陳秀麗，李永康，李沛波，彭維，蘇薇薇

(中山大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，廣東省中藥上市后質(zhì)量與藥效再評價工程技術(shù)研究中心，廣東 廣州 510275)

尿酸(uric acid,UA)是人體內(nèi)嘌呤經(jīng)代謝后的最終產(chǎn)物[1]，80%尿酸是在體內(nèi)合成，或由次黃嘌呤、黃嘌呤在黃嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XOD)的作用下分解代謝產(chǎn)生，20%尿酸由攝入食物中的核蛋白或嘌呤分解代謝產(chǎn)生[2-4]，主要經(jīng)由腎臟排泄[5-6]。體內(nèi)的尿酸代謝障礙包括尿酸的生成和排泄紊亂均會使血清中的尿酸含量升高，引發(fā)高尿酸血癥[7-8]。近年來隨著人們生活水平的提高，高尿酸血癥的發(fā)病率逐年上升，2018年我國痛風(fēng)的患病率約3%，高尿酸血癥的患病率男性約16.4%，女性約8.1%[9]。研制能抑制尿酸形成，加快尿酸代謝且不造成腎損傷，口味好的安全、有效、經(jīng)濟(jì)的健康產(chǎn)品對高尿酸血癥的預(yù)防和治療有著重要的意義。

酵素又叫酶，是生物體內(nèi)細(xì)胞產(chǎn)生的—種生物催化劑，能有效促進(jìn)生物體的新陳代謝[10-12]。微生物酵素是以新鮮蔬菜、水果為原料，經(jīng)益生菌發(fā)酵而形成的微生物制劑，具有獨特的生物活性和良好醫(yī)療保健功能[13]。研究表明微生物酵素中多種活性物質(zhì)能活化肝細(xì)胞，促進(jìn)肝細(xì)胞再生，有效預(yù)防改善脂肪肝[14-16]。

本研究所用的水果酵素醋是一種以玫瑰茄與桃金娘為主要原料，經(jīng)自然發(fā)酵及調(diào)配后制成的酵素飲料，口感芳香，酸甜爽口。玫瑰茄(HibiscusSabdariffaL.)，又稱洛神花、美麗納等，為藥食兩用植物，在我國東南沿海地區(qū)均有大面積栽培，含有豐富的有機(jī)酸、維生素C、類黃酮類等營養(yǎng)物質(zhì)，具有降血糖、降血脂、改善消化系統(tǒng)等作用[17-22]。研究發(fā)現(xiàn)，玫瑰茄可以促進(jìn)尿酸排泄[23]。桃金娘(Rhodomyrtustomentosa)，別名山稔、崗稔等，為桃金娘科桃金娘屬，分布在我國廣東、廣西、湖南、云南、貴州、福建、臺灣等地[24]。桃金娘全株皆可入藥，其成熟果實顏色呈紫紅色、多籽，富含有機(jī)酸、黃酮類、酚類等營養(yǎng)物質(zhì)[25]；具有清熱解毒、通經(jīng)活血止血、利濕止瀉等功效[26]。目前，該種類水果酵素醋在降尿酸功能方面的研究尚無文獻(xiàn)報道，本研究選其進(jìn)行降尿酸動物實驗研究，為評價其輔助降尿酸功能提供了依據(jù)，對其開發(fā)利用具有積極意義。

1 材料與儀器

1.1 實驗動物 SPF級昆明種小鼠，體重約18～22 g，由廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心提供，許可證號：SCXK(粵)2018-0002。實驗動物飼養(yǎng)于中山大學(xué)南校區(qū)時珍堂，動物使用許可證號為SYXK(粵)2014-0020，溫度為(24±2)℃。

1.2 藥物與試劑 水果酵素醋(池露牌)；苯溴馬隆(德國赫曼大藥廠，批號：1708594)；氧嗪酸鉀鹽(Aladdin公司，批號：K1829158)；UA測試盒(南京建成生物工程有限公司，批號：20190111)；肌酐(Cr)測試盒(南京建成生物工程有限公司，批號20190215)；尿素氮(BUN)測試盒(南京建成生物工程有限公司，批號：20190122)；XOD測試盒(南京建成生物工程有限公司，批號：20190115)；腺苷脫氨酶(ADA)測試盒(南京建成生物工程有限公司，批號：20190215)。

1.3 主要儀器 電熱恒溫水浴鍋(HWS24型，上海一恒科學(xué)儀器有限公司)；離心機(jī)(L400，湖南湘儀離心機(jī)儀器有限公司)；Epoch多孔超微量核酸蛋白分析儀(BioTek公司)；紫外分光光度儀(Agilent公司)。

2 實驗方法

2.1 動物分組、造模和給藥 取60只小鼠，隨機(jī)分為正常對照組、模型對照組、苯溴馬隆組(10 mg·kg-1)及水果酵素醋低(玫瑰茄5.97 g生藥/kg+桃金娘3.62 g生藥/kg)、中(玫瑰茄11.93 g生藥/kg+桃金娘7.23 g生藥/kg)、高劑量(玫瑰茄23.86 g生藥/kg+桃金娘14.46 g生藥/kg)組，每組10只。實驗前適應(yīng)環(huán)境1周，常規(guī)分籠飼養(yǎng)。除正常對照組外，其余各組每天按250 mg·kg-1的劑量腹腔注射尿酸氧化酶抑制劑氧嗪酸鉀，連續(xù)8 d，以構(gòu)建高尿酸血癥模型。每次造模后2 h，正常對照組和模型對照組給予等體積生理鹽水，其余各組按相應(yīng)劑量灌胃給藥。灌胃給藥容積均為10 mL·kg-1。末次給藥2 h后，摘眼球采血，分離血清。

2.2 指標(biāo)檢測 取小鼠血清，按試劑盒說明測定UA、BUN及Cr含量，以及XOD、ADA活性。

3 實驗結(jié)果

3.1 水果酵素醋對尿酸含量的影響 由表1可見，與正常對照組比較，模型對照組的尿酸含量顯著升高(P<0.05)，說明本造模方法能成功造成小鼠高尿酸血癥模型；與模型對照組相比，水果酵素醋低、中、高劑量組的血尿酸含量顯著降低(P<0.05)，說明低、中、高劑量的水果酵素醋能顯著降低血清中的尿酸含量。

3.2 水果酵素醋對黃嘌呤氧化酶和腺苷脫氨酶的影響 從表2可見，與正常對照組相比，模型對照組的XOD和ADA活性明顯上調(diào)(P<0.01)，表明氧嗪酸鉀可以提高小鼠XOD和ADA的活性；與模型對照組相比，水果酵素醋低、中、高劑量組和苯溴馬隆組顯著降低高尿酸血癥小鼠的XOD和ADA活性(P<0.01)。

表1 水果酵素醋對小鼠血清尿酸含量的影響

注：與正常對照組比較，*P<0.05；與模型對照組比較，#P<0.05

表2 水果酵素醋對黃嘌呤氧化酶和腺苷脫氨酶的影響

注：與正常對照組比較，**P<0.01；與模型對照組比較，##P<0.01

3.3 水果酵素醋對血清肌酐和尿素氮含量的影響 由表3可見，與正常對照組比較，模型對照組、水果酵素醋給藥組及苯溴馬隆組的血清肌酐和尿素氮水平均無明顯變化(P>0.05)。

表3 水果酵素醋對血清肌酐的影響

4 討論

氧嗪酸鉀是一種尿酸氧化酶抑制劑，可以抑制體內(nèi)尿酸的分解以提高血清尿酸濃度，給小鼠腹腔注射氧嗪酸鉀溶液是常見的高尿酸血癥造模方法之一[27-29]。本實驗研究結(jié)果表明，腹腔注射氧嗪酸鉀能使小鼠血清尿酸水平顯著升高，表明高尿酸血癥模型構(gòu)建成功；低、中、高劑量的水果酵素醋能顯著降低小鼠血清尿酸含量，具有顯著的降尿酸效應(yīng)。

黃嘌呤氧化酶是嘌呤核苷代謝途徑的限速酶，是調(diào)控尿酸生成的最終環(huán)節(jié)，在高尿酸血癥的發(fā)病中占主導(dǎo)地位[30]。XOD可以連續(xù)氧化黃嘌呤和次黃嘌呤生成尿酸，直接調(diào)控尿酸的轉(zhuǎn)變，其活性增強(qiáng)可加速尿酸生成[31-33]。ADA可催化腺苷生成肌酐，然后肌酐經(jīng)核苷磷酸化酶轉(zhuǎn)化為次黃嘌呤。最終被XOD轉(zhuǎn)化為尿酸[34]。本實驗以研究血清中XOD和ADA的活性來探討水果酵素醋降低體內(nèi)血尿酸的機(jī)制。結(jié)果表明，模型組血清中XOD和ADA的酶活性顯著升高。水果酵素醋3個劑量組的XOD和ADA酶活性均顯著降低，說明水果酵素醋可通過抑制XOD和ADA的酶活性，減少小鼠體內(nèi)尿酸的形成，從而降低血尿酸水平。

臨床上，血肌酐是評價腎功能的重要指標(biāo)，其含量升高意味著腎功能的損傷[35-36]。BUN是判斷腎小球濾過功能的指標(biāo)，能較為準(zhǔn)確地反映腎實質(zhì)受損的情況[37]。尿素氮從腎小球濾過而排出體外。在腎功能不全失代償時，BUN將升高。在本實驗中，各試驗組小鼠的Cr及BUN含量均無明顯變化，說明氧嗪酸鉀、苯溴馬隆及水果酵素醋不會造成小鼠腎功能損傷。