云南省曲靖市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，云南 曲靖 655000

銀菊感冒膠囊為曲靖市中醫(yī)醫(yī)院的院內(nèi)制劑(批準(zhǔn)文號(hào)：滇ZJGF/2005-538)，由金銀花、菊花、射干、氨基比林、馬來酸氯苯那敏等組成，具有清熱解毒、解熱鎮(zhèn)痛的作用。臨床用于感冒、發(fā)熱、頭痛、咽喉腫痛等癥[1]。制劑中馬來酸氯苯那敏僅有薄層色譜定性鑒別，未建含量測(cè)定方法。本文參照相關(guān)文獻(xiàn)[2-4]，采用高效液相色譜法(HPLC)對(duì)該品種中馬來酸氯苯那敏含量及含量均勻度進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明本方法簡(jiǎn)單快捷，穩(wěn)定性及重現(xiàn)性較好，可有效控制銀菊感冒膠囊質(zhì)量。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Agilent1200型高效液相色譜儀(四元泵，自動(dòng)進(jìn)樣器，柱溫箱， 紫外檢測(cè)器)；METTLE MS205DU電子天平(上海梅特勒-托利多儀器有限公司)MS205DU電子天平(上海梅特勒-托利多儀器有限公司)；一體式超純水儀(PURELAB Flex 3，英國ELGA公司)。

1.2 藥品與試劑 銀菊感冒膠囊(規(guī)格0.25g/粒，批號(hào)181007、181118、181220)樣品均來自云南省曲靖市中醫(yī)醫(yī)院；馬來酸氯苯那敏(批號(hào)100047-201507，含量99.7%)購于中國食品藥品檢定研究院；乙腈為色譜純，磷酸二氫銨和磷酸為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱：Amethyst C18(4.6 mm×200 mm，5 μm)； 磷酸鹽緩沖液(取磷酸二氫銨11.5 g，加水適量使溶解，加磷酸1 mL，用水稀釋至1000 mL)-乙腈(80∶20)為流動(dòng)相；流速：1.0 mL· min-1； 柱溫：30 ℃,；檢測(cè)波長(zhǎng)：262 nm；進(jìn)樣量：10 μL。理論板數(shù)按氯苯那敏峰計(jì)算不低于4000，氯苯那敏峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合要求。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液制備 取馬來酸氯苯那敏對(duì)照品17.86 mg，精密稱定，置200 mL容量瓶中，加流動(dòng)相使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液制備 取銀菊感冒膠囊20粒，計(jì)算平均裝量，取內(nèi)容物，研細(xì)，混勻，取適量(約相當(dāng)于馬來酸氯苯那敏4 mg)，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加流動(dòng)性30 mL,超聲處理15 min,放冷，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，濾過，濾液再用0.45 μm微孔濾膜濾過，即得。

2.2.3 陰性樣品溶液制備 根據(jù)制劑處方及工藝，配制缺馬來酸氯苯那敏的陰性樣品(由云南省曲靖中醫(yī)醫(yī)院提供)，再按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備,即得。

2.3 結(jié)果

2.3.1 專屬性試驗(yàn) 在上述色譜條件下，分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果如圖1所示。結(jié)果表明，馬來酸氯苯那敏分離較好，無干擾，說明測(cè)定方法專屬性較好。

2.3.2 線性關(guān)系試驗(yàn) 精密吸取“2.2.1”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0 mL，分別置于 10 mL容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得。分別重復(fù)進(jìn)樣3次，記錄峰面積。以進(jìn)樣量X(μg)為橫坐標(biāo)，峰面積(以氯苯那敏計(jì))平均值(Y)為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：Y=9226.8829X-0.6386，r=0.999 9。結(jié)果表明，馬來酸氯苯那敏質(zhì)量濃度在0.893～44.65 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3.3 檢測(cè)限和定量限 取“2.2.1”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液適量，等倍逐級(jí)稀釋進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。當(dāng)信噪比為3∶1時(shí)，得檢測(cè)限為 2.025 ng；當(dāng)信噪比為10∶1時(shí)，得定量限為 6.211 ng。

2.3.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取經(jīng)“2.2.2”項(xiàng)方法制備的樣品(批號(hào)181007)供試品溶液，按照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行分析,分別在0、2、4、6、8、12、24 h不同時(shí)間進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果峰面積RSD為1.36%(n=7)。結(jié)果表明供試品溶液在 24 h 內(nèi)色譜峰面積變化不大，溶液較穩(wěn)定。

2.3.5 回收率試驗(yàn) 取已知含量的同一批樣品(批號(hào)：181007)5份，每份約 0.5 g，精密稱定；另取馬來酸氯苯那敏對(duì)照品 25.12 mg，精密稱定，置 25 mL容量瓶中，加流動(dòng)性使溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取 2 mL置已稱定樣品中，按“2.2.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，按照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行分析,結(jié)果見表1。

2.3.6 精密度試驗(yàn) 精密取經(jīng)“2.2.1”項(xiàng)方法制備的樣品(批號(hào)181007)供試品溶液 10 μL，按照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行分析,連續(xù)6次。結(jié)果馬來酸氯苯那敏峰面積的RSD分為0.30%，結(jié)果表明儀器平行精密度良好。

2.3.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批次的樣品(批號(hào)：181007)，平行6份(1.0 g)，精密稱定，按“2.2.1”項(xiàng)下的方法操作，按照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行分析,每1 g樣品中含馬來酸氯苯那敏 3.9424 mg，RSD為0.26%，結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

2.3.8 樣品測(cè)定 含量測(cè)定：取樣品3批次(批號(hào)181007、181118、181220)分別按“2.2.1”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，按照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行分析，計(jì)算標(biāo)示含量，結(jié)果3批樣品中馬來酸氯苯那敏的平均標(biāo)示含量分別為98.56%、98.96%、99.05%。含量均勻度測(cè)定：取3個(gè)批號(hào)的樣品各10粒，分別置于 25 mL容量瓶中，加流動(dòng)性 15 mL,超聲處理 15 min,放冷，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，濾過，續(xù)濾液再用 0.45 μm微孔濾膜濾過，濾液按照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行分析，計(jì)算標(biāo)示含量，結(jié)果見表2，符合《中國藥典》2015年版通則0941含量均勻度項(xiàng)下有關(guān)規(guī)定(A+2.2S≤ L,L=15.0)。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果 ( n=5)

表2 樣品含量均勻度測(cè)定結(jié)果 (n=3)

3 討論

3.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 通過實(shí)驗(yàn)馬來酸氯苯那敏在262.5 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，結(jié)合中國藥典及相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道[5-8]最終選用 262 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.2 提取條件選擇 試驗(yàn)中曾采用甲醇、水、乙醇、流動(dòng)相等溶媒超聲15 min，進(jìn)行提取，經(jīng)比較，以流動(dòng)相作為提取溶劑為佳；再以流動(dòng)相為提取溶劑，對(duì)同一批號(hào)樣品的超聲時(shí)間進(jìn)行考察，選擇超聲10、15、30、45、60 min后處理的樣品溶液分別進(jìn)行分析，結(jié)果各樣品含量基本接近，故選擇超聲時(shí)間 15 min處理樣品。

3.3 分離條件選擇 本試驗(yàn)曾采用了3種流動(dòng)相進(jìn)行成分分離[9-11]。①乙腈:磷酸鹽緩沖液②甲醇-水 ；③甲醇-乙腈-水。結(jié)果發(fā)現(xiàn)磷酸鹽緩沖液(取磷酸二氫銨11.5 g，加水適量使溶解，加磷酸 1 mL，用水稀釋至1000 mL)-乙腈(80∶20)為流動(dòng)相保留時(shí)間合適且各成分獲得較好的分離。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)中采用高效液相色譜法測(cè)定銀菊感冒膠囊中馬來酸氯苯那敏的含量及含量均勻度，該方法操作簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確可靠，可有效控制該制劑質(zhì)量。