趙燕， 楊文秀， 馮江龍

(1.貴州醫(yī)科大學 臨床醫(yī)學院 病理學教研室， 貴州 貴陽 550004； 2.貴州省人民醫(yī)院 眼科， 貴州 貴陽 550002)

惡性黑素瘤(malignant melanoma，MM)是一種起源于黑色素細胞的惡性腫瘤，常見于皮膚、黏膜、眼等部位[1-2]，近年來MM的發(fā)病率有不斷上升的趨勢[3]。MM起病隱襲、惡性程度高，易發(fā)生早期轉移，目前尚無有效的系統(tǒng)治療，病死率較高[4-6]。因此，早發(fā)現、早診斷、早治療對于提高MM患者的生存率意義重大。由于MM的病理形態(tài)多樣、臨床特征也缺乏特異性，故容易誤診或漏診。因此，探討MM組織形態(tài)學特點并結合臨床特征、免疫組織化學染色的綜合診斷方法，是有望提高MM患者早期診斷率和生存率的關鍵點。MM的診斷和鑒別診斷中黑色素瘤單克隆抗體45(Human Melanoma Black 45，HMB45)、S100和Melan-A是經典的免疫組化染色抗體組合[7-8]，近年來一種特殊的轉錄因子Y染色體性別決定區(qū)相關高遷移率盒10蛋白(SRY-related HMG-box 10protein ，SOX10)作為黑色素細胞的標記應用已被逐漸推廣[9]，但這些MM免疫組化標記都有自己的表達特征和一定的表達盲區(qū)[10]，因此臨床病理中常常是幾種蛋白抗原相對應的抗體組合進行診斷。多發(fā)性骨髓瘤基因 (multiple myeloma oncogene1，MUM1) 是一種多發(fā)性骨髓瘤相關的癌基因，又稱干擾素調節(jié)因子4(Interferon regulator 4,IRF4)[11]，MUM1蛋白是干擾素調節(jié)因子家族中的新成員，在基因調控中起重要作用[12]。近年來已有研究發(fā)現，MUM1/IRF4在神經脊和黑色素細胞中表達[13]；IRF4基因多態(tài)性與黑色素細胞的分化發(fā)育、色素形成有關[14]；黑色素瘤的發(fā)生發(fā)展涉及到多條信號通路的異常[15]。然而，IRF4編碼的MUM1蛋白表達對黑色素瘤影響的研究較少，尤其MUM1蛋白表達與MM腫瘤細胞免疫表型的關系尚未見報道。因此，本研究通過檢測MM患者MUM1蛋白和常見的MM瘤細胞免疫表型S100、Melan-A、HMB45和SOX10的表達情況，探討MUM1蛋白在MM病理診斷評估中的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2013年3月～2018年3月某院MM手術切除的組織標本，按照2005年版惡性黑色素瘤WHO分類診斷標準[16]，選擇資料相對完整的MM患者60例，男31例、女29例，年齡23～65歲，平均(43.2±2.39)歲；病程1～5年，平均(2.78±0.89)年；病變部位在鼻腔16例，足15例，內臟黏膜15例(直腸7例、結腸8例)，眼睛5例，其他部位(如大腿、小腿等)9例；既往史有黑痣史39例，外傷史10例，其他11例；臨床分期為Ⅰ、Ⅱ期40例，Ⅲ、Ⅳ期20例。

1.2 研究方法

1.2.1免疫組織化學 石蠟包埋組織切片厚3 μm，脫蠟、水化、消除內源性過氧化物酶，采用乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraacetic acid，EDTA)pH 9.0高壓熱修復，采用Power Vision兩步法，pH7.4的0.01 mol/L磷酸鹽緩沖液(phosphate buffer saline，PBS)代替一抗作空白對照，3，3′-二氨基聯(lián)苯胺(3,3-Diaminobenzidine，DAB)顯色，Harris蘇木精復染，脫水，透明，封片。MUM1(福州邁新生物技術開發(fā)有限公司，1 ∶50)、S100、Melan-A、SOX10及HMB45(福州邁新生物技術開發(fā)有限公司，1 ∶100為單克隆抗體)均為單克隆抗體。

1.2.2研究指標 每張切片隨機選取10個高倍視野(400×)，MUM1蛋白和S100蛋白陽性信號定位于細胞核，Melan-A蛋白、HMB45蛋白及SOX10蛋白表達于細胞漿[17-18]，蛋白表達陽性率<20%定為陰性，≥20%定為陽性[19]。

1.3 統(tǒng)計學方法

2 結果

2.1 MUM1、S100、Melan-A、HMB45及SOX10蛋白表達

MUM1蛋白陽性率為51.7%(31/60)，S100蛋白陽性率為86.66%(52/60)，Melan-A蛋白陽性率為85.00%(51/60)，HMB45蛋白陽性率為93.33%(56/60)，SOX10蛋白陽性率為80.00%(48/60)。見圖1。

2.2 MUM1與S100、Melan-A、SOX10及HMB45蛋白的關系

MUM1蛋白陽性表達與Melan-A蛋白的陽性表達相關有高度統(tǒng)計學意義(P<0.01)，但與S100、SOX10、HMB45蛋白的陽性表達相關無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表1。

3 討論

MM的發(fā)生是由于各種因素導致黑色素細胞增殖失控，并不同程度地失去分化所致[20]。皮膚是MM的常見部位，眼脈絡膜MM約占眼部惡性腫瘤的5.3%，黏膜的MM約占全身各處MM的1.3%，由于MM的惡性程度高，容易早期轉移，且MM(尤其是黏膜的MM)的病理形態(tài)多樣、臨床特征往往也缺乏特異性，因此，在病理診斷中形態(tài)學特征結合臨床特征、免疫組織化學染色標記物的綜合診斷方法，是提高MM患者早期診斷率和生存率的一個關鍵點，多種特異性和敏感性高的免疫組化標記指標聯(lián)合運用，對于提高MM診斷具有重要的意義[21]。MM的診斷和鑒別診斷中HMB45、S100和Melan-A是經典的免疫組化染色抗體組合[22]。S100蛋白是一種分子量為21 000的酸性鈣結合蛋白，在MM中高表達，并且一定程度上可反映MM病情的進展；Melan-A蛋白是MM鑒別診斷中常用的敏感性和特異性都比較高的腫瘤標記物，在MM腫瘤細胞中廣泛表達，但在梭形細胞黑素瘤中敏感性差，在促纖維形成性黑素瘤中幾乎不表達；HMB45也是一種特異性抗細胞質糖蛋白(黑素小體復合物的成分之一)的單克隆抗體，在MM的診斷中具有較高的特異性和較低的敏感性，其中皮膚MM中呈強陽性表達，無色素型MM組織中陽性表達率高，但在軟組織、真皮或淋巴結內的MM中常呈陰性或弱陽性表達，在促纖維生成MM或梭形細胞黑素瘤中幾乎不表達[23-25]；SOX10蛋白是脊椎動物的一種高度保守的蛋白，是神經嵴干細胞的標志分子，SOX10蛋白信號通路常常與神經系統(tǒng)髓鞘的形成有關，是施旺細胞和黑素細胞系腫瘤更為敏感和特異的標志物，近年來作為黑色瘤的標記已經逐漸被推廣[26]。由于上述蛋白在MM中的表達特征差異，臨床病理診斷中免疫組化染色時的抗體選擇常常是幾種蛋白抗原相對應的抗體的組合，而不是單一使用所謂個別特異性和敏感性高的抗體[27]。本研究結果顯示，MUM1蛋白表達與Melan-A蛋白表達相關有高度統(tǒng)計學意義(P<0.01)，但與S100、SOX-10和HMB45表達相關無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。這些結果表明，MUM1蛋白表達與Melan-A的表達有相關性，這似乎提示MUM1蛋白可作為MM鑒別診斷的細胞免疫表型之一，對MM的診斷和鑒別診斷具有一定的價值。

圖1 MM中MUM1、S100、Melan-A、HMB45及SOX10蛋白的表達(PV，×400)

表1 MUM1蛋白表達與MUM1、S100、Melan-A、HMB45及SOX10的關系(n)