酸；Ⅲ.V(正丁醇)∶V(乙酸)∶V(水)為2∶1∶1；Ⅳ.水飽和的正丁醇，內(nèi)含質(zhì)量比2%的六氫吡啶；Ⅴ.正丁醇飽和的0.5 mol/L、pH值為7的磷酸緩沖液；Ⅵ.正丁醇飽和的水，內(nèi)含質(zhì)量比2%的對(duì)甲苯磺酸；Ⅶ.V(苯)∶V(甲醇)為4∶1，濾紙先用磷酸緩沖液處理后晾干；Ⅷ.V(甲醇)∶V(水)為3∶1，水內(nèi)含質(zhì)量比3%的NaCl，濾紙先用質(zhì)量比5%的Na2SO4處理后晾干。用生物學(xué)顯跡法測(cè)遷移率Rf值，具體方法見參考文獻(xiàn)[17]。

1.4 抑菌物質(zhì)對(duì)菌絲形態(tài)影響的觀察

1.4.1光學(xué)顯微鏡觀察

采用牛津杯法檢測(cè)抑菌物質(zhì)的抑菌活性，挑取由抑菌物質(zhì)作用產(chǎn)生的透明圈的邊際菌絲，光學(xué)顯微鏡觀察。挑取未受到抑制作用的菌絲作為對(duì)照。

1.4.2熒光顯微鏡觀察

將1×106CFU/mL的串珠鐮刀菌孢子懸浮液接種于察氏液體培養(yǎng)基中，28 ℃，180 r/min條件下培養(yǎng)48 h。將串珠鐮刀菌的培養(yǎng)液以轉(zhuǎn)速為4 000 r/min，離心10 min，棄上清液，用抑菌物質(zhì)溶液輕輕懸浮菌絲15 min，去離子水清洗后，用碘化丙啶(PI)染色后，在熒光顯微鏡下進(jìn)行觀察。對(duì)照組菌絲用體積比為50%甲醇(配制抑菌物質(zhì)的溶液)處理。激發(fā)光波長(zhǎng)450～490 nm，發(fā)射光波長(zhǎng)520 nm。

1.4.3掃描電子顯微鏡觀察

采用牛津杯法檢測(cè)抑菌物質(zhì)的抑菌活性，并用雙面刀片從抑菌物質(zhì)作用產(chǎn)生的透明圈的邊際取樣(3～5 mm3)，2.5%戊二醛固定2 h，磷酸緩沖液清洗，酒精梯度脫水(體積分?jǐn)?shù)為50%、70%、80%、90%、100%乙醇各20 min)，干燥，離子鍍膜法鍍膜，掃描電鏡觀察、照相。以未受到抑制作用的菌絲作為對(duì)照。

1.5 抑菌物質(zhì)對(duì)菌絲細(xì)胞壁和細(xì)胞膜組成物質(zhì)影響的檢測(cè)

1.5.1抑菌物質(zhì)對(duì)細(xì)胞壁和細(xì)胞膜組成物質(zhì)的拮抗作用測(cè)試

參照文獻(xiàn)[18]進(jìn)行，配制含有不同濃度的膠狀幾丁質(zhì)、殼聚糖、β-1，3葡聚糖的培養(yǎng)基，其終質(zhì)量濃度分別為0.5、1.0、2.0、10.0 mg/mL，滅菌備用。卵磷脂、麥角甾醇、膽固醇分別配成質(zhì)量濃度l mg/mL母液，過濾除菌后，加入培養(yǎng)基中，使其終質(zhì)量濃度分別為0.5、1.0、2.0、10.0、50.0 μg/mL。通過牛津杯法檢測(cè)加入的物質(zhì)是否對(duì)抑菌物質(zhì)的抑菌活性產(chǎn)生拮抗作用。

1.5.2抑菌物質(zhì)對(duì)菌絲細(xì)胞膜中麥角甾醇合成的檢測(cè)

1.5.2.1 菌株培養(yǎng)及難皂化脂的提取[19-20]

將抑菌物質(zhì)加入到PDB培養(yǎng)液中，終質(zhì)量濃度為10.21 μg/mL，同時(shí)接入串珠鐮刀菌孢子懸浮液。以不加抑菌物質(zhì)作為空白對(duì)照組，培養(yǎng)3 d后，分別離心收集菌體，PBS洗滌兩次至上清液無色，去上清液。精確稱取菌體2.5 g，置于250 mL回流瓶中，加堿醇溶液(20% NaOH與95%乙醇體積比為5∶3)32 mL，在90 ℃水浴中皂化1.5 h。再加95%乙醇4 mL繼續(xù)皂化1 h，冷卻后加20 mL 石油醚(沸程30～60 ℃)，充分振蕩20 min，靜置2 h。提取2次，取上層液，用10 mL蒸餾水洗1次，取1 mL定容至10 mL，備用。

1.5.2.2 麥角甾醇HPLC檢測(cè)[21]

色譜條件為: 流動(dòng)相V(甲醇)∶V(水)為98∶2；柱溫30 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm，流速1.0 mL/min，靈敏度0.01 AUFS，進(jìn)樣量10 μL。

配制麥角甾醇標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量濃度分別為0.062 5、0.125 0、0.250 0、0.500 0、1 .000 0 mg/mL，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，并對(duì)樣品進(jìn)行檢測(cè)。

2 結(jié)果與分析

2.1 活性物質(zhì)的抑菌作用分析

Streptomycesalboflavus中活性物質(zhì)對(duì)串珠鐮刀菌的抑制作用見圖1。由圖1可知，加入活性物質(zhì)的牛津杯周圍產(chǎn)生透明的抑菌圈，活性物質(zhì)顯示出很強(qiáng)的抑菌作用，在透明圈內(nèi)沒有串珠鐮刀菌生長(zhǎng)。

圖1 抑菌物質(zhì)對(duì)串珠鐮刀菌的抑制作用Fig.1 Inhibit action of active antifungal substance against Fusarium moniliforme

2.2 pH紙層析結(jié)果

抑菌物質(zhì)pH紙層析結(jié)果見圖2(層析體系為50%乙醇)。由圖2可以看出，該物質(zhì)呈現(xiàn)中性抗生素的特征，不論pH值有何變化，Rf值幾乎不變。

以不同pH值緩沖液處理的層析紙為固定相，用合適的溶劑系統(tǒng)為移動(dòng)相，對(duì)不同類型的抗生素進(jìn)行層析，pH紙層析的Rf值有一定變化規(guī)律?？蓪⒖股胤譃樗嵝钥股?、堿性抗生素、中性抗生素和兩性抗生素。

圖4 抑菌物質(zhì)對(duì)菌絲形態(tài)影響的光學(xué)顯微鏡觀察結(jié)果Fig.4 Effects of antifungal substance on morphological of Fusarium moniliforme by optical microscope

圖2 抑菌物質(zhì)的pH紙層析結(jié)果Fig.2 Results of paper chromatography of pH system

2.3 捷克八溶劑紙層析結(jié)果

抑菌物質(zhì)捷克八紙層析結(jié)果見圖3。由圖3可知，活性物質(zhì)在溶劑系統(tǒng)5和6中移動(dòng)極小，而在其他溶劑系統(tǒng)中均移動(dòng)較大，成為倒船帆形。與捷克學(xué)者提出的6類標(biāo)準(zhǔn)圖譜比較，所得的活性物質(zhì)的抗生素類別與非水溶性Ⅰ型抗生素層析圖譜相似，推斷該活性物質(zhì)為非水溶性Ⅰ型抗生素。

圖3 抑菌物質(zhì)在捷克八溶劑系統(tǒng)的紙層析結(jié)果Fig.3 Results of paper chromatography of Doskochilova system

2.4 抑菌物質(zhì)對(duì)菌絲形態(tài)的影響

2.4.1光學(xué)顯微鏡觀察結(jié)果

用光學(xué)顯微鏡觀察抑菌物質(zhì)對(duì)菌絲體形態(tài)的影響，結(jié)果如圖4。由圖4可知，空白對(duì)照組，菌絲形態(tài)結(jié)構(gòu)完整、表面光滑，菌絲體圓潤(rùn)飽滿、分布均勻，表現(xiàn)出良好的生長(zhǎng)狀態(tài)；抑菌物質(zhì)作用48 h后的串珠鐮刀菌菌絲生長(zhǎng)畸形，變得粗細(xì)不均，尤其菌絲末端有膨大現(xiàn)象，整個(gè)菌絲上有“念珠狀”空泡出現(xiàn)，并可見不完整菌絲，原生質(zhì)體外泄。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，抑菌物質(zhì)可能會(huì)通過使菌絲末端膨大阻礙菌絲繼續(xù)生長(zhǎng)。

2.4.2熒光顯微鏡觀察結(jié)果

經(jīng)PI染色后的空白對(duì)照組和抑菌物質(zhì)處理組菌絲，在熒光顯微鏡下觀察結(jié)果如圖5。圖5中，抑菌物質(zhì)處理15 min后，多數(shù)菌絲的細(xì)胞核被染成了紅色，而空白對(duì)照組菌絲沒有被染色，推測(cè)抑菌物可能破壞串珠鐮刀菌菌絲細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致膜通透性改變，干擾了菌體正常生理代謝的功能，從而起到對(duì)串珠鐮刀菌的抑制作用。

2.4.3掃描電子顯微鏡觀察結(jié)果

采用掃描電子顯微鏡(SEM)觀察抑菌物質(zhì)對(duì)串珠鐮刀菌的抑制作用，結(jié)果見圖6。圖6中，空白對(duì)照組菌絲生長(zhǎng)繁茂，菌絲細(xì)長(zhǎng)、均勻；活性物質(zhì)處理組，大多數(shù)菌絲體變形、孢子萌發(fā)出畸形的菌芽，出現(xiàn)較大的囊泡。泡囊狀菌絲表面凹凸不平，并殘留有碎片，推測(cè)活性物質(zhì)可能會(huì)抑制孢子的萌發(fā)，破壞串珠鐮刀菌菌體的完整性，進(jìn)而產(chǎn)生抑菌或殺菌作用。

2.5 抑菌物質(zhì)對(duì)菌絲細(xì)胞壁和細(xì)胞膜組成物質(zhì)的影響

2.5.1抑菌物質(zhì)對(duì)細(xì)胞壁和細(xì)胞膜組成物質(zhì)的拮抗效果

抑菌物質(zhì)對(duì)細(xì)胞壁物質(zhì)和細(xì)胞膜組成物質(zhì)的拮抗作用見圖7。圖7中，含有膠狀幾丁質(zhì)、殼聚糖、β-1，3葡聚糖、卵磷脂和膽固醇的培養(yǎng)皿中活性組分的抑菌作用沒有變化；而含有麥角甾醇的平板中，抑菌物質(zhì)的抑菌圈直徑減小，并隨著麥角甾醇濃度的增加，拮抗效果加強(qiáng)，提示抑菌物質(zhì)對(duì)串珠鐮刀菌的作用靶點(diǎn)可能與細(xì)胞膜中麥角甾醇有關(guān)。

1～6分別表示：膠狀幾丁質(zhì)、殼聚糖、β-1，3葡聚糖、卵磷脂、麥角甾醇、膽固醇；不同小寫字母表示經(jīng)Duncan 新復(fù)極差法檢驗(yàn)，在P<0.05水平差異顯著。圖7 細(xì)胞膜壁物質(zhì)對(duì)抑菌物質(zhì)的拮抗效果Fig.7 Antagonism of components of cell membrane and cell wall to antifungal substance

2.5.2抑菌物質(zhì)對(duì)菌絲細(xì)胞膜中麥角甾醇合成的影響

2.5.2.1 麥角甾醇的標(biāo)準(zhǔn)曲線分析

對(duì)不同質(zhì)量濃度的麥角甾醇標(biāo)準(zhǔn)品分別進(jìn)行HPLC分析。以麥角甾醇的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，麥角甾醇質(zhì)量濃度為0.062 5～1.000 0 mg/mL時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性良好，回歸方程為Y=6 378.8X+87.864，R2=0.999 9。

2.5.2.2 串珠鐮刀菌菌體細(xì)胞膜中麥角甾醇的檢測(cè)結(jié)果

以標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間和峰面積值分別作為定性、定量依據(jù)。結(jié)果表明，正常菌絲的細(xì)胞膜中麥角甾醇質(zhì)量濃度為124.00 ng/mL，而用抑菌物質(zhì)處理菌絲的細(xì)胞膜中麥角甾醇的質(zhì)量濃度為0.81 ng/mL，表明抑菌物質(zhì)處理后的串珠鐮刀菌菌絲細(xì)胞膜中麥角甾醇的生物合成減小。

3 結(jié) 論

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，Streptomycesalboflavus產(chǎn)生的抗菌物質(zhì)對(duì)串珠鐮刀菌菌絲生長(zhǎng)和孢子萌發(fā)都有很強(qiáng)的抑制作用?？咕镔|(zhì)濃度高時(shí)，能造成菌絲生長(zhǎng)畸形、短粗，膨大形成“念珠狀”，菌絲不能向前生長(zhǎng)，從而使其受到抑制；此外，抗菌物質(zhì)處理后的病原菌菌絲尖端形成膨脹泡而破裂，引起原生質(zhì)外泄，造成溶菌現(xiàn)象。熒光顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，活性物質(zhì)還可能對(duì)串珠鐮刀菌的菌體細(xì)胞膜造成損傷，導(dǎo)致大分子的PI染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)與細(xì)胞核DNA結(jié)合生成紅色熒光物，而正常組菌絲中未見紅色熒光物。通過檢測(cè)細(xì)胞壁物質(zhì)和細(xì)胞膜組成物質(zhì)與抑菌物質(zhì)對(duì)串珠鐮刀菌抑菌效果的拮抗作用的影響，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基含有麥角甾醇的平皿中，抑菌物質(zhì)的抑菌圈直徑減?。贿M(jìn)一步用HPLC法檢測(cè)了經(jīng)過抑菌物質(zhì)處理的菌絲和空白對(duì)照組菌絲中難皂化脂類提取物中麥角甾醇的含量，結(jié)果表明，受抑菌物質(zhì)作用的菌絲細(xì)胞膜中麥角甾醇的生物合成減少。

鏈霉菌是重要的天然抗生素來源菌群，自從抗生素問世以來，各國(guó)學(xué)者對(duì)抗生素如何作用于微生物和作用的具體靶標(biāo)位點(diǎn)等抑菌機(jī)理進(jìn)行了很多研究。結(jié)果表明，抗生素能通過作用于微生物細(xì)胞膜、細(xì)胞壁、蛋白質(zhì)合成系統(tǒng)，抑制核酸或核苷酸的合成等多種方式產(chǎn)生抑菌效果；而有一些抗菌物質(zhì)會(huì)通過幾種抑制方式同時(shí)作用于病原菌，達(dá)到抑菌作用。Streptomycesalboflavus產(chǎn)生的抗菌物質(zhì)對(duì)指示菌蛋白質(zhì)合成系統(tǒng)、核酸或核苷酸的合成等其他作用方式值得進(jìn)一步探究。隨著分子生物學(xué)技術(shù)在抑菌機(jī)理方面的應(yīng)用，也有報(bào)道發(fā)現(xiàn)一些新的特異性作用靶點(diǎn)和?；园袠?biāo)酶[22-23]。研究抑菌物質(zhì)的抑菌機(jī)理及新的抑菌作用方式對(duì)探尋新型防霉保鮮劑具有重要意義。