馬飛霞 盧 薈

常規(guī)手術(shù)修復(fù)肌腱后有較高比例的患者將發(fā)生肌腱粘連，嚴(yán)重影響患者肢體功能恢復(fù)，甚至部分癥狀嚴(yán)重者需再次接受松解手術(shù)。由于缺乏有效的預(yù)防粘連的方法，粘連再發(fā)的概率仍高達(dá)60%[1]。研究表明，丹參酮IIA 可以通過(guò)TGF-β/Smad 蛋白通路，抑制膠原的表達(dá)，從而減少腹腔臟器纖維化的形成[2-3]。本研究建立跟腱損傷模型大鼠，在研究丹參酮IIA對(duì)肌腱粘連的預(yù)防作用及對(duì)肌腱愈合的影響。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 12 周齡清潔級(jí)健康Sprague-Dawley（SD）大鼠20 只，雄性，初始體質(zhì)量350～400g，由浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院提供，合格證號(hào)：SCXK（浙）2014-0001，浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)審查批號(hào)2017-169，喂養(yǎng)方式及環(huán)境：普通飼料，自由飲水，溫度（22±3）℃，濕度（45±10）%。

1.2 藥物與試劑 丹參酮IIA 磺酸鈉注射液（上海第一生化和制藥有限公司，規(guī)格：2mL：10mg，批號(hào)130408）；硫酸青霉素/鏈霉素混合液（批號(hào)15140-122，規(guī)格：100mL，美國(guó)gibco 公司）；生理鹽水；碘伏；75%酒精等。

1.3 主要儀器與設(shè)備 倒置顯微鏡（Nikon，型號(hào)：TS2）；4℃藥品保存柜（PanaSonic，型號(hào)：MPR-514）；-20℃冰箱（Hair）；電子天平；一次性無(wú)菌移液管等。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 模型建立及分組給藥 將20 只大鼠編號(hào)，按隨機(jī)數(shù)表法分為觀察組和對(duì)照組，各10 只。用戊巴比妥（50mg/kg）常規(guī)腹腔注射麻醉大鼠，自動(dòng)剃毛機(jī)剔除大鼠左后肢毛發(fā)后用碘伏消毒3 次，75%酒精消毒1 次。左下肢踝部后方切開2cm 皮膚，采用改良的Rothkopf 和Perterson 實(shí)驗(yàn)性損傷法致跟腱損傷。徹底止血，用5-0prolene 縫線行改良Kessler’s 法重建跟腱。實(shí)驗(yàn)組大鼠跟腱表面及周圍組織注射0.2mL丹參酮IIA 磺酸鈉注射液，對(duì)照組大鼠注射0.2mL生理鹽水，后縫合腱鞘及皮膚。術(shù)后常規(guī)肌肉注射青霉素預(yù)防感染。下肢夾板固定3 周。第6 周處死大鼠，切取跟腱，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2 大體解剖觀察 根據(jù)Tang 等[4]的肌腱粘連評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)對(duì)觀察組和對(duì)照組大鼠肌腱粘連情況分級(jí)，其中粘連評(píng)分0 分表示無(wú)粘連，1～2 分表示輕度粘連，3～4 分表示中度粘連，5～6 分表示重度粘連。

2.3 組織學(xué)觀察 取4%多聚甲醛固定組織，脫鈣脫水，石蠟包埋切片，切片厚度5μm，行HE 染色和馬松三色法染色后觀察成纖維細(xì)胞、膠原纖維的排列情況、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)情況及肌腱和腱周組織的粘連情況。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 17.0 和Graph Pad Prism 7.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t 檢驗(yàn)，P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 丹參酮IIA 對(duì)大鼠肌腱愈合的影響 觀察組及模型對(duì)照組大鼠肌腱均順利愈合，未觀察到肌腱斷裂及局部感染、明顯畸形等情況，說(shuō)明丹參酮IIA 對(duì)肌腱愈合無(wú)負(fù)面影響。

3.2 丹參酮IIA 對(duì)大鼠肌腱粘連影響的大體評(píng)價(jià)觀察組肌腱輕度粘連3 個(gè)，中度粘連7 個(gè)，重度粘連0 個(gè)；模型對(duì)照組輕度粘連1 個(gè)，中度粘連6 個(gè)，重度粘連3 個(gè)。兩組粘連評(píng)分比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

3.3 丹參酮IIA 對(duì)大鼠肌腱粘連影響的組織學(xué)評(píng)價(jià)觀察組大鼠肌腱表面較光滑，部分樣本可見粘連組織附著，但肌腱粘連范圍較少且粘連程度較輕，肌腱與腱周組織間隙清楚，肌腱周圍肉芽組織輕度增生，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)較少，肌腱損傷處膠原纖維和成纖維細(xì)胞增加，但排列較規(guī)則。對(duì)照組大鼠腱周組織發(fā)出條索樣粘連組織附著于肌腱斷端，肌腱與腱周組織間隙存在，肌腱周圍肉芽組織增生，可見明顯炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。肌腱損傷處膠原纖維和成纖維細(xì)胞顯著增加，且排列明顯不規(guī)則。見插頁(yè)圖1-2。

表1 兩組大鼠肌腱粘連評(píng)分（只）

圖1 觀察組和對(duì)照組組織學(xué)對(duì)比

圖2 觀察組和對(duì)照組組織學(xué)對(duì)比（馬松三色法染色，×100）

4 討論

肌腱粘連作為肌腱斷裂修復(fù)術(shù)后常見的并發(fā)癥，其主要原因包括解剖因素、局部軟組織條件、手術(shù)操作過(guò)程和后期康復(fù)訓(xùn)練情況等。肌腱愈合包括兩種過(guò)程，即內(nèi)源性和外源性愈合，其中外源性愈合過(guò)度是引起肌腱粘連的主要原因，在外源性愈合過(guò)程中，成纖維細(xì)胞向肌腱損傷處生長(zhǎng)，同時(shí)局部的炎性滲出和肌腱本身的增殖愈合均為造成肌腱粘連的主要原因[5]。

丹參酮IIA 是丹參酮中的主要有效成分之一，占丹參干重的0.02%～0.32%，可參與機(jī)體多種生化反應(yīng)，具有抗炎、抑制細(xì)胞凋亡、降低氧自由基等生物作用[6]。本研究發(fā)現(xiàn)，無(wú)論從大體解剖還是組織學(xué)觀察方面，對(duì)肌腱損傷大鼠局部運(yùn)用丹參酮IIA 可減少肌腱損傷處炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，減少膠原纖維和成纖維細(xì)胞增生，從而減輕肌腱修復(fù)術(shù)后粘連。

綜上所述，應(yīng)用丹參酮IIA 可預(yù)防肌腱損傷修復(fù)術(shù)后肌腱粘連的發(fā)生，具體作用機(jī)制有待后續(xù)進(jìn)一步研究。