吳玉戈

(營口市中心醫(yī)院，遼寧 營口 115003)

免疫組化染色以及骨組織制片乃是當(dāng)前臨床中用于診斷骨腫瘤的常用且有效的操作方法，在制片操作前，需要以骨組織為對(duì)象，對(duì)其實(shí)施有針對(duì)性與目的性的脫鈣鹽處理[1]。但針對(duì)傳統(tǒng)類型的脫鈣處理方法而言，其整個(gè)操作需要花費(fèi)大量的時(shí)間，因而會(huì)造成從切片到診斷之間需要耗費(fèi)的時(shí)間被延長，這不利于臨床病理診斷的及時(shí)開展。在對(duì)臨床送檢的鈣化組織、骨組織進(jìn)行病理切片時(shí)，首先需要做的便是把骨組織進(jìn)行去鈣鹽處理，只有這樣才能制作成切片[2]。針對(duì)常規(guī)脫鈣法，其通常情況下，需要36-72小時(shí)才能完成脫鈣處理，若能在比較短的時(shí)間內(nèi)將鈣鹽脫去，并且還能消除脫鈣液對(duì)骨組織結(jié)構(gòu)可能造成的影響，獲得更加清晰的組織結(jié)構(gòu)以及更為完整的切片，乃是當(dāng)前臨床所需迫切解決的問題[3]。本文針對(duì)本院收治的骨腫瘤患者，采用經(jīng)過改良之后的快速骨組織脫鈣法進(jìn)行病理診斷，探討其應(yīng)用效果與價(jià)值，現(xiàn)報(bào)告如下。

資料與方法

1 一般資料：選取本院于2017年4月-2018年4月收治的骨腫瘤患者36例，均與骨腫瘤相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)相符[4]，排除患有心、腎等器官功能障礙者，另排除精神障礙及妊娠期婦女等。收集這36例患者的骨組織標(biāo)本，根據(jù)實(shí)際情況及需要，對(duì)各標(biāo)本實(shí)施脫鈣處理，并開展有針對(duì)性的病理切片免疫組化染色檢查。針對(duì)經(jīng)上述操作所得到的骨組織標(biāo)本，根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法進(jìn)行分組，共分為2組，每組標(biāo)本數(shù)均為18份。針對(duì)觀察組患者，其中，男性患者8例，女性患者10例，年齡區(qū)間18-74歲，平均(36.86±2.22)歲；在標(biāo)本來源中，10例患者為脛腓骨，股骨2例，指趾骨5例，椎骨1例；對(duì)照組患者中，男性患者7例，女性患者11例，年齡區(qū)間18-73歲，平均(36.81±2.20)歲；在標(biāo)本來源中，9例患者為脛腓骨，股骨3例，指趾骨4例，椎骨2例。2組年齡、標(biāo)本來源等資料經(jīng)系統(tǒng)化比較，均無明顯差異(P>0.05)。所選取患者對(duì)本次研究均知情，且簽署有知情同意書；本研究已得到倫理委員會(huì)準(zhǔn)許。

2 方法：將骨組織標(biāo)本制作成小骨塊，即1.5cm×1.5cm×0.3cm，針對(duì)對(duì)照組標(biāo)本，仍采用傳統(tǒng)形式的脫鈣法實(shí)施處理，操作流程為：取骨塊，將其以一種標(biāo)準(zhǔn)方式置入濃度為10%的硝酸當(dāng)中，以浸泡的方式進(jìn)行脫鈣處理。觀察組采用經(jīng)過改良之后的快速骨組織脫鈣法進(jìn)行處理，操作流程為：首先取適量濃度為40%的甲醛，同時(shí)取適量濃度為95%的乙醇，依據(jù)1：9的濃度比，進(jìn)行混合液的配制(200ml)，然后將配制好的混合液加入到燒杯當(dāng)中；取20ml的濃硝酸液，將其加入到上述配制好的脫鈣液當(dāng)中，在充分混勻后，便可得到脫鈣液。把制作成的小骨塊放到此脫鈣液當(dāng)中，用配套蓋子將燒杯蓋實(shí)，然后將其置于恒溫箱中(50℃-60℃)，實(shí)施恒溫加熱處理，時(shí)間為10-12小時(shí)。2組經(jīng)系統(tǒng)化檢查，證實(shí)均已完全脫鈣后，取出標(biāo)本，脫鈣完全的判斷標(biāo)準(zhǔn)為：可以將標(biāo)本輕微的彎曲，用刀片能夠比較輕松的進(jìn)行切割，以及可以比較輕易的將細(xì)針插入到標(biāo)本當(dāng)中。針對(duì)已經(jīng)被完全脫鈣處理后的標(biāo)本，都需要用流動(dòng)狀態(tài)的水進(jìn)行沖洗，時(shí)間為15-25分鐘，沖洗完成后，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方法實(shí)施脫水處理，與此同時(shí)，進(jìn)行透明處理以及包埋、病理切片；上述操作均完成后，便可以進(jìn)行免疫組化染色。

3 觀察指標(biāo)：觀察與對(duì)比2組骨組織切片質(zhì)量(評(píng)定切片完整度、薄厚情況以及形態(tài)與結(jié)構(gòu)等)及平均處理時(shí)間。

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS23.0對(duì)本次研究所得數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，針對(duì)計(jì)量資料，由(x2±s)表示，t檢驗(yàn)；若組間經(jīng)對(duì)比，存在明顯差異，由P<0.05表示。

5 結(jié)果：觀察組有比較完整的骨組織切片，而且在薄厚方面也比較均勻，厚度一般控制在3-4μm之間；不僅形態(tài)比較清晰，結(jié)構(gòu)也較為清晰，有著比較均勻一致的免疫組化染色；此外，還需要指出的是，在切片過程中，染色不容易出現(xiàn)脫落的情況，細(xì)胞核有著比較清晰的染色，邊界清晰可辨。而對(duì)于對(duì)照組標(biāo)本，其卻有著并不理想的染色，于顯微鏡直視下，能夠見到比較完整且清晰的組織結(jié)構(gòu)，但骨基質(zhì)卻有著并不好的平整性，大部分且大面積出現(xiàn)折疊、卷曲情況；此外，骨細(xì)胞還存在比較明顯的受損，有核皺縮情況，胞漿存在著并不清晰的界限，免疫染色對(duì)比度不理想；由此表明，觀察組在骨組織切片質(zhì)量方面要明顯好于對(duì)照組。觀察組平均處理時(shí)間相比對(duì)照組，明顯短于后者(P<0.05)，見表1。

表1 2組平均標(biāo)本處理時(shí)間對(duì)比

討 論

如果有著太長的脫鈣時(shí)間，那么會(huì)對(duì)染色處理效果造成較大影響，而且還會(huì)縮小細(xì)胞體積，對(duì)骨組織的病理診斷造成嚴(yán)重影響，特別是骨與關(guān)節(jié)腫瘤病變[5]。而針對(duì)改良AF硝酸脫鈣液來講，其能夠比較快速的完成脫鈣，其基本原理為：AF溶液能夠比較快速的固定骨組織，并發(fā)揮其脫水效能，在處于加熱狀態(tài)時(shí)，會(huì)加快骨組織當(dāng)中細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)活性，促進(jìn)溶液當(dāng)中鈣離子與硝酸根離子之間的充分融合，因而能夠以較快速度、較短時(shí)間將骨組織當(dāng)中的鈣離子析出，縮短脫鈣時(shí)間[6-7]。

在人體骨組織當(dāng)中，有著大量的鈣鹽，如果不對(duì)這些鈣鹽進(jìn)行處理，其便會(huì)對(duì)制片造成影響，加大制片難度，增加制片操作流程；另外，針對(duì)骨髓而言，其作為各種細(xì)胞生成與成長的始發(fā)地，細(xì)胞無論是在種類上，還是在形態(tài)上，均比較復(fù)雜，這識(shí)別會(huì)給制片、診斷造成阻礙，增加難度[8-10]。所以，在對(duì)骨組織進(jìn)行制片操作前，需要根據(jù)實(shí)際情況及相關(guān)需要，實(shí)施酸脫鈣處理，以方便實(shí)施組織切片。針對(duì)傳統(tǒng)形式的脫鈣處理來講，其有著比較長的耗時(shí)，通常情況下，所需要花費(fèi)的時(shí)間為36-72小時(shí)，有些甚至需要1-2個(gè)月，因而會(huì)對(duì)整個(gè)工作效率造成較大程度影響，并且還會(huì)嚴(yán)重影響到制片的質(zhì)量[11]。另外，還需要指出的是，針對(duì)傳統(tǒng)類型的脫鈣處理方法而言，其在進(jìn)行脫鈣操作時(shí)，比較容易損壞原本的骨組織結(jié)構(gòu)與形態(tài)，還會(huì)損傷免疫抗原，因而會(huì)對(duì)整個(gè)診斷結(jié)果造成直接影響[12]。當(dāng)采用傳統(tǒng)脫鈣方法進(jìn)行相關(guān)處理操作后，切片的薄厚無法得到保證，大多切片均比較厚，一般均>5μm，除此之外，在實(shí)施組織切片時(shí)，染色還非常容易出現(xiàn)脫落情況。本文根據(jù)實(shí)際實(shí)際操作需要，利用濃硝酸、乙醇與甲醛，制作成混合液(脫鈣液)，此溶液除了可以較好的進(jìn)行脫鈣處理外，還能根據(jù)實(shí)際需要，實(shí)施有效固定，因而可以較好的對(duì)骨組織施加保護(hù)，防止其出現(xiàn)酸損壞，具有良好的脫水作用。在實(shí)際處理操作過程中，與50℃-60℃加熱處理相搭配，可以促進(jìn)骨組織當(dāng)中的分子活化，加速其運(yùn)動(dòng)，因而可以達(dá)到推動(dòng)脫鈣液當(dāng)中鈣離子與硝酸根離子不斷結(jié)合的目的，提高脫鈣速度，加速脫鈣進(jìn)程，最終實(shí)現(xiàn)縮短脫鈣時(shí)間的效果。由本次研究結(jié)果可知，觀察組采用經(jīng)過改良的快速骨組織脫鈣法進(jìn)行處理，所得到的標(biāo)本制片質(zhì)量要明顯好于傳統(tǒng)脫鈣處理制片的對(duì)照組，而且在染色效果方面也更為突出，切片薄于對(duì)照組，脫鈣處理時(shí)間顯著短于對(duì)照組。此結(jié)果與相關(guān)報(bào)道結(jié)果相一致。

在實(shí)際利用改良AF硝酸脫鈣液時(shí)，需要特別注意如下事項(xiàng)：(1)依據(jù)骨組織標(biāo)本的大小以及骨質(zhì)疏密情況，對(duì)脫鈣時(shí)間加以明確，此外，還需明確恒溫加時(shí)時(shí)間[13]；(2)對(duì)脫鈣溫度進(jìn)行合理控制，不能太高，通常情況下，將其控制在50℃-60℃為佳；(3)針對(duì)脫鈣液當(dāng)中的硝酸來講，由于其會(huì)腐蝕恒溫箱，因此，針對(duì)脫鈣的燒杯來講，需要對(duì)其實(shí)施加蓋處理；(4)針對(duì)改良脫鈣液來講，需要保持其新鮮，以此來保證液體當(dāng)中的各成分均適當(dāng)[14-15]。

綜上所述，針對(duì)骨腫瘤患者，在對(duì)其進(jìn)行病理診斷時(shí)，通過采用經(jīng)過改良的快速骨組織脫鈣法，能夠?yàn)槠涔墙M織形態(tài)與結(jié)構(gòu)實(shí)施有效保護(hù)，還能大幅縮短脫鈣處理時(shí)間，提高切片的整體質(zhì)量，因而最終可達(dá)到縮短病理診斷時(shí)間的目的，具有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值。